一种新的单动物运动功能跟踪系统, 使用简单、易于使用的软件
Summary
目前的研究旨在自动化对大鼠运动缺陷的量化。最初的评估模型评估电机皮质 intracortical 微电极植入引起的马达损耗。我们报告的开发和使用的跟踪算法使用易于适应, 简单, 易于使用的编码软件。
Abstract
我们最近证明, 植入 intracortical 电极在大鼠的运动 corteces 导致立即和持久的运动缺陷。通过露天场网格测试, 通过一个测量总马达功能的运动损伤, 通过阶梯测试测量电机的精细功能。在这里, 我们讨论了一个技术, 自动量化的视频记录测试使用我们的定制 Capadona 行为视频分析系统: 网格和梯子测试, 或 BVAS。利用简单和易于使用的编码软件 (见材料表), 这个程序允许跟踪一个单一的动物在开放的领域网格和梯子测试。在开放域网格跟踪中, 代码阈值视频的强度, 跟踪大鼠的位置在3分钟的网格测试期间, 并分析路径。它然后计算和返回测量的总距离, 达到的最大速度, 左和右转数, 和网格线的总数量的大鼠。在梯子跟踪, 代码再次阈值视频的强度, 跟踪移动的大鼠在梯子上, 并返回计算的测量, 包括时间花了大鼠穿过梯子, 在飞机下发生的爪子滑的数量阶梯梯级, 以及由于停滞或逆转而导致的失败的发生率。我们设想在这里开发的 BVAS 可以用于分析各种应用中的运动功能, 包括许多损伤或疾病模型。
Introduction
有许多建立的方法来评估功能和行为马达和认知障碍1,2,3。一些比较常用的方法包括通过爪子放置、步进和在梯子试验4上的肢体协调来测试精细的马达功能,通过野外网格测试测试总马达功能和应力行为5 ,6, 并通过强制游泳测试7,8或转子杆9测试恐惧, 抑郁症和绝望。然而, 许多这些方法依赖于人类研究人员 “评分” 动物或判断其表现主观。对主观的人的评估的需要可能减慢数据的世代和分析, 并且当前机会为研究偏见的故意或无意的影响在研究10。此外, 对数据的主观评估也带来了不准确的数据表示的风险, 无论是通过健忘、不良动机、不当训练, 还是过失11。
我们最近报告了在植入 intracortical 电极12,13的大鼠的开放田间网格试验和阶梯试验的使用。由于这些研究发现的新颖性, 我们立即开始在实验室进行的许多研究中使用这些和额外的功能测试。由于主观评价者数量的增加而导致的无意的人为产生的变异性, 并为了提高分析吞吐量, 我们着手创建一个自动化的、计算机辅助的程序来评分行为测试,并极大地限制了误差的可能性。
在这里, 我们报告 BVAS 的发展。BVAS 采用计算机分析法, 分别将野外网格测试和梯形测试作为总的和精细的运动函数的度量。这些结果可以用来阐明可能的运动功能缺陷造成的伤害或疾病, 无论是伤害或疾病模型。分析代码可以调整, 以解释行为测试设备的变化或得分的各种指标的运动功能。因此, BVAS 可以在许多应用中实现, 超出了我们的预期用途, 也可用于其他实验室目前使用的那些。
请注意, 打开的字段网格和梯形测试需要视频录制。因此, 每个测试都需要一个摄像机 [1080 p, 最少15帧每秒 (fps)], 一台笔记本电脑, 和一个存储视频数据的房间。对于这两种测试, 把相机放在一个中心位置, 使整个设备可以在框架上看到。将相机固定在三脚架或脚手架上, 以便在测试期间不移动。尽量保持视频帧的边缘与测试设备的边缘平行。确保相同的人员完成所有测试, 房间是良好的照明与温度控制系统。在整个测试过程中, 对所有动物使用相同的房间, 对房间进行最小的更改。谷物或香蕉薯片可以奖励动物完成行为测试。
Protocol
Representative Results
Discussion
该协议最关键的部分, 以确保强大的分析是一致的拍摄。如果视频是很好的灯光和拍摄在正确的位置, 正如在第一部分讨论的协议, 系统将能够做一个精确的分析。与任何图像处理问题一样, 在预处理过程中完成的工作将使后处理更加准确和简单。因此, 确保仪器和动物在测试过程中有良好的光照, 并且在框架中的任何阴影或其他运动保持在最低限度, 这意味着 BVAS 可以在更高的精度水平上运行。
…Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项研究得到了 B1495-R (杰弗里 r. Capadona) 和美国退伍军人事务部的科学家和工程师 (美国青年) (杰弗里 r Capadona) 总统早期职业奖的支持。研究开发服务。此外, 这项工作还部分由主管卫生事务的助理国防部长办公室通过经同侪审查的医学研究计划获得支持。W81XWH-15-1-0608。作者承认其暑期研究资助的资金来源。这些内容不代表美国退伍军人事务部或美国政府的意见。作者感谢博行荒川在 CWRU 啮齿动物行为核心为他的指导设计和测试啮齿动物行为协议。作者还要感谢 CWRU 机械和航空工程系的詹姆斯. 德雷克和凯文. 他在设计和制造啮齿动物阶梯试验方面的帮助。
Materials
| Sprague Dawley rats, male, 201-225g | Charles River | CD | |
| Webcam HD Pro c920 | Logitec | 960-000764 | |
| Excel | Microsoft | N/A | |
| Matalb 2017a, Computer Vision System Toolbox | Mathworks | N/A | |
| Open field grid test | Made in-house at Case Western Reserve University | N/A | |
| Ladder test | Made in-house at Case Western Reserve University | N/A |
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