Indução de síndrome nefrótica em camundongos por injeção Retrobulbar de doxorrubicina e na prevenção da retenção de Volume por liberação sustentada aprotinina

Resumo

Aqui, descrevemos a indução de síndrome nefrótica experimental em ratos 129S1/SvImJ por injeção retrobulbar rápida de doxorrubicina. Também tratamos nefrótico ratos com pelotas de liberação sustentada contendo aprotinina para inibir a atividade de protease de serina urinária e evitar a retenção de sódio.

Resumo

Síndrome nefrótica é a manifestação mais extrema da doença renal contraste e caracterizado por pesados proteinúria, hipoalbuminemia e edema devido à retenção de sódio e hiperlipidemia. Para estudar a fisiopatologia desta síndrome, desenvolveram-se modelos de roedores baseiam na injeção de substâncias tóxicas como doxorrubicina, causando danos podocyte. Em camundongos, apenas algumas cepas são suscetíveis a este modelo. Em sua 129S1/SvImJ ratos, a administração de doxorrubicina por injeção intravenosa rápida para o seio de retrobulbar induz a síndrome nefrótica experimental que apresenta todos os sintomas das doenças humanas, incluindo edema e retenção de sódio. Após o início da proteinúria, exposição de ratos aumentou a atividade de protease de serina urinária que leva à ativação do canal de sódio epitelial (ENaC) e retenção de sódio. Inibição farmacológica de proteases de serina urinária pelo tratamento com liberação sustentada aprotinina revoga ativação ENaC e evita a retenção de sódio. Este modelo é ideal para estudar a fisiopatologia da proteasuria, i. e., a excreção de ativo Serina proteases que causam ENaC ativação pela proteólise de sua subunidade γ-. Isto pode ser considerado como o principal mecanismo de ativação ENaC e retenção de sódio na doença renal de contraste.

Introdução

Síndrome nefrótica é caracterizada por hiperlipidemia, hipoalbuminemia, edema e proteinúria pesada e pode ser considerada como a manifestação mais extrema da doença renal de contraste. Em roedores, síndrome nefrótica experimental pode ser induzida por injeção única de antraciclinas ou puromicina que leva a danos podocyte e assemelha-se a doença humana mudança mínima e glomeruloesclerose segmentar (FSGS)¹. Após sua primeira descrição em 1955 por Frenk et al. ², nefrose de puromicina nucleosídeos (PAN) em ratos tornou-se um modelo padrão para investigar a fisiopatologia da síndrome nefrótica em numerosos estudos

Protocolo

Todos os métodos foram conduzidos de acordo com os institutos nacionais de saúde guia para o cuidado e uso de animais de laboratório e a lei alemã para o bem-estar dos animais, e que foram aprovadas pelas autoridades locais (Regierungspräsidium Tübingen).

1. indução de síndrome nefrótica Experimental por injeção de doxorrubicina para o seio de Retrobulbar

1. Prepare uma seringa de 0,5 mL, com uma cânula de 30g montado, marcando a posição de parada do pistão.
2. Calcule o volume de injeção de doxorrubicina para macho (7,25 µ l/g peso corporal (PC) igual a doxorrubicina de bw 14,5 µ g/g) e ratos fêmeas (6,9 µ l/g bw igual a doxo....

Resultados

Após a indução de isoflurano narcose, doxorrubicina rapidamente foi injetada através do seio esquerdo retrobulbar. Todo o volume de 7,25 µ l/g bw foi injetado sem qualquer resistência e extravasamento provando corrigir localização venosa da cânula. O mouse recuperou de narcose rapidamente e não tinha nenhuma imparidade naquele dia e depois disso. Particularmente, não havia nenhum sinal de danos no olho esquerdo. Depois de doxorrubicina injeção, comida e líquido consumo caiu sobre os 3 pri.......

Discussão

Aqui, demonstramos que a injeção de doxorrubicina através da injeção de sinus retrobulbar induz síndrome nefrótica experimental em ratos 129S1/SvImJ com proteinúria, retenção de sódio, hypoalbumenia e hiperlipidemia. No entanto, existem dois problemas críticos que devem ser levadas em conta ao usar este modelo. Em primeiro lugar, a indução de modelo estritamente é dose dependente e desvios da dose de doxorrubicina tão pequena quanto 0,3 µ g/g afetam a resposta dos ratos¹⁵. Quando injetado com uma .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
supplies
BD Micro FINE + U-40 (0,30 mm x 8 mm)	BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Alemanha	PZN: seringa 07468060
ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm)	Johnson& Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Alemanha)	EH7823H	sutura
Nome	>Empresa	Número de catálogo	Comentários
reagentes
aprotinina (6000 KIU/mg)	LOXO, Heidelberg, Alemanha	CAS 9087-70-1
Bepanthen, Augen- und Nasensalbe	Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Alemanha	PZN:	pomada
Chromogenix S-2251	HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Alemanha	82 0332 39	substrato cromogênico
doxorrubicina (2.0 µ g/µ L)	Cell Pharm, Bad Vilbel, Alemanha	CAS 25316-40-9	doxorrubicina
isofluran CP (1 mL / mL)	CP-Pharma, Burgdorf, Alemanha	CAS 26675-46-7	pellets de isofluran
com liberação sustentada acionada por matriz (feito sob medida)	Innovative Research of America, Sarasota, FL	X-999	pellet
Nome< / strong >	< strong > Empresa < / strong>	Número de catálogo	Comentários
equipment
ELx808 Absorbance Mikroplate Reader	BioTek, Bad Friedrichshall, Alemanha	ELx808	leitor de microplacas
MICROSTERIL - 436	B.M.S., Trescore Balneario, Itália	Esterilizador GAL/436
Forno de hibridização/ agitador	GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, Reino Unido	de calor	RPN 2511
Thermo MAT Pro 10 W, 15x25 cm, Lucky Reptile	Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Alemanha	61201	dispositivo de aquecimento de mouse

1578681 Câmara