ドキソルビシンの球後注射と徐放性アプロチニンによるボリューム保持の予防によるマウスのネフローゼ症候群の誘導
Summary
ここでは、ドキソルビシンの急速な球後注射による 129S1/SvImJ マウスにおける実験的ネフローゼ症候群の誘導について述べる。また、尿中のセリン プロテアーゼ活性を阻害し、ナトリウム保持を防ぐためアプロチニンを含む徐放性ペレットとネフローゼ マウスを取り扱っています。
Abstract
ネフローゼ症候群は、漏出腎臓病の最も極端な現れであるし、大量の蛋白尿、低アルブミン血症、およびナトリウム保持と高脂血症による浮腫によって特徴付けられます。この症候群の病態生理を研究するには、齧歯動物モデルが開発されているは、ドキソルビシン ポドサイトのダメージなどの有害物質の注入に基づいています。マウスでこのモデルに数株のみを受けます。球後洞に急速静注によるドキソルビシンの投与は、野生型 129S1/SvImJ マウス実験的ネフローゼ症候群の機能のナトリウム保持と浮腫を含む人間の病のすべての症状を誘導します。蛋白尿発症後マウスの展示は上皮性ナトリウム チャネル (ENaC) とナトリウム保持の活性化につながる尿セリン プロテアーゼ活性を増加しました。徐放アプロチニン投与による尿のセリーンのプロテアーゼの薬理学的抑制は ENaC 活性化を放棄し、ナトリウム保持を防ぎます。このモデルは、proteasuria、すなわちの病態を検討する最適。、、分解物中の γ サブユニットの ENaC を活性化をさせるアクティブなセリンプロテアーゼの排泄。これは ENaC 活性化と漏出腎のナトリウム保持の主要なメカニズムとしてみなすことができます。
Introduction
ネフローゼ症候群は、大量の蛋白尿、低アルブミン血症、浮腫、高脂血症、によって特徴付けられるおよび漏出腎臓病の最も極端な症状としてみなすことができます。齧歯動物、実験的ネフローゼ症候群は、アンスラサイクリンまたはピューロマイシン ポドサイト損傷につながるし、人間の微小変化群と巣状分節性 (FSGS)1のような 1 回の注射で誘導できます。後 Frenkらにより 1955 年にその最初の説明です。2、ピューロマイシン ヌクレオシド ネフローゼ症候群 (PAN) ラット多数研究3,4,5,6のネフローゼ症候群の病態生理学を調査する標準的なモデルとなっています。マウスでは、アントラサイクリン系のドキソルビシン7対応するモデルを誘起することができます。しかし、遺伝子は、少なくとも 2 つの遺伝子座8によって決まります強いひずみ依存があります。さらに、漏出応答とネフローゼ症候群9,10のコースの違いがあります。尿蛋白反応球後洞経由 129S1/SvImJ マウスとドキソルビシンの急速な静脈内注入を使用して、ボリュームの保持によって特徴付けられる特にネフローゼ症候群の典型的な特徴を誘導するのに十分な値に達する腹水とほぼナトリウム無料尿7。実験的ネフローゼ症候群におけるナトリウム保持と推定されている遠位尿細管の上皮性ナトリウム チャネル (ENaC) の活性化の結果であるプラスミンの γ サブユニットの 4の分解を引き起こすなど異常フィルターのセリーンのプロテアーゼによって ,11,12。最近では、この概念は、ネフローゼ マウス蛋白分解 ENaC 活性化ナトリウム保持から ENaC ブロッカー アミロライド13として同様に有効であったセリン プロテアーゼ阻害剤アプロチニン投与によって保護された証明されました。遠位尿細管に継続的に提供できるように、アプロチニンは、徐放性皮下埋め込むペレット経由で投与されました。将来の研究は、人間の状況をパラレルに考えられるネフローゼ症候群における蛋白分解 ENaC 活性化を担当するセリンプロテアーゼを識別する必要があります。このため、ドキソルビシン誘発性ネフローゼ症候群は野生型マウスで使用か遺伝子改変マウスに拡大することができます貴重なモデルです。その利点には、薬物の低コスト、管理の良い再現性14低複雑さが含まれて。
この記事で球後洞にドキソルビシンの急速な静脈内注射して尿のセリンプロテアーゼを阻害するアプロチニンを含む徐放性ペレットの注入実験的ネフローゼ症候群の誘導を示すアクティビティ発色アッセイで測定しました。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここでは、ドキソルビシン洞の球後注射注入は、蛋白尿、ナトリウム保持、hypoalbumenia 高脂血症と 129S1/SvImJ マウスにおける実験的ネフローゼ症候群を誘導することを示す.ただし、このモデルを使用する場合を考慮する必要がある 2 つの重要な問題があります。まず、モデルの誘導は厳密には用量依存性とドキソルビシン線量 0.3 μ g/g のような小さな偏差マウス15の応答に影?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
本研究は、ドイツ研究振興協会 (DFG, AR 1092/2-1) からの助成金によって支えられました。
Materials
| supplies | |||
| BD Micro FINE + U-40 (0.30 mm x 8 mm) | BD Deutschland GmbH, Heidelberg, Germany | PZN: 07468060 | syring |
| ETHILON*II (5/0, 16 mm, 3/8c, 45 cm) | Johnson&Johnson Medical GmbH, Ethicon Deutschland, Norderstedt, Germany) | EH7823H | suture |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| reagents | |||
| aprotinin (6000 KIU/mg) | LOXO, Heidelberg, Germany | CAS 9087-70-1 | |
| Bepanthen, Augen- und Nasensalbe | Bayer Vital GmbH, Leverkusen, Germany | PZN: 1578681 | ointment |
| Chromogenix S-2251 | HAEMOCHROM DIAGNOSTICA GmbH, Essen, Germany | 82 0332 39 | chromogenic substrate |
| doxorubicin (2.0 µg/µL) | Cell Pharm, Bad Vilbel, Germany | CAS 25316-40-9 | doxorubicin |
| isofluran CP (1 mL/mL) | CP-Pharma, Burgdorf, Germany | CAS 26675-46-7 | isofluran |
| pellets with matrix-driven sustained release (custom-made) | Innovative Research of America, Sarasota, FL | X-999 | pellet |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| equipment | |||
| ELx808 Absorbance Mikroplate Reader | BioTek, Bad Friedrichshall, Germany | ELx808 | microplate reader |
| MICROSTERIL – 436 | B.M.S., Trescore Balneario, Italy | GAL/436 | sterilizer |
| Hybridization oven/shaker | GE Healthcare UK Limited, Amersham LIFE SCIENCE, Little Chalfont, UK | RPN 2511 | heat chamber |
| Thermo MAT Pro 10 W, 15×25 cm, Lucky Reptile | Import Export Peter Hoch GmbH, Waldkirch, Germany | 61201 | mouse warming device |
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