Um modelo de Mouse hiperandrogénicas para estudar a síndrome do ovário policístico

Resumo

Descrevemos o desenvolvimento de um modelo de mouse SOP, como magro com diidrotestosterona pelota para estudar a fisiopatologia da síndrome do ovário Policístico e a prole dessas barragens, como síndrome do ovário Policístico.

Resumo

Hyperandrogenemia desempenha um papel crítico na função reprodutiva e metabólica em mulheres e é a marca da síndrome do ovário policístico. Desenvolvimento de um modelo de rato de SOP, como magro que imita as mulheres com SOP é clinicamente significativa. Neste protocolo, descrevemos um modelo deste tipo. Inserindo um comprimento de 4 mm de pelota de pó de cristal DHT (dihidrotestosterona) (comprimento total da pelota é 8 mm), e substituí-lo mensalmente, somos capazes de produzir um modelo do rato de SOP, como com dobra de soro níveis 2 DHT mais elevado do que os ratos não implantados com DHT (n-DHT). Observamos uma disfunção metabólica e reprodutiva sem alterar o peso corporal e composição corporal. Enquanto exibindo um elevado grau de infertilidade, um pequeno subconjunto destes ratos fêmeas de SOP, como posso engravidar e sua prole puberdade atrasada e testosterona aumentada de adultos. Este modelo de rato magra como SOP é uma ferramenta útil para estudar a fisiopatologia da síndrome do ovário Policístico e a prole dessas barragens, como síndrome do ovário Policístico.

Introdução

Hiperandrogenismo é a marca da síndrome do ovário policístico (SOP) de acordo com os critérios do NIH e do excesso de andrógenos e síndrome do ovário Policístico (SOP-AE) da sociedade. Mulheres com SOP têm dificuldade em engravidar e tem aumentado o risco de complicações de gravidez¹. Mesmo se elas engravidam, sua prole feminina tem um resultados de saúde adversos^2,3. Modelos animais foram desenvolvidos utilizando várias estratégias^4,5,6,7,

Protocolo

Aqui, apresentamos protocolos detalhados para inserção e preparação de sedimento DHT e para testes metabólicos e reprodutivos. Os ratos utilizados neste estudo foram um fundo misto (C57/B6, CD1, 129Sv) e foram mantidos com comida e água ad libitum em um ciclo de luz/escuridão h 14/10 a 24 ° C na instalação de animal Broadway edifício de investigação para o Johns Hopkins University School of Medicina. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de uso e cuidado Animal do Johns Hopkins University.

1. criar o modelo de SOP, como Mouse

1. Preparação de pelota DHT
   1. Tubulação de silastic autoclave....

Resultados

Os níveis DHT de soro e teste de tolerância à glicose

Os níveis DHT foram medidos de soro coletado por ambos ELISA e por LC-MS de acordo com o protocolo 1.24 – 1,25 e 2.9, 3.0. Os valores absolutos DHT são diferentes entre a espectrometria de massa e ELISA, no entanto, a dobra relativa (cerca 2 vezes) de DHT vs inserção n-DHT é semelhante de ambos os ensaios e através dos experimentos de^15,

Discussão

Hiperandrogenismo é uma característica fundamental da síndrome do ovário Policístico. A DHT sérica (duas vezes mais alto nos ratos DHT do que nos ratos não-DHT) usada neste protocolo é inferiores aos relatados por outros pesquisadores em estudos anteriores e é calibradas para imitar proporcionalmente as mulheres com SOP^{5,19, 20,21}. Ao contrário de outros modelos, este modelo DHT 2 vezes não al.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
Pó cristalino 5α-DHT	Sigma-Aldrich	A8380-1G
Dow Corning Tubulação Silastic	Fisher Scientific	11-189-15D	0,04 pol / 1 mm de diâmetro interno x0,085 pol / 2,15 mm de diâmetro externo
silicone adesivo médico	II, InC.	A-100
Óculos, jalecos, luvas e máscaras.
10 µ L pontas de pipeta sem filtro	USA Scientific	11113700
lâmina de microscópio para esfregaço	Fisher Scientific	12-550-003
Diff Quik para coloração de células	Fisher Scientific	NC9979740
Lancet	Fisher Scientific	NC9416572
Seringa de 3 mL	Becton, Dickinson and Company (BD),	30985
agulha anexada: 20 G	BD	305176
Régua: qualquer comprimento que 10 cm com escala milimétrica.
Xylazine	Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise	NDC13985-704-10	100 mg/mL
Cloridrato de Cetamina	Hospira, Inc	NDC 0409-2051-05	100 mg/mL
Grampo cirúrgico	AutoClip® Sistema, Fine Science Tool	12020-00
Seringa de insulina	BD	329461	1/2 CC, seringa de insulina U-100 de baixa dose
Trocarte	Innovative Research of America	MP-182
Microscópio	Carl Zeiss Primo Star	415500-0010-001	Alemanha
Perfurador de orelha	Fisher Scientific	13-812-201
Testosterona rato/camundongo ELISA kit	IBL	B79174
DHT ELISA kit	Alpha Diagnostic International	1940
One touch ultra glicosímetro	Life Scan, Inc.
Listras de teste ultra de um toque	Life Scan, Inc.
Tubo Eppendorf	Fisher Scientific	05-402-18
Lâmina de barbear	Fisher Scientific	12-640
Clidox	Fisher Scientific	NC0089321
resguardo cirúrgico	Fisher Scientific	50587953	Fabricante: Andwin Scientific 56616018
Solução Antisséptica Betadine	Walgreens
3M Vetbond (n-butilcianoacrilato)	Ciência 3M. Aplicado à Vida

Fator de