Formato di Acinus ghiandola Hypopharyngeal misurazione in lavoratori ape del miele (mellifera di Apis)

Summary

Dimensione di acinus ghiandole ipofaringee è una misura robusta di nutrizione di ape miele infermiera. Qui, forniamo un protocollo dettagliato per dissezione, colorazione, imaging e misurazione dei acini infermiera ape hypopharyngeal ghiandola.

Abstract

Le ghiandole ipofaringee infermiera producono la frazione proteica del lavoratore e pappa reale che viene alimentata per lo sviluppo di larve e regine. Queste ghiandole accoppiate che si trovano nella testa dell’ape sono altamente sensibili alla quantità e qualità del polline e polline sostituisce che consuma l’ape infermiera. Le ghiandole diventano più piccole quando gli infermieri sono alimentati le diete carenti e sono grandi quando sono alimentati le diete complete. Perché infermiere hypopharyngeal ghiandola dimensione è un indicatore robusto di nutrizione di infermiera, è essenziale che coloro che studiano miele ape nutrizione sanno come misurare queste ghiandole. Qui, forniamo metodi dettagliati per dissezione, colorazione, imaging e ghiandole ipofaringee delle API di infermiere di misura. Vi presentiamo i confronti del tessuto macchiato e non macchia e dati che sono stati usati per studiare l’impatto di polline sulle dimensioni della ghiandola. Questo metodo è stato utilizzato per testare come dieta impatti dimensioni ghiandole ipofaringee ma ha ulteriore uso per comprendere il ruolo di queste ghiandole nella salute di alveare.

Introduction

API del miele sono essenziali per l’agricoltura perché impollinano una varietà di colture che sono consumati dagli esseri umani e animali. Molta attenzione è stato pagato al declino delle popolazioni di API del miele come Colonia perdite al passaggio del mouse intorno 30-40% ogni anno negli Stati Uniti d’America¹ e 10 – 15% in Europa^2,3. Molteplici fattori, tra cui accesso limitato all’alta qualità del foraggio, probabile atto insieme a compromettere la salute delle API di miele. Monocoltura, siccità, pratiche di apicoltura insostenibile e altri fattori diminuiscono la diversità e la quantità di Pollini naturale disponibile a colonie^4,5. Poiché le API il miele quasi tutte le loro proteine alimentari e lipidi derivano da polline, accesso ridotto al polline può limitare severamente la salute individuale e Colonia.

Le ghiandole ipofaringee sono secretive strutture situate nella testa dell’ape tra gli occhi e il cervello⁶. In circostanze normali, la traiettoria evolutiva e funzionale delle ghiandole specchio che l’ape si trovano in. A circa 5 – 10 giorni di età, l’ape esegue comportamenti di professione d’infermiera nell’alveare. In questo stesso momento, le ghiandole ipofaringee raggiungono loro dimensioni massime e la capacità secretiva, producendo la frazione di proteina principale dell’alimento di covata o gelatina alimentati per lo sviluppo di larve e altri adulti, come la regina. In questa dimensione di picco le ghiandole assomigliare ad un grappolo d’uva dove ogni acino è una struttura di lobo discreti conosciuta come il acinus (plurale: acini). Come l’ape operaia età e assume diversi compiti nell’alveare, le ghiandole ipofaringee strizzacervelli e assumono funzioni diverse, come abbattere gli zuccheri in nettare^7,8. Le ghiandole ipofaringee pertanto sono correlate con l’età l’ape e il loro compito di età-collegato.

Dimensione della ghiandola infermiera hypopharyngeal è sensibile alla quantità e qualità delle proteine nella loro dieta^9,10,11. Quando le API infermiere sono ben nutrite, le loro ghiandole sono grandi. Considerando che, le ghiandole sono piccole quando l’ape è privata di polline, specialmente nella prima settimana di sviluppo adulto. Al fine di determinare lo stato nutrizionale di un ape di infermiere, i ricercatori in genere misurano le ghiandole ipofaringee, sia misurando direttamente la ghiandola acinus dimensione^11,12,13,14 o proteina contenuto^15,16 o misurando la proteina contenuto¹¹ o peso fresco¹⁷ dell’intera testa in cui si trovano. Ogni metodo ha i suoi pro e contro. Noi preferiamo la risoluzione ottenuta dalla misurazione dei acini della ghiandola, anche se questo metodo può essere impegnativo in due modi principali. La prima sfida è correttamente identificare e sezionare la ghiandola. Il secondo è l’ottenimento di una misura accurata di ogni acinus. Microscopio ottico per dissezione, le ghiandole appaiono chiaro o lattiginoso bianco e i bordi degli acini possono essere difficili da definire. Avere strumenti per meglio definire il bordo degli acini e per aumentare la probabilità di ottenere misurazioni accurate della ghiandola è vantaggioso per chi studia miele ape nutrizione.

Qui, indichiamo i ricercatori interessati come sezionare, macchia, immagine e misurare le ghiandole ipofaringee affinché misure accurate delle dimensioni di acinus possono essere raggiunto. Il metodo che descriviamo offre ai ricercatori un metodo semplice, accurato e replicabile per realizzare misurazioni multiple di ghiandola in un relativamente breve periodo di tempo una volta che lo sperimentatore è sufficientemente praticato. Uno potrebbe misurare con fiducia le ghiandole di quasi 10 individui in poco più di un’ora. Offriamo dettagli sul metodo e materiali necessari per ottenere queste misurazioni. La corretta dissezione e colorazione delle ghiandole sono gli aspetti più importanti dei metodi descritti di seguito. Anche se abbiamo catturare le immagini ingrandite e misurare gli acini con software commerciale, i metodi che vi presentiamo possono essere facilmente adattati per altre piattaforme¹⁸.

Protocol

1. di dissezione e la macchiatura le ghiandole ipofaringee da infermiera lavoratori Fare un piatto di dissezione di cera per fusione cera ambiente fresco in un piccolo (60 mm x 15 mm) o un bicchiere di grandi dimensioni (100 mm x 15 mm) piastra di Petri. Raffreddare la cera completamente prima di utilizzare la piastra per le dissezioni. Per ogni ape da elaborare, preparare 20 µ l di un 01:20 Giemsa soluzione di lavoro (01:20 v/v di preparati di Giemsa in tampone fosfato salino (PBS: 137 mM NaCl, 2.7 …

Representative Results

Ghiandole ipofaringee sono stati sezionati da infermiera lavoratori e visualizzati con e senza macchia a 60 – 80 ingrandimenti (Figura 1). Nel tessuto senza macchia, è difficile trovare adeguato contrasto completamente a fuoco e definire i bordi degli acini. Nel tessuto macchiato, i bordi degli acini sono nitide a causa del contrasto migliorato tra il tessuto macchiato e lo sfondo bianco. <img al…

Discussion

Hypopharyngeal ghiandola dimensione è sensibile alla quantità di proteina e polline nella dieta ed è un indicatore critico di nutrimento in giovani api adulte. Qui, dimostriamo di sezionare e misurare questo tessuto in modo riproducibile e poco costoso. Questi tessuti possono essere difficili da sezionare, ma con la pratica, si possono ottenere sempre più pulitore dissezioni con il tessuto relativamente intatto. Il vantaggio principale del metodo presentato qui è che il tessuto è macchiato, che consente al ricercat…

Materials

Cool setting wax	Grobet USA	21.450
Glass petri dish, small	VWR	89000-310
Glass petri dish, large	VWR	89000-314
Super Max Wax Pen	Eurotool	PEN-520.00
Breakable razor blades	Electron Microscopy Sciences	72004
pin vise	BioQuip	4845
2A-SA flat/rounded tip forceps	Rubis/BioQuip	4522
Fine point forceps	Rubis/BioQuip	4523
5A-SA super fine point forceps	Rubis/BioQuip	4525
10 mm micro spring scissors	BioQuip	4715
3 mm micro spring Vannas scissors	Roboz	RS-5610
Glass Depression Slides, Single Cavity	GSC International	4-13057-DZ-12
PBS tablets	VWR	97062-730
Giemsa stain, modified solution	Sigma Aldrich	32884
Insect pins	ENTO SPHINX S.R.O.	02.02
Leica Applications Suite measurement software	Leica Microsystems		any measurement software, including free software, can be used