Genetik ve kimyasal kapsid değişiklikler Adenovirus tabanlı gen transferi vektörlerin koruyucu ve hedefleme için kombine
Summary
Burada açıklanan protokol araştırmacılar özellikle adenovirus capsids seçilen siteler tarafından basit Kimya değiştirmek sağlar. Korumalı adenovirus parçacıklar vektörler ve yeniden hedeflenen gen transferi vektörel çizimler oluşturulacak ve vektör ana etkileşimler okudu.
Abstract
Adenovirus vektörel çizimler genetik aşı ve oncolytic virotherapy için güçlü araçlardır. Ancak, onlar özellikle vivo içinde doğumdan sonra birden çok istenmeyen vektör-ana bilgisayar etkileşimlerine yatkındır. Bu istenmeyen vektör-ana etkileşimler tarafından uygulanan sınırlamaları yalnızca olabilir bir fikir birliği vektör yüzey tanımlanmış değişiklikler yapılıyorsa aşılması. Bu değişiklikler istenmeyen etkileşimler gelen parçacıkların koruyucu ve yeni ligandlar giriş tarafından hedefleme içerir. Burada sunulan iletişim kuralı oluşturmak için okuyucu etkinleştirmek için hedeftir korumalı ve, isterseniz, insan adenovirus gen transferi vektörel çizimler veya oncolytic virüs kalktığınız. Protokol araştırmacılar tarafından sentetik polimerler, karbonhidratlar, lipitler veya diğer biyolojik ya da kimyasal moieties belirli kimyasal eki adenovirus vektör capsids yüzeyine değiştirmenizi sağlar. Modern teknoloji, anlayış ve adenovirus vektörel çizimler vivo içinde teslim etmek için engellerin üstesinden kolaylaştırmak için gösterilen genetik ve kimyasal kombine kapsid değişiklikler açıklanır. Biyolojik olarak aktif virüs veya virüs kaynaklı vektörel çizimler ile belirli kimyasal reaksiyonlar gerçekleştirmek için çok önemli adımlar ve yorumladı ve detaylı açıklaması sağlanır. İletişim kuralında tanımlanan teknolojisi (doğal olarak yok) sistein genetik giriş dayanmaktadır artıkları içine solvent maruz döngüler adenovirus kaynaklı vektörel çizimler. Bu sistein kalıntıları sonra üretim vektörlerin yüksek titreleri için son derece özel ve verimli kovalent kimyasal kaplin vektör için çeşitli madde sınıfları moleküllerin için yararlanılabilir belirli bir kimyasal reaktivite sağlamak parçacıklar. Önemlisi, bu iletişim kuralını (thiol tabanlı olmayan) farklı kimyasal değişimleri adenovirus vektör capsids arasında geniş bir çeşitli gerçekleştirmek için kolayca uyarlanabilir. Son olarak, Adenovirus temelini bu protokolü değiştirilebilir dışında büyük olasılıkla o saran virüs dayalı gen transferi vektörel çizimler olduğunu.
Introduction
Adenovirüse bakın (Ad), Aile Adenoviridae, 70’den fazla türlerini tespit (http://hadvwg.gmu.edu) bugüne sigara saran DNA virüsler vardır. Hemaglutination özellikleri, genom yapısı ve sıralama sonuçlar bağlı olarak, 70 reklam türleri yedi tür (insan adenovirüse bakın A g)1,2ayrılabilir. İnsan reklam genom 38 KB içinde büyüklük ve icosahedral nükleokapsid3tarafından saklanmış. Onların bolluk nedeniyle, kapsid protein hexon, penton Bankası ve lif tüm için büyük kapsid protein adlandırılır. En bol ve en büyük kapsid protein hexon her 12 hexon homotrimers4,5/ oluşan 20 kapsid esaslarını oluşturur. Her icosahedral kenarında (vertex), bulunan Penton penton Bankası pentamers oluşur ve glikozile fiber trimers5,6/ inşa vertex spike için temel temsil eder. Yerel Ad hücre giriş temel olarak iki büyük adımlardan oluşur. İlk olarak, fiber topuzu birincil reseptör bağlar. A, C, E ve F türlerden reklam türleri’nde, coxsackie ve adenovirus reseptör (araba) bu. Bu etkileşim böylece hücresel integrinler ve RGD-motif arasındaki etkileşimler penton temel ve sonuç olarak ikna hücresel yanıt-e doğru kolaylaştırmak ve hücre yüzey kayma yakınlık virion getiriyor. İkinci olarak, virion ve taşıma endosome7içselleştirilmesi sitoiskeleti değişimler yol. Endosome yılında kısmi sökme virion yayımlandıktan sonra sitoplazmaya und sonuçta çoğaltma için çekirdek gitmektedir.
Reklam yerel olarak teslim edilebilir iken (Örn., genetik aşılama için), onko-virotherapy için gerekli kan yoluyla sistemik teslim yüzleri çeşitli engelleri. Kan dolaşan süre enjekte virions savunma sistemi ana bilgisayarın bağışıklık sisteminin virüs tabanlı vektörel çizimler hızlı nötralize için önde gelen ve reklam tabanlı vektörel çizimler sistemik uygulamalarda son derece verimsiz işleme, karşılaşma. Ayrıca, reklam doğal hepatotropism sistemik teslimatla engelleyen ve onun yeni hedef hücrelere Ad yönlendirmek çözümlenmesi gerekir.
Doğuştan gelen bağışıklık sisteminin doğal IgM antikor germline kodlanmış hızla tanımak ve son derece tekrarlayan yapıları virion8,9yüzeyinde bağlayın. Bu immün komplekslerin ardından için8virions büyük bir bölümünü hızlı kompleman aracılı nötralize lider Kompleman sistemi, klasik ve klasik olmayan yollar etkinleştirin. İkinci bir yol reklam virions büyük kaldırılması sonucu makrofajlar10 tarafından aracılık ve akut toksik ve haemodynamic yan etkileri11,12ile ilişkili. Reklam durumunda özellikle, karaciğerde bulunan hücreleri bağlamak ve phagocytically Ad virions üzerinden belirli çöpçü reseptörler, böylece almak Kupffer onları kan13,14,15 ortadan kaldırmak . Belirli çöpçü reseptörler Ayrıca karaciğer sinüsoidal endotel hücreleri (LSE)16tarihinde tespit edilmiştir ve LSE hücreleri de vektör eleme17ama ne ölçüde, yine açıklama ihtiyacı için katkıda bulunmak gibi görünüyor. Ayrıca, bazı reklam türleri ve onların türetilmiş vektörler verimli bir şekilde hangi onlar bağlamak yolu ile araba veya kompleman reseptör CR119insan eritrositler18 tarafından münzevi. Notun, iyon bu mekanizma fare modeli sistemi olduğu gibi insan eritrositler kontrast Okulu’nu olamaz, fare eritrositler araba ifade değil.
Reklam reklam ile önceki enfeksiyonlar nedeniyle maruz kaldıktan sonra veya sistemik uygulamalarında ilk doğumdan sonra edinilmiş bağışıklık sistemi tarafından oluşturulan özel anti-reklam antikorlar reklam vektörel çizimler etkin kullanımı için başka bir engel yükseltmek ve onlar içinde yapmamış verimli bir şekilde sistemik teslim.
Son olarak, bazı reklam türleri ciddi (Ad5 dahil) güçlü hepatotropism sistemik tedavi reklam uygulama engeller. Reklam virion yüksek benzeşimi için FX etkileşim reklam hexon protein20,21,22aracılı kan pıhtılaşma faktör X (FX), hepatosit iletim kaynaklanan bu tropism kaynaklanmaktadır. FX virion heparin sülfat glukanlardir (HSPGs) tetkikine20,23,24,25yüzeyi için köprü. Bu etkileşim için önemli bir faktör olan diğer hücre türleri üzerinde HSPGs farklıdır belirli ölçüde, N – ve O-sulfation, karaciğer hücreleri24, HSPGs olacak gibi görünüyor. FX-aracılı bu yolu yanı sıra son yıllarda yapılan çalışmalarda daha da yolları tespit henüz reklam iletim tetkikine26,27,28o sonucu öneririm.
Son zamanlarda, bu FX sadece reklam hepatosit iletim dahil değildir, ama aynı zamanda bağlama tarafından virion virüs parçacık nötralizasyon karşı kalkan Kompleman sistemi26tarafından gösterilmiştir. FX bağlama, önleme tarafından hepatosit iletim azalma bu nedenle, doğuştan gelen bağışıklık sistemi nötralizasyon reklam yoluyla artan istenmeyen yan etkisi yaratacak.
Vektörel çizimler ve ana bilgisayar organizmalar arasındaki karmaşık etkileşimler derin bir bilgi bu nedenle ana bilgisayarın organizma tarafından dayatılan engelleri aşmak sistemik uygulamalar için daha verimli vektörel çizimler geliştirmek gereklidir.
Başlangıçta terapötik proteinler için kullanılan bir strateji için reklam vektörel çizimler en azından kısmen yukarıda açıklanan önündeki engelleri aşmak adapte edilmiştir. Antigenicity ve terapötik protein bileşiklerin immünojenisite Polietilen glikol (PEG)29,30kaplin tarafından azaltılabilir. Bu nedenle, polimerler PEG veya poli [N-(2-HİDROKSİPROPIL) methacrylamid] gibi kovalent kaplin (pHPMA) için kapsid yüzey istenmeyen vektör-ana etkileşimler öğesinden kalkanlar. Genellikle, polimer kaplin kapsid görünüşte rasgele dağıtılır lizin yan artıkları ε-Amin grupları hedefler. Çözüm vektör parçacıklar bağlı polimerler hidrofilik yapısı nedeniyle bağışıklık hücre tanıma veya enzimatik bozulması riskini azaltır bir istikrarlı su kabuk tarafından çevrilidir. Ayrıca, pegile reklam vektörel çizimler anti-hexon antikorlar vitro ve önceden aşılı fareler vivo içinde31nötralizasyon kaçmasına gösterilmiştir. Genetik kapsid değişiklikler aksine, polimerlerin kimyasal kaplin üretim ve arıtma, sadece geleneksel üretici hücreler ve üretim yüksek titresi vektör stoklarının, aynı zamanda kullanımı için değil, aynı anda izin sonra gerçekleştirilir amino asitler kapsid yüzeyinde binlerce modifikasyonu. Ancak, Amin yönelik koruyucu rasgele yüksek heterogeneities kaynaklanan ve belirli capsomers değiştirilmesi için izin vermiyor bütün kapsid yüzeyi boyunca ortaya çıkar. Ayrıca, yararlı etkileri için gerekli büyük polimer moieties virüs bioactivity32zarar.
Bu sınırlamalar, Kreppel ve arküstesinden gelmek için. 33 geneti-kimyasal kavramı vektör re – ve de-hedefleme tanıttı. Katıldı genetik olarak virüs kapsid solvent maruz pozisyonlarda fiber HI-döngü33, protein IX34ve hexon35,36gibi içine tanıtıldı. -E karşın değil doğal olarak meydana gelen, sistein-yatak reklam vektörel çizimler, normal yapımcı hücrelerdeki yüksek titreleri üretilebilir. Önemlisi katıldı belli capsomers ve tek bir capsomer içinde farklı konumları ekleme thiol grup reaktif moieties çok özel değişiklikler için sağlar. Bu geneti-kimyasal yaklaşım reklam vektör tasarımı içinde sayısız engelleri aşmak için gösterilmiştir. Amin tabanlı PEGylation için detargeting ve transferrin HI-döngü başarıyla yeniden Ad vektörel çizimler araba-eksik hücrelerin33değiştiren kanıtlanmıştır fiber düğmesi, thiol tabanlı bağlantı kombinasyonu. Hexon (antikorlar, kan pıhtılaşma faktörü FX nötralize) en istenmeyen etkileşimlerde ilgilenmektedir beri thiol tabanlı değişikliği stratejileri de hexon için uygulandı. Büyük PEG moieties hepatosit iletim14,35artış ise küçük PEG moieties hexon HVR5 için kaplin reklam vektör parçacıklar SKOV-3 hücreleri FX, huzurunda transduce engelledi. Reklam vektör parçacıklar mutasyonlar taşıma araba bağlama inhibe fiber topuzu ve HVR7 inhibe bağlama FX (ve HVR1 pozisyon özel PEGylation için eklenen taşıyan katıldı) antikor ve kompleman aracılı nötralizasyon kaçmasına gösterilmiştir, Çöpçü reseptör aracılı alımını yanı sıra infektivite kaybı olmadan. İlginçtir, doğal FX kalkan olmamasına rağmen PEGylation yeniden, Windows PEG boyutu36bir fonksiyonu olarak hepatosit iletim geliştirilmiş. Ancak, kovalent koruyucu bir etkisi hücre içi ticaret işlemleri olması gösterildi. Prill ve ark. geri dönüşü olmayan pHPMA üzerinde dayalı ve ben de koruyucu ne de kopolimer şarj modu hücreye girişi üzerinde etkili oldu ama parçacık çekirdeğine kaçakçılığı etkilediğini gösterdi bioresponsive kalkanlar karşı karşılaştırıldığında. Pozitif yüklü pHPMA Co polimerler parçacık çekirdeğine reklam yüksek iletim verimliliği korumak, kaçakçılığı için izin ile bir bioresponsive kalkan istihdam vitro ve in vivo37vektörler.
Özet olarak, tüm vektör-konak-etkileşimleri bilinen ve kabul olduğunu bile varsayımı, aşırı kapsid yüzey modifikasyonlar sistemik vektör teslimatla ilişkili engelleri aşmak gerekli olduğunu, bu verileri belirtmek.
Burada siteye özgü kimyasal değişimleri arasında adenovirus vektör capsids koruyucu ve/veya adenovirus vektör parçacıklar ve adenovirus tabanlı oncolytic virüs yeniden hedefleme için gerçekleştirmek için bir protokol sağlar. Bu teknoloji kavramı Şekil 1‘ de gösterilmiştir. Bu istenmeyen etkileşimler belirli kapsid bölgelerden koruyucu sentetik polimerler kovalent eki tarafından sağlar. Aynı anda, aynı zamanda ligandlar iliştirin ve koruyucu ve hedefleme birleştirmek için bir yol sağlar. Basit kimya kullanarak, Denemecileri kovalent adenovirus vektör yüzey molekülleri dahil peptidler/proteinler, karbonhidratlar, lipitler ve diğer küçük moleküller çok çeşitli ile değiştirmek mümkün olacak. Ayrıca, protokol biyolojik olarak aktif virüs kaynaklı vektörel çizimler onların biyolojik bütünlüğünü ve etkinlik bakım altında kimyasal modifikasyonu için genel bir kavram sağlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hangi genetik olarak tanıtılan katıldı kimyasal olarak değiştirilebilir verimliliği genellikle 80-%99 olduğunu ve bazı değişkenler bu verimlilik etkiler. İlk olarak, genetik olarak tanıtılan katıldı erken oksidasyon tabi olmayan her şeyden önemlidir. Yapımcı hücrelerinin azaltılması ortamında iyi korunan olurken, vektör parçacıklar yapımcı hücrelerden ve kimyasal değişikliği sırasında bırakmadan sonra oksidatif olmayan bir ortam sağlamak için zorunludur. Bu amaçla, reaktifler azalta…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Vector purification and chemical modification | |||
| Argon gas | Air liquide | local gas dealer | |
| Liquid Nitrogen | Air liquide | local gas dealer | |
| 500 mL centrifuge tubes | Corning | 431123 | |
| Stericup Express Plus 0.22 µm | Millipore | SCGPU02RE | |
| Tris(2-carboxyethyl) phosphine (TCEP) | Sigma-Aldrich | C4706-10g | |
| 2 mL (3mL) Norm Ject (syringes) | Henke Sass Wolf | 4020.000V0 | |
| Fine-Ject needles for single use (yellow 0.9 x 40 mm) | Henke Sass Wolf | 4710009040 | |
| Caesium chloride 99.999% Ultra Quality | Roth | 8627.1 | |
| Silica gel beads | Applichem | A4569.2500 | |
| Methoxypolyethylene glycol maleimide – 750 (PEG mal-750) | Iris Biotech | store in silica gel beads at -80 °C | |
| 13.2 mL Ultra Clear Ultracentrifuge Tubes | Beckman Coulter | 344059 | only open in hood |
| PD-10 size exclusion chromatography column | GE Healthcare | 17-0851-01 | store at 4 °C |
| Hepes | AppliChem | A1069.1000 | |
| SDS Ultrapure | AppliChem | A1112,0500 | |
| Glycerol | AppliChem | A1123.1000 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material for cell-culture | |||
| DPBS | PAN Biotech | P04-36500 | |
| DMEM | PAN Biotech | P04-03590 | |
| Trypsin/EDTA | PAN Biotech | P10-0231SP | |
| FBS Good | PAN Biotech | P40-37500 | |
| Penicillin/Streptomycin | PAN Biotech | P06-07100 | |
| Biosphere Filter Tips (various sizes) | Sarstedt | ||
| Serological Pipettes (various sizes) | Sarstedt | ||
| reaction tubes (various sizes) | Sarstedt | ||
| TC plates 15cm | Sarstedt | 83.3903 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material for silver staining protocol | |||
| Methanol | J.T.Baker | 8045 | |
| Ethanol absolute | AppliChem | 1613,2500PE | |
| Acetic Acid | AppliChem | A0820,2500PE | |
| Formaldehyde 37% | AppliChem | A0877,0250 | |
| Ethanol absolute | AppliChem | A1613,2500PE | |
| Sodium thiosulfate | AppliChem | 1,418,791,210 | |
| Silver nitrate | AppliChem | A3944.0025 | |
| Sodium carbonate | AppliChem | A3900,0500 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Special Lab Equipment | |||
| Desiccator | Nalgene | 5311-0250 | |
| Megafuge 40 | Heraeus | ||
| Roter for Megafuge TX750 + Adapter andLlids for 500 mL tubes | Heraeus | ||
| Water bath | Conventional | ||
| Ultracentrifuge e.g. Optima XPN-80 | Beckman Coulter | ||
| suitable Ultrazentrifuge Rotor e.g. SW41 | Beckman Coulter | ||
| pH -Meter | Conventional | ||
| Stand with clamps | Conventional | ||
| Goose neck lamp | Conventional | ||
| Over-head rotor | Conventional | ||
| Thermal Block | Conventional | ||
| Photometer (OD 260) | Conventional |
Referências
- Benko, M., Harrach, B. Molecular evolution of adenoviruses. Current Topics in Microbiology and Immunology. , 3-35 (2003).
- Davison, A. J., Benko, M., Harrach, B. Genetic content and evolution of adenoviruses. Journal of Genetic Virology. 84, 2895-2908 (2003).
- Rowe, W. P., Huebner, R. J., Gilmore, L. K., Parrott, R. H., Ward, T. G. Isolation of a cytopathogenic agent from human adenoids undergoing spontaneous degeneration in tissue culture. Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 84, 570-573 (1953).
- van Oostrum, J., Burnett, R. M. Molecular composition of the adenovirus type 2 virion. Journal of Virology. 56, 439-448 (1985).
- Stewart, P. L., Fuller, S. D., Burnett, R. M. Difference imaging of adenovirus: bridging the resolution gap between X-ray crystallography and electron microscopy. TheEMBO Journal. 12, 2589-2599 (1993).
- Stewart, P. L., Burnett, R. M., Cyrklaff, M., Fuller, S. D. Image reconstruction reveals the complex molecular organization of adenovirus. Cell. 67, 145-154 (1991).
- Meier, O., et al. Adenovirus triggers macropinocytosis and endosomal leakage together with its clathrin-mediated uptake. Journal of Cellular Biology. 158, 1119-1131 (2002).
- Xu, Z., et al. Coagulation factor X shields adenovirus type 5 from attack by natural antibodies and complement. Nature Medicine. 19, 452-457 (2013).
- Qiu, Q., et al. Impact of natural IgM concentration on gene therapy with adenovirus type 5 vectors. Journal of Virology. 89, 3412-3416 (2015).
- Alemany, R., Suzuki, K., Curiel, D. T. Blood clearance rates of adenovirus type 5 in mice. Journal of Genetic Virology. 81, 2605-2609 (2000).
- Smith, J. S., Xu, Z., Tian, J., Stevenson, S. C., Byrnes, A. P. Interaction of systemically delivered adenovirus vectors with Kupffer cells in mouse liver. Human Gene Therapy. 19, 547-554 (2008).
- Schiedner, G., et al. A hemodynamic response to intravenous adenovirus vector particles is caused by systemic Kupffer cell-mediated activation of endothelial cells. Human Gene Therapy. 14, 1631-1641 (2003).
- Xu, Z., Tian, J., Smith, J. S., Byrnes, A. P. Clearance of adenovirus by Kupffer cells is mediated by scavenger receptors, natural antibodies, and complement. Journal of Virology. 82, 11705-11713 (2008).
- Khare, R., Reddy, V. S., Nemerow, G. R., Barry, M. A. Identification of adenovirus serotype 5 hexon regions that interact with scavenger receptors. Journal of Virology. 86, 2293-2301 (2012).
- Piccolo, P., Annunziata, P., Mithbaokar, P., Brunetti-Pierri, N. SR-A and SREC-I binding peptides increase HDAd-mediated liver transduction. Gene Therapy. 21, 950-957 (2014).
- Plüddemann, A., Neyen, C., Gordon, S. Macrophage scavenger receptors and host-derived ligands. Methods (San Diego, Calif). 43, 207-217 (2007).
- Ganesan, L. P., et al. Rapid and efficient clearance of blood-borne virus by liver sinusoidal endothelium. PLoS Pathogen. 7, e1002281 (2011).
- Cichon, G., et al. Titer determination of Ad5 in blood: a cautionary note. Gene Therapy. 10, 1012-1017 (2003).
- Carlisle, R. C., et al. Human erythrocytes bind and inactivate type 5 adenovirus by presenting Coxsackie virus-adenovirus receptor and complement receptor 1. Blood. 113, 1909-1918 (2009).
- Waddington, S. N., et al. Adenovirus serotype 5 hexon mediates liver gene transfer. Cell. 132, 397-409 (2008).
- Kalyuzhniy, O., et al. Adenovirus serotype 5 hexon is critical for virus infection of hepatocytes in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 105, 5483-5488 (2008).
- Vigant, F., et al. Substitution of hexon hypervariable region 5 of adenovirus serotype 5 abrogates blood factor binding and limits gene transfer to liver. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 16, 1474-1480 (2008).
- Jonsson, M. I., et al. Coagulation factors IX and X enhance binding and infection of adenovirus types 5 and 31 in human epithelial cells. Journal of Virology. 83, 3816-3825 (2009).
- Bradshaw, A. C., et al. Requirements for receptor engagement during infection by adenovirus complexed with blood coagulation factor X. PLoS Pathogen. 6, e1001142 (2010).
- Duffy, M. R., Bradshaw, A. C., Parker, A. L., McVey, J. H., Baker, A. H. A cluster of basic amino acids in the factor X serine protease mediates surface attachment of adenovirus/FX complexes. Journal of Virology. 85, 10914-10919 (2011).
- Xu, Z., et al. Coagulation factor X shields adenovirus type 5 from attack by natural antibodies and complement. Nature Medicine. 19, 452-457 (2013).
- Prill, J. -. M., et al. Modifications of adenovirus hexon allow for either hepatocyte detargeting or targeting with potential evasion from Kupffer cells. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 19, 83-92 (2011).
- Zaiss, A. K., et al. Hepatocyte Heparan Sulfate Is Required for Adeno-Associated Virus 2 but Dispensable for Adenovirus 5 Liver Transduction In Vivo. Journal of Virology. 90, 412-420 (2015).
- Delgado, C., Francis, G. E., Fisher, D. The uses and properties of PEG-linked proteins. Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems. 9, 249-304 (1992).
- Parveen, S., Sahoo, S. K. Nanomedicine: clinical applications of polyethylene glycol conjugated proteins and drugs. Clin. Pharmacokinet. 45, 965-988 (2006).
- O’Riordan, C. R., et al. PEGylation of adenovirus with retention of infectivity and protection from neutralizing antibody in vitro and in vivo. Human Gene Therapy. 10, 1349-1358 (1999).
- Subr, V., et al. Coating of adenovirus type 5 with polymers containing quaternary amines prevents binding to blood components. Journal of Controlled Release. 135, 152-158 (2009).
- Kreppel, F., Gackowski, J., Schmidt, E., Kochanek, S. Combined genetic and chemical capsid modifications enable flexible and efficient de- and retargeting of adenovirus vectors. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 12, 107-117 (2005).
- Corjon, S., et al. Targeting of adenovirus vectors to the LRP receptor family with the high-affinity ligand RAP via combined genetic and chemical modification of the pIX capsomere. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 16 (11), 1813-1824 (2008).
- Prill, J. -. M., et al. Modifications of adenovirus hexon allow for either hepatocyte detargeting or targeting with potential evasion from Kupffer cells. Molecular Therapy. The Journal of the American Society of Gene Therapy. 19, 83-92 (2011).
- Krutzke, L., et al. Substitution of blood coagulation factor X-binding to Ad5 by position-specific PEGylation: Preventing vector clearance and preserving infectivity. Journal of Controlled Release. 235, 379-392 (2016).
- Prill, J. -. M., et al. Traceless bioresponsive shielding of adenovirus hexon with HPMA copolymers maintains transduction capacity in vitro and in vivo. PloS One. 9, e82716 (2014).
- Kratzer, R. F., Kreppel, F. Production, Purification, and Titration of First-Generation Adenovirus Vectors. Methods in Molecular Biology. , 377-388 (2017).
- Blum, H., Beier, H., Gross, H. J. Improved silver staining of plant proteins, RNA and DNA in polyacrylamide gels. ELECTROPHORESIS. 8, 93-99 (1987).
