Summary
Målet med denne artikkelen er å beskrive en raffinert metode for intubering av laboratoriemusen. Metoden er ikke-invasiv og derfor ideell for studier som krever seriell overvåking av respiratorisk funksjon og / eller instillasjon av behandlinger i lungene.
Abstract
Litteraturen beskriver flere metoder for musintubasjon som enten krever visualisering av glottt gjennom munnhulen eller snittet i ventralhalsen for direkte bekreftelse av kanyleplassering i luftrøret. Den relative vanskeligheten eller vevstraumet indusert til emnet ved slike prosedyrer kan være et hinder for en undersøkers evne til å utføre langsgående studier. Denne artikkelen illustrerer en teknikk der fysisk manipulering av musen etter bruk av en hårfjerning for å fjerne hår fra ventralhalsen tillater transkutan visualisering av luftrøret for orotrahelbredeintubasjon uavhengig av grad av hud Pigmentering. Denne metoden er uskyldig for motivet og oppnås lett med en begrenset forståelse av murineanatomi. Denne raffinerte tilnærmingen forenkler gjentatt intubasjon, som kan være nødvendig for å overvåke sykdomsprogresjon eller drypping av behandlinger. Bruk av denne metoden kan føre til en reduksjon av antall dyr og tekniske ferdigheter som kreves for å måle lungefunksjon i musemodeller av luftveissykdom.
Introduction
Laboratoriemusen er en vanlig dyremodell for human luftveissykdom. Dermed er det flere publiserte metoder for musintubasjon med det formål å både dryppe av behandlinger og måling av åndedrettsmekanikk. De fleste av de beskrevne prosedyrene krever visualisering av glottt gjennom munnhulen med spesialisert utstyr som strupeoskop eller fiberoptisk lyskilde1,2,3,4,5,6,7. Dette kan imidlertid være vanskelig når en relativt stor kanyle er nødvendig, da det kan skjule forskerens syn. Limjunyawong et al.8 har adressert denne bekymringen med en metode for intubasjon der et lite kutan snitt er gjort langs midtlinjen i ventralhalsen som tillater visualisering av luftrøret. Etter prosedyren er snittet lukket med vevslim.
For studier som krever hyppige gjentatte intubasjoner, krever påfølgende snitt ing og lukking av dette nettstedet debridement av hudmargene og vevtraumer til ventral halsen. Formålet med transkutan trakealvisualiseringtilnærming til oral intubasjon er å gi en raffinert, ikke-invasiv teknikk som er spesielt egnet for gjentatte intubasjonsstudier samt enkelt intubasjonshendelser hos mus.
Protocol
Representative Results
Discussion
Intubasjon ved hjelp av transkutan trakealvisualiseringsteknikk gir en raffinert tilnærming til standard hudsnittmetode. Med spesiell oppmerksomhet til flere viktige trinn, kan intubasjon enkelt og raskt oppnås. Dyret må plasseres rett i dorsal recumbency på intubasjonsplattformen med musen sikret i mild tilbaketrekking. Dette vil utvide dyret til vertikal justering og riktig posisjonering for intubasjon. I tillegg bør hårfjerningskremen ikke forbli i kontakt med dyrets hud i mer enn 30–45 s og bør skylles grund…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne takker Lucia Rosas, Lauren Doolittle, Lisa Joseph og Lindsey Ferguson for deres tekniske hjelp og University Laboratory Animal Resources for deres dyrepleiestøtte. Dette arbeidet er finansiert av NIH T35OD010977 og R01-HL102469.
Materials
| 18Gx1 1/4" intravenous catheter, Safelet | Fisher Scientific | #14-841-14 | Cannula for intubation |
| 70% ethanol, 10L | Fisher Scientific | 25467025 | Cleaning cannula |
| Abrasive paper (sandpaper) | Porter-Cable | 74001201 | Cannula preparation |
| AnaSed (xylazine sterile solution) injection (100 mg/ml) | Akorn Animal Health | NDC# 59399-111-50 | Anesthesia |
| Blue labeling tape (0.5 in x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Restraint on intubation platform |
| Braided silk suture without needle, nonsterile, (3-0) | Henry Schein | Item #1007842 | Intubation platform |
| Deltaphase Isothermal Pad | Braintree Scientific | 39DP | Mouse thermoregulation and recovery |
| Deltaphase Operating Board | Braintree Scientific | 39OP | Mouse recovery (prior to extubation) |
| Distilled water | ThermoFisher | 15230253 | Cleaning mouse following depilation |
| Eye Scissors, angled, sharp/sharp | Harvard Apparatus | 72-8437 | Cannula preparation |
| FlexiVent (FX Module 2) | Scireq | N/A | Record lung function data (not required to perform procedure, used in this study to validate procedure) |
| Gauze sponges | Fisher scientific | 13-761-52 | Hair removal |
| Heavy-Duty 3" 3-Ring View Binders | Staples | 24690CT | Intubation platform |
| Instat Software | Graphpad | N/A | Statistical analysis software |
| Insulin syringe (0.5 cc, U100) | Fisher Scientific | 329461 | Anesthesia administration |
| Ketamine HCl Injection, USP (100 mg/ml) | Llyod Laoratories | List No. 4871 | Anesthesia |
| Lung inflation bulb | Harvard Apparatus | 72-9083 | Confirm cannula placement |
| Micro Forceps, Curved, Smooth | Harvard Apparatus | 72-0445 | Retract tongue and create tension on neck for cannula visualization |
| Nair (hair removal lotion), 9 oz bottle | Church & Dwight | 42010440 | Hair removal |
| Sterile saline (0.9%), 10 ml | Fisher Scientific | NC9054335 | Anesthesia, cleaning skin following hair removal |
Referências
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179 (1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318 (2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107 (2013).
