Uso do micro tomography computado do raio X com preparação ácida phosphotungstic para visualizar o tecido fibromuscular humano

Resumo

O micro tomography computado do raio X é eficaz em obter a informação tridimensional dos espécimes humanos não danificados mas tem o sucesso limitado em observar os tecidos macios. O uso do agente do contraste do ácido fosfotúngstico pode resolver esta edição. Nós implementamos este agente do contraste para examinar tecidos fibromusculares delicados humanos (o ligamento de retenção dos orbicularis).

Resumo

A dissecção manual e a observação histológica são métodos comuns usados para investigar tecidos humanos. Entretanto, a dissecção manual pode danificar estruturas delicadas, quando o processamento e a observação histológica fornecerem a informação limitada com a imagem latente transversal. O micro tomography computado do raio X (microCT) é uma ferramenta eficaz para obter a informação tridimensional sem danificar espécimes. Entretanto, mostra a eficiência limitada em diferenciar partes macias do tecido. O uso de agentes que melhoram o contraste, como o ácido fosfotúngstico (PTA), pode resolver este problema melhorando o contraste do tecido macio. Nós implementamos o microCT com o PTA para investigar o ligamento de retenção do orbicularis humano (ORL), que é uma estrutura delicada na área da órbita. Neste método, os espécimes colhidos são fixados em formalina, desidratados em soluções de etanol serial, e coradas com uma solução de PTA. Após a coloração, a varredura de microCT, a reconstrução 3D, e a análise são executadas. A pele, os ligamentos, e os músculos podem claramente ser visualizados usando este método. O tamanho da amostra e a duração da coloração são características essenciais do método. A espessura adequada do espécime foi de cerca de 5 – 7 mm, acima da qual o processo foi retardado, e a duração ótima foi de 5 a 7 dias, abaixo do qual um buraco vazio na área central ocasionalmente ocorreu. Para manter a localização e a direção de peças pequenas durante o corte, é recomendável costurar na mesma região de cada peça. Além disso, análises preliminares da estrutura anatômica são necessárias para identificar corretamente cada peça. Parafilm pode ser usado para impedir a secagem, mas o cuidado deve ser tomado para impedir a distorção do espécime. Nossa observação multidirecional mostrou que o ORL é compor de um malha multicamada de placas contínuas, um pouco do que a fio-como fibras, como relatado previamente. Estes resultados sugerem que a varredura de microCT com PTA seja útil para examinar compartimentos específicos dentro das estruturas complexas do tecido humano. Pode ser útil nas análises de tecidos de câncer, tecidos nervosos e vários órgãos, como o coração e o fígado.

Introdução

A dissecção manual e a observação histológica são tipicamente usadas para examinar os tecidos humanos, como músculos e tecidos conjuntivos. No entanto, a dissecção manual pode facilmente danificar estruturas delicadas, e a observação histológica fornece informações limitadas sobre superfícies planas transversais^1,2. Portanto, métodos melhorados são necessários para examinar os tecidos de forma mais precisa e eficiente.

A tomografia computadorizada convencional (TC) é geralmente utilizada na prática clínica, mas carece da capacidade de distinguir pequenas estruturas^....

Protocolo

Todos os cadáveres utilizados neste estudo foram legalmente doados ao centro de educação em anatomia cirúrgica da faculdade de medicina da Universidade de Yonsei.

1. obtenção de amostras

1. Desenhe uma linha de incisão no cadáver com um lápis colorido para indicar a área de corte para a colheita da amostra. Verifique se a linha de incisão desenhada se estende medialmente a um canthus medial, lateralmente a um canthus lateral, superiormente a uma borda superior da pálpebra inferior, e inferiormente a 1 cm abaixo da linha da borda orbital.
   Nota: considere o tamanho da amostra com base no tamanho máximo de digitalização do equipament....

Resultados

A reconstrução detalhada do ORL foi alcançada pela Microtc com a preparação da PTA (Figura 4). A estrutura fibromuscular ligamentar que se estende obliquamente entre a derme e o periósteo foi distintamente observada (figura 4a). Na visão coronal (Figura 4B), a quantidade e a complexidade das fibras aumentaram lateralmente. Na visão horizontal (Figura 4C), observou-se um trabalho de malha elaborado com f.......

Discussão

Nós implementamos o microCT com preparação do PTA no exame de tecidos macios humanos. Resumidamente, os espécimes são colhidos e fixados em formalina por alguns dias, seguidos de desidratação em soluções de etanol serial. Coloc a amostra na solução do PTA diretamente depois que a fixação do formalina pode conduzir a algum rachamento do tecido devido à desidratação rápida. Conseqüentemente, a desidratação de série é necessária antes da mancha de PTA. Em seguida, as amostras são manchadas usando a solução PTA por cerca de .......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
12 Tungsto(VI)ácido fosfórico n-hidrato Ácido fosfotúngstico	Junsei	84220-0410	PTA em pó
CTvox	Bruker	ver 2.7	Software de reconhecimento 3D
Nrecon	Bruker	ver 1.7.0.4	Software de reconstrução
Skyscan	Bruker	1173	Scanner MicroCT
Tconv	Bruker	ver 2.0	Arquivo software de redimensionamento