Skapandet av kolon anastomos i möss
Summary
Anastomotic läcka eller uppdelning efter operationen är en viktig orsak till postoperativ morbiditet och mortalitet. Vår kirurgi för att skapa en colonic anastomos är en pålitlig och reproducerbar metod för att studera den helande mekanismen av anastomoser.
Abstract
Intestinal anastomoser utförs vanligen i såväl elektiv som framväxande verksamhet. Trots detta anastomotic läckor är en mycket fruktade komplikationer av kolon operationer och kan förekomma hos upp till 26% av kirurgiska anastomoser, med dödligheten vara upp till 39% för patienter med sådan en läcka. För närvarande fortfarande finns det en brist på data som beskriver de cellulära mekanismerna anastomotic helande. Utforma förebyggande strategier och behandlingsmetoder för anastomotic läcka kan kraftigt Genauair och en bättre förståelse av lämpliga anastomotic healing.
En murin modell är perfekt som tidigare studier har visat att murina anastomos är den mest kliniskt liknar mänskliga fallet jämfört med andra djurmodeller. Vi erbjuder en lätt reproducerbar murina modell av kolon anastomos i möss som kommer att möjliggöra ytterligare illustration av anastomotic healing.
Introduction
En mycket fruktad komplikation av kirurgiska anastomos i tarmen är anastomotic nedbrytnings- eller läcka. Anastomotic läcka, vilket orsakar spill av intraluminal innehållet i bukhålan, är livshotande och kan snabbt leda till intraabdominella sepsis; chock priser varierar från 0,3% till 5,5% efter tunntarmen anastomoser och stiga till mellan 0,5% och 26% för kolon anastomoser1,2. Dödlighet efter läckor kan vara så hög som 39% på grund av den snabba uppkomsten av sepsis och snabb progression till döden efter intraabdominal kontaminering3. Förebyggande strategier och behandlingsmetoder baseras för närvarande på patofysiologi som inte är helt klarlagt.
För närvarande jämförs anastomotic healing ofta med de mer allmänt studerade kutan sårläkning, som har visat sig vara en relativt dålig faksimil. Läkning sker i en serie överlappande faser, börjar med den första lag fasen. Under dagarna 0-4 efter skapandet av intestinal anastomos definieras fasen lag av en akut inflammatorisk reaktion som rensar såret av cellulära skräp. Nästa, under dagarna 3-4, fibroblastic spridning och produktionen av kollagen kännetecknar den fibrophasia fasen. Slutligen, efter dag 10, en långvarig period av kollagen remodeling kallas den mognad fasen. Det är viktigt att Observera att anastomotic styrka är ganska låg och beror på yttre stöd av kirurgiskt placerad häftklamrar eller sutur tills kollagen är deponerade4. Förstå rollen och timing varje lager av tarmväggen spelar i anastomotic sårläkning och inblandning i inflammatoriska-medierad celltyper som makrofager, samt belysa surrogatmarkörer att förutsäga anastomotic misslyckande eller framgång kunde kraftigt minska sjuklighet, dödlighet och vårdkostnader efter kolon verksamhet5.
Murina modellen har visat i tidigare studier att vara den användbara i härma mänskliga anastomos6. Medan det finns populära, beprövade och väl studerat exempel av murina colonic anastomotic modellen, särskilt den metod som beskrivs av Komen o.a. 7, dessa modeller för ileocecal eller stigande colocolonic anastomotic tekniker8. Tidigare studier av mänskliga patienter har visat signifikant skillnad i läcka priser mellan ileocecal, colocolonic och kolorektal anastomoser, belyser behovet av ytterligare experimentella modeller på varierande anatomiska platser. Ytterligare, populärt används metoder syftar till att utveckla en modell som avsiktligt skapar en anastomotic läcka snarare än belysa de cellulära mekanismer som krävs för normal anastomotic sårläkning9. Rat modeller har varit försökt tidigare men har andelen anastomotic sårruptur och/eller tecken på läckage (dvs abscess formation) betydligt lägre än människor och möss6,7. Dessutom finns mer genetiskt modifierade experimentella linjerna hos möss än råttor. Detta gör råtta modellen mindre användbar för en anastomotic modell. Svin och hund modeller har dessutom haft mindre klinisk utredning än murina modell6,7.
Vi föreslår en säker, tekniskt enkel och snabbt och enkelt reproducerbar förfarande för skapandet av kolon anastomoser i en murin modell som bör underlätta ytterligare utredning av underrapporterat mekanismen av anastomotic såret helande10 .
Protocol
Representative Results
Discussion
I området i närheten finns det flera viktiga steg för att säkerställa framgång och minimera sjukligheten/dödligheten är associerad med den här proceduren. Först säkerställa noggrann hantering av Tarmvävnaden och ta hand för att förhindra traktion skada när roterande inälvor för att exponera kolon. Onödig spänning på tarm eller tarmkäx kan skada tarmen eller blodkärlen och orsaka tarm nekros från platsen för anastomos. Dessutom bör vass tång eller pincett med tänder inte användas för att hant…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ingen
Materials
| C57BL6/J mice | Jackson Labs | #00664 | |
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 50033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Pharma Inc | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Chloraprep Shampoo | Medline | APL82287 | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37 °C prior to use |
| 10 ml syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", PS-2 needle | Henry Schein | 6546037 | |
| Blue monofilament suture 24” BV-1 needle | Henry Schein | 8305H | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4". | Cole- Parmer | EW-10818-06 | |
| Medline Sterile lubricating jelly | Medline | MDS032273H |
References
- Murrell, Z. A., Stamos, M. J. Reoperation for anastomotic failure. Clinics in colon and rectal surgery. 19, 213-216 (2006).
- Shaban, F., Carney, K., McGarry, K., Holtham, S. Perforated Diverticulitis: To Anastomose or Not to Anastomose? A Systematic Review and Meta-Analysis. International journal of surgery (London, England). , (2018).
- Chambers, W. M., Mortensen, N. J. Postoperative leakage and abscess formation after colorectal surgery. Best practice, research. Clinical gastroenterology. 18, 865-880 (2004).
- Ashkanani, F., Krukowski, Z. H. Surgery – Oxford International Edition. Intestinal Anastomosis. 20, 104-107 (2002).
- Raptis, D., Pramateftakis, M. G., Kanellos, I. Our 20-year experience with experimental colonic anastomotic healing. Journal of medicine and life. 11, 5-14 (2018).
- Pommergaard, H. C., Rosenberg, J., Schumacher-Petersen, C., Achiam, M. P. Choosing the best animal species to mimic clinical colon anastomotic leakage in humans: a qualitative systematic review. European surgical research. Europaische chirurgische Forschung. Recherches chirurgicales europeennes. 47, 173-181 (2011).
- Komen, N., et al. Colorectal anastomotic leakage: a new experimental model. The Journal of surgical research. 155, 7-12 (2009).
- Perry, T., Borowiec, A., Dicken, B., Fedorak, R., Madsen, K. Murine ileocolic bowel resection with primary anastomosis. Journal of visualized experiments : JoVE. , e52106 (2014).
- Pommergaard, H. C., Achiam, M. P., Rosenberg, J. Colon anastomotic leakage: improving the mouse model. Surgery today. 44, 933-939 (2014).
- Bosmans, J. W. A. M., Jongen, A. C. H. M., Bouvy, N. D., Derikx, J. P. M. Colorectal anastomotic healing: why the biological processes that lead to anastomotic leakage should be revealed prior to conducting intervention studies. BMC Gastroenterology. 15, 180 (2015).
