Paracrine juxtacrine 세포 상호 작용 종양 진행, 면역 반응, 신생, 개발 등 많은 생물 학적 과정에 중요 한 역할을 한다. 여기, 인접 문화 메서드 secreted 요소의 지역화 된 농도 세포에 직접 접촉을 방지 하는 동안 유지 됩니다 paracrine 신호 연구에 사용 됩니다.
세포 상호 작용은 종양 진행, 면역 반응, 신생, 개발 등 많은 생물 학적 과정에 중요 한 역할을. Paracrine 또는 juxtacrine 신호 같은 상호 작용을 중재 한다. 바른된 매체 및 coculture 연구의 사용은 이러한 두 가지 유형의 상호 작용 사이 감 별 하는 가장 일반적인 방법입니다. 그러나, paracrine 상호 작용 동안에 microenvironment에 분 비 요인의 지역화 된 높은 농도의 효과 조절된 매체에 의해 정확 하 게 지 하지 고, 따라서, 부정확 한 결론으로 이어질 수 있습니다. 이 문제를 해결 하려면 우리 paracrine 신호를 공부 하는 인접 문화 방법을 고안 했다. 두 셀 형식 0.4 µ m 모와 10 µ m 두께 폴 리카 보 네이트 막의 어느 표면에 성장 된다. 모 공 분 비 요인의 교환을 허용 하 고, 동시에 juxtacrine 신호 하는 것을 억제. 셀 수 수집 되며 paracrine 신호의 효과 결정 하기 위해 끝점에서 lysed. 분 비 요인의 지역화 된 농도 기울기에 대 한 수 있도록, 뿐만 아니라이 방법은 의무가 억제제의 사용 뿐만 아니라 문화의 연장된 기간을 포함 하는 실험 이다. 우리가 난소 암 세포와 전이의 사이트에서 발생 하더라도 mesothelial 세포 간의 상호 작용을 공부 하려면이 메서드를 사용 하 여, 하는 동안 그것은 연구자 paracrine 신호 다양 한 분야에서 연구에 대 한 어떤 두 부착 세포 유형 적응 시킬 수 있다 종양 microenvironment, 면역학, 및 개발을 포함 하 여.
암 세포와 종양 진행 성에 서 종양 microenvironment 간의 생산적인 상호 상호 작용의 역할을 잘 설립 되었습니다 그리고 암 생물학1연구의 주요 초점 되고있다. 상처 치유, 면역 반응, 신생, 줄기 세포 벽, 그리고 개발2,,34,,56 양방향 신호에의 유사한 인스턴스는 중요 한 , 7 , 8.이 모든 생물 학적 과정에 공통 주제는 셀 셀 운명, 조직 생리학, 및 질병의 진행을 결정 하는 그들의 microenvironment에서 extracellular 신호를 다양 한 방법으로 응답. 따라서, 초점 같은 셀 셀 통신에 관련 된 메커니즘의 더 나은 이해를 개발 하는 쪽으로 점점 돌았다. 이러한 상호 작용의 대부분 paracrine 또는 juxtacrine 세포 사이 신호를 포함 한다. Paracrine 신호 juxtacrine 반면9,10, 그것에 대 한 응답을 트리거하는 근처에 다른 셀에 해당 수용 체에 의해 인식 되는 한 특정 신호 요소의 분 비를 포함 한다 신호 두 셀 관련된11,12의 세포질 구성 요소 간의 직접 접촉을 해야합니다.
이러한 신호 종양 microenvironment에서 뿐만 아니라 조직 항상성에 중요 한 구성 요소입니다. 암 세포 종양 기질, 암 관련 된 섬유 아 세포 (CAFs), adipocytes13,,1415,16, 면역 세포 등의 세포에서 paracrine 및 juxtacrine 요인 으로부터 혜택을. Paracrine 신호 juxtacrine 신호 하는 것은 juxtaposed ligands 노치 신호, 또는 integrins 및 그들의 각각 사이 상호 작용 수용 체를 포함 하는 동안 성장 인자, cytokines, 발산, 등에 의해 중재 될 수 있습니다. 세포 외 기질 단백질입니다. 우리는 종양 진행 및 전이14난소 암 세포 및 CAFs 사이 상호 상호 작용의 중요성을 증명 하고있다. 마찬가지로, metastasizing 난소 암 세포 전이의 사이트 취재 mesothelial 세포와의 상호 작용을 규제 키 microRNAs 전이성 식민17, 를 승진 시키는 암 세포에 녹음 방송 요인 18.
Paracrine 신호에 대부분 연구 조건된 매체와 두 번째 셀 유형을 치료 하 한 셀 형식에서 수집 된의 사용을 포함 한다. 이 방법은 널리 이용 되는, 하는 동안 그것은 효과적으로 받는 셀의 microenvironment에 secreted 요소의 지역화 된 고 농도 레벨을 복제 하지 않습니다. 그것은 또한 재현 한 세포에 의해 생산 되는 secreted 요소의 연속 흐름의 활동에 실패 하 고 인접 셀을 받은. Paracrine 신호 secreted 요소 소스 셀 근처만 필요한 농도 고 무마 하 고 밖으로 희석 거리 증가 하는 경향이 짧은 거리에 효과적 이다. 이 지역화 된 높은 농도의 secreted 요소 수용 체 셀에 응답 필수적입니다. 또한, 응답 받는 사람 세포에 새로 분 비 요인과 저하, 바인딩, 및 받는 사람 세포와 소스 셀에서 확산에 국제화를 통해 그들의 지속적인 고갈의 균형에 의존 이기도합니다. 바른된 매체 높은 지역화 된 농도 microenvironment에 대 한 계정에 집중 될 수 있지만 그 정확 하 게 정확한 농도 복제할 수 없습니다. 또한, 그것은 생산의 자연 활동 및 관련된 요인의 고갈 모방 수 없습니다. 더 정확 하 게 복제 paracrine 신호 juxtacrine 신호 메커니즘에서에서 분리, 우리는 성장 하는 다공성 막의 어느 표면에 2 개의 세포 유형 포함 소설 인접 문화 방법의 고안 했다. 숨 구멍은 충분히 juxtacrine 상호 작용을 방지 하 고 아직 지역화 된 높은 농도에서 분 비 요인의 교류를 허용 하는 작은. 그런 식으로,이 시스템 생산의 활동 그리고 paracrine 요인의 소모를 유지합니다.
Paracrine juxtacrine 세포 사이 신호의 메커니즘을 이해 하는 것은 정상 조직의 항상성 및 질병 조건7,8의 더 나은 지식을 개발 필수적입니다. 대부분 paracrine 신호를 수집 하 여 연구를 실시 한 셀에서 다른 셀 형식 치료를 사용 하 여 중간 조절. 이 메서드는 고유의 단순에는 이점이 있다. 그러나, 그것 않습니다 하지 정확 하 게 정리 휴대 전화 microenvironment에 …
The authors have nothing to disclose.
우리는이 실험에 대 한 조직 컬렉션에 그들의 참여에 대 한 환자에 게 빚을입니다. 국방부 OCRP 난소 암 아카데미 상 (W81XWH-15-0253) 및 Anirban K. 미트 라에 콜린의 꿈 재단에서 파일럿 수상이이 연구 지원.
24 mm Transwell permeable support with 0.4 µm Pore Polycarbonate Membrane Insert | Corning (Costar) | 3412 | • 10 µm thick translucent polycarbonate membrane • Treated for optimal cell attachment • Packaged 6 inserts in a 6 well plate, 4 plates per case • Membrane must be stained for cell visibility • Sterilized by gamma radiation |
6 well plate | Corning (Falcon) | 353046 | Flat Bottom, TC-treated, sterile, with Lid |
15 cm culture dish | Corning (Falcon) | 353025 | Sterile, TC-treated Cell Culture Dish |
DMEM | Corning (Cellgro) | 10-013-CV | |
Penicillin Streptomycin | Corning | 30-002-CI | |
MEM Nonessential amino acids | Corning (Cellgro) | 25-025-CI | |
MEM Vitamins | Corning (Cellgro) | 25-020-CI | |
0.25% Trypsin, 2.21 mM EDTA | Corning | 25-053-CI | |
Fetal bovine serum | Atlanta Biologicals | S11150 | |
Pipets | Any make is fine | ||
CO2 Incubator | Any make is fine | ||
Biosafety level II cabinet | Any make is fine | ||
FN1 TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs01549976_m1 | |
TGFB1 TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs00998133_m1 | |
CDH1 TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs01023895_m1 | |
GAPDH TaqMan Gene Expression Assay | ThermoFisher Scientific | Hs99999905_m1 | |
miRNeasy mini RNA isolation Kit | Qiagen | 217004 | |
High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | ThermoFisher Scientific | 43-688-13 | |
HeyA8 ovarian cancer cells | Obtained from Ernst Lengyel Lab, University of Chicago | ||
TGFβ Neutralizing Antibody | R&D Systems | MAB1835-100 |