इस अध्ययन का उद्देश्य बर्न घाव भरने का एक मुरीन मॉडल विकसित करना था। एक थर्मल बर्न चूहों की पृष्ठीय त्वचा पर एक पूर्व गरम पीतल टेम्पलेट का उपयोग कर प्रेरित किया गया था । जला ऊतक एक आनुवंशिक रूप से इसी तरह के दाता माउस की पूंछ से काटा एक त्वचा भ्रष्टाचार के साथ debrided और मढ़ा गया था ।
तुच्छ सतही घाव प्राथमिक इरादे से जटिलताओं के बिना ठीक हो जाते हैं। गहरे घाव, जैसे पूर्ण मोटाई जलता है, माध्यमिक इरादे से ठीक होता है और सर्जिकल डिब्राइडमेंट और त्वचा ग्राफ्टिंग की आवश्यकता होती है। एक प्राप्तकर्ता घाव बिस्तर में दाता भ्रष्टाचार का सफल एकीकरण प्रतिरक्षा कोशिकाओं की समय पर भर्ती, मजबूत एंजियोजेनिक प्रतिक्रिया और नए बाह्राश मैट्रिक्स गठन पर निर्भर करता है। उपन्यास चिकित्सकीय एजेंटों का विकास, जो घाव भरने में शामिल कुछ प्रमुख प्रक्रियाओं को लक्षित करता है, घाव बंद होने के अनुकूलित उद्देश्य मूल्यांकन के साथ विश्वसनीय प्रीक्लिनिकल मॉडल की कमी से बाधित होता है। यहां, हम प्रयोगात्मक पूर्ण मोटाई जला घाव एक एलोजेनिक त्वचा भ्रष्टाचार के साथ खंगाला के एक सस्ती और प्रजनन मॉडल का वर्णन । घाव बाल्ब/सी और SKH1-Hrhr पृष्ठभूमि से एनेस्थेटाइज्ड इनब्रीड जंगली प्रकार चूहों की डोरसम सतह पर प्रेरित किया जाता है । जला एक पीतल के व्यास में 10 मिमी मापने टेम्पलेट का उपयोग कर उत्पादित है, जो ८० डिग्री सेल्सियस के लिए पहले से गरम है और 20 एस के लिए एक निरंतर दबाव पर दिया जाता है । जला एस्चर चोट के 24 घंटे बाद excised है और एक पूर्ण मोटाई एक आनुवंशिक रूप से इसी तरह के दाता माउस की पूंछ से काटा कलम के साथ प्रतिस्थापित किया जाता है । प्रक्रिया के लिए कोई विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं है और शल्य चिकित्सा तकनीकों का पालन करने के लिए सीधा कर रहे हैं। विधि को सहजता से लागू किया जा सकता है और अधिकांश शोध सेटिंग्स में पुन: पेश किया जा सकता है। कुछ सीमाएं मॉडल के साथ जुड़ी हुई हैं। तकनीकी कठिनाइयों के कारण, पतली विभाजित मोटाई त्वचा ग्राफ्ट की फसल संभव नहीं है। सर्जिकल विधि हम यहां वर्णन पूर्ण मोटाई त्वचा कलम का उपयोग कर जला घावों के पुनर्निर्माण के लिए अनुमति देता है । इसका उपयोग प्रीक्लीनिकल चिकित्सकीय परीक्षण करने के लिए किया जा सकता है।
शल्य चिकित्सा विकृति और त्वचा की ग्राफ्टिंग सामान्य नैदानिक प्रथाएं हैं जिनका उपयोग पुराने घावों के प्रबंधन में कियाजाताहै 1 , घाव जलाएं2, और दर्दनाक घाव जैसे तीव्र घाव3. त्वचा ग्राफ्टिंग शल्य प्रक्रिया को संदर्भित करता है, जिसमें शरीर के एक हिस्से से स्वस्थ त्वचा को हटाना और इसे दूसरे में स्थानांतरित करना शामिल है। दाता ग्राफ्ट खोए हुए ऊतकों को बदलते हैं और सेलुलर माइग्रेशन और विकास के लिए एक संरचनात्मक पाड़ प्रदान करते हैं। प्राप्तकर्ता साइट में एकीकरण के बाद, त्वचा ग्राफ्ट माइक्रोबियल आक्रमण, बाहरी वातावरण के हानिकारक प्रभावों और नमी 4 के अत्यधिक नुकसान से सुरक्षा प्रदान करके खोई हुई त्वचा बाधा को बदलदेतेहैं। सफल त्वचा भ्रष्टाचार एकीकरण कई कारकों पर निर्भर करता है। इनमें माइक्रोबियल संक्रमणों की उपस्थिति में पर्याप्त प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं और सूजन का समय पर समाधान, घाव स्थल पर मजबूत एंजियोजेनेसिस और प्राप्तकर्ता बिस्तर और दाता भ्रष्टाचार5के बीच संवहनी एनास्टोमोस की स्थापना शामिल है। जैसे ही भ्रष्टाचार नीचा दिखाना शुरू होता है, निवासी डर्मल कोशिकाओं को नए बाह्राश मैट्रिक्स का उत्पादन करने में सक्षम कोशिकाओं द्वारा प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए। साथ ही, एपिडर्मल केराटिनोसाइट्स को नव-एपिडर्मिस बनाने और घाव को फिर से एपिथेलाइज करने के लिए नए उत्पादित मैट्रिक्स पर क्रॉल करना चाहिए। इसलिए, यह स्पष्ट है कि प्राप्तकर्ता बिस्तर से दाता भ्रष्टाचार में कोशिकाओं का कुशल प्रवास एक और निर्धारण कारक है जो सफल भ्रष्टाचार निगमन को प्रभावित करता है । घाव उपचार6में शामिल कारकों की विशाल संख्या को देखते हुए, जो नैतिक सीमाओं के कारण मानव परीक्षणों में नियंत्रित करना असंभव हो सकता है, पूर्व-नैदानिक प्रयोगात्मक त्वचा ग्राफ्टिंग के मॉडल आवश्यक हैं। बर्न घाव भरने और संबंधित त्वचा ग्राफ्टिंग के पूर्व-नैदानिक मॉडलों का विकास जटिल तंत्र की समझ के लिए महत्वपूर्ण होगा जो क्यूटेनियस ऊतक मरम्मत में शामिल हैं और नए चिकित्सीय एजेंटों के परीक्षण के लिए आवश्यक हैं। घाव भरने के इन विट्रो मॉडल क्यूटेनियस ऊतक की जटिलता की सटीक नकल करने में असमर्थ हैं। वीवो पशु मॉडल में ऊतक की मरम्मत में शामिल तंत्र को समझने में एक अनिवार्य खोजी उपकरण हैं।
कृंतकों में त्वचा ग्राफ्टिंग तकनीक के कई तरीके विकसित किए गए थे ताकि शल्य चिकित्सा की नकल की जा सके और घाव पुनर्निर्माण को जलाया जा सके7,8,9. हालांकि, पहले वर्णित प्रक्रियाओं में से अधिकांश त्वचा ग्राफ्टिंग से पहले थर्मल बर्न इंजरी को प्रेरित करने में विफल रहे। जलने के घाव के बजाय, एक पूर्ण मोटाई उत्तेजना घाव को प्रेरित किया गया था, जिसे तब पूरी मोटाई त्वचा एलोबेड़ा7के साथ खंगाला गया था। कृंतक7,,8में दाता त्वचा की कटाई के लिए कान, पूंछ और पीठ जैसे विभिन्न शारीरिक स्थलों का उपयोग किया गया है। विभिन्न भ्रष्टाचार निर्धारण और स्थिरीकरण तकनीकों की सूचना दी गई, जिसमें “कोई सीवन तकनीक”9,टांके7 और सर्जिकल गोंद10,11,,12शामिल हैं।,
इस अध्ययन का उद्देश्य एक पूर्ण मोटाई जला घाव है कि जला उपचार है, जो अकवित ऊतक उत्तेजना और त्वचा ग्राफ्टिंग शामिल है में वर्तमान सोने के मानक दृष्टिकोण को पुनः प्राप्त होगा की एक murine मॉडल विकसित करने के लिए किया गया था । एक थर्मल बर्न एक पूर्व गरम पीतल टेम्पलेट का उपयोग कर एक माउस की डोरसम सतह पर प्रेरित किया गया था। बर्न एस्चर को उत्पादित किया गया था और एक दाता माउस की पूंछ से काटा गया पूर्ण मोटाई भ्रष्टाचार के साथ प्रतिस्थापित किया गया था। इस प्रयोगात्मक मॉडल के तीन प्रमुख फायदे हैं। सबसे पहले, प्राप्तकर्ता माउस की पीठ पर एक से अधिक जला घाव को प्रेरित किया जा सकता है, और दाता माउस की एक पूंछ से चार दाता त्वचा ग्राफ्ट काटा जा सकता है। इसका मतलब यह है कि कई प्रयोगात्मक और नियंत्रण उपचार संभवतः एक ही प्राप्तकर्ता और दाता जानवरों का उपयोग कर तुलना की जा सकती है । प्रशासन के वांछित मार्ग के आधार पर, नियंत्रण उपचार में वाहन या प्लेसबो नियंत्रण के स्थानीय या प्रणालीगत प्रशासन (उदाहरण के लिए, मरहम, चमड़े के नीचे, नसों में नसों के नसों में या समाधान के नसों में इंजेक्शन) का सामयिक अनुप्रयोग शामिल हो सकता है। दूसरा, उपचार का समय और प्रयोग के अंत बिंदु को नियंत्रित किया जा सकता है। तीसरा, यह मॉडल पूंछ से काटा गया पूर्ण मोटाई ग्राफ्ट का उपयोग करके घावों के पुनर्निर्माण पर निर्भर करता है, जो वापस13से काटी गई त्वचा की तुलना में दाता साइट में सफल समावेश के लिए उच्च संभावना के लिए जाना जाता है। यह एपिडर्मल लैंगरहंस कोशिकाओं की कम संख्या के कारण हो सकता है, जो क्यूटेनियस इम्यूनोबायोलॉजी में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, और त्वचा भ्रष्टाचार अस्वीकृति14से जुड़े हैं।
घाव भरने और भ्रष्टाचार एकीकरण के प्रस्तावित मॉडल को ट्रांसजेनिक और नॉकआउट चूहों पर अच्छी तरह से लागू किया जा सकता है। आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों का उपयोग उन भूमिकाओं को स्पष्ट करने में सहायता करेगा जो कुछ जीन घाव की मरम्मत के दौरान खेल सकते हैं। चोट की साइट पर सामयिक घाव की तैयारी या चिकित्सीय एंटीबॉडी के चमड़े के नीचे प्रशासन के बहिर्जात आवेदन पर भी विचार किया जा सकता है।
तकनीकी कठिनाइयों के कारण, एपिडर्मिस और डर्मिस के हिस्से से मिलकर विभाजित मोटाई त्वचा ग्राफ्ट चूहों में प्राप्त करना मुश्किल है। एपिडर्मिस और पूर्ण मोटाई डर्मिस से मिलकर पूर्ण मोटाई त्वचा ग्राफ्ट को सफल एकीकरण के लिए एक अच्छी तरह से संवहनी घाव बिस्तर की आवश्यकता होती है। चूहों में विभाजित मोटाई त्वचा ग्राफ्ट फसल करने में असमर्थता इस मॉडल की एक सीमा के रूप में माना जा सकता है । प्राप्तकर्ता घाव बिस्तर के लिए त्वचा भ्रष्टाचार का निर्धारण सर्जिकल चिपकने वाला गोंद के आवेदन के माध्यम से प्राप्त किया गया था, जो ऊतक निर्धारण15के अन्य साधनों की तुलना में कम आघात और तेजी से गिरावट से जुड़ा हुआ है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि शल्य प्रक्रिया15के बाद 24 घंटे में सर्जिकल गोंद की तुलना में मजबूत ऊतक निर्धारण के साथ जुड़ा हुआ है, जिसे प्रक्रिया का नुकसान माना जा सकता है। हालांकि, बाद के समय बिंदुओं पर, सर्जिकल चिपकने वाले घावों की जैव यांत्रिक शक्ति टांके15 और मुख्य निर्धारण16से बेहतर हो जाती है। सर्जिकल गोंद के साथ ऊतक निर्धारण के बाद, घावों को घाव ड्रेसिंग से कवर किया जाना चाहिए। हालांकि माउस की पृष्ठीय सतह पर घाव जानवर तक पहुंचने के लिए मुश्किल हैं, दूसरी ओर घाव ड्रेसिंग, जानवर के लिए हेरफेर और हटाने के लिए आसान है। लगातार घाव ड्रेसिंग परिवर्तन की आवश्यकता हो सकती है।
छोटे कृंतक में संज्ञाहरण प्रेरित हाइपोथर्मिया एक अच्छी तरह से प्रलेखित घटना17है। हाइपोथर्मिया इस प्रक्रिया का एक दुष्प्रभाव है, जो जटिलताओं का कारण बनता है, और संभावित रूप से पशु स्वास्थ्य और डेटा गुणवत्ता दोनों से समझौता करता है। इसलिए, यह विधि तापमान प्रबंधन रणनीतियों के कार्यान्वयन की आवश्यकता है, खासकर यदि गंजे SKH1-Hrhr का उपयोग किया जाता है।
मानव घाव बंद करने की नकल करने के लिए चूहों का उपयोग करने की सबसे महत्वपूर्ण सीमा त्वचा शरीर रचना विज्ञान और शरीर विज्ञान के बीच अंतर है। माउस घाव ज्यादातर संकुचन के माध्यम से ठीक होते हैं, जबकि मानव घाव ग्रैनुलेशन ऊतक गठन और पुनः-एपीथेलाइजेशन18के माध्यम से ठीक होते हैं। इस विसंगति के लिए खाते में, वर्तमान मॉडल को संशोधित किया जा सकता है और त्वचा संकुचन19को रोकने के लिए घाव के चारों ओर कसकर पालन की गई स्प्लिंटिंग रिंग के साथ संयोजन में उपयोग किया जा सकता है। वीवो प्रोटोकॉल में इसके कुछ फायदों और नुकसानों को देखते हुए, यह मॉडल घाव भरने में शामिल कुछ प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक उपकरण के रूप में काम कर सकता है जो विट्रो में अध्ययन करना असंभव है।
बर्न इंजरी23की मोटाई वर्गीकरण के अनुसार, पूर्ण मोटाई जलने की विशेषता त्वचा की पूरी मोटाई और चमड़े के नीचे के ऊतकों के कुछ हिस्से की स्पष्ट भागीदारी होती है। इस प्रकार का घाव केवल संकुचन या त्वचा ग्राफ्टिंग2से ही ठीक हो सकता है । इस लेख में वर्णित विधि की एक अंतर्निहित सीमा यह है कि विभाजन मोटाई ग्राफ्ट के विपरीत केवल पूर्ण मोटाई ग्राफ्ट, जो अक्सर नैदानिक सेटिंग में उपयोग किए जाते हैं, माउस की पूंछ से काटा गया था। यह तकनीकी कठिनाई के कारण था, क्योंकि माउस की त्वचा विभाजन मोटाई ग्राफ्ट प्राप्त करने के लिए बहुत पतली है। यह बताया जाना चाहिए कि पूर्ण मोटाई ग्राफ्ट के लिए एक अच्छी तरह से संवहनी घाव बिस्तर की आवश्यकता होती है, जबकि विभाजित मोटाई त्वचा ग्राफ्ट कम संवहनी24के साथ दाता साइटों पर जीवित रहने में सक्षम हैं। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि माउस के पीछे एक जला घाव नए वास्कुलेचर 5 के एक मजबूतगठनके साथ जुड़ा हुआ था । इससे पता चलता है कि माउस के पृष्ठ के रूप में एक अच्छी तरह से संवहनी क्षेत्र, जला घावों के प्रेरण के लिए शारीरिक मील का पत्थर के रूप में माना जा सकता है।
घाव गहराई को जलाने पर विचार करने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है। जला घाव की गहराई व्यक्तिगत चूहों के बीच सुसंगत होना चाहिए। जला घाव गहराई की प्रजनन क्षमता पीतल के टेम्पलेट, दबाव और गर्मी के जोखिम की अवधि के तापमान पर निर्भर करता है। जले घाव की गहराई को हिस्टोलॉजिकल रूप से सत्यापित किया जाना चाहिए। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि पहले से गरम पीतल के टेम्पलेट में त्वचा के अत्यधिक दबाव या लंबे समय तक संपर्क अंतर्निहित ऊतक को घायल कर सकता है। कशेरुकी स्तंभ के आसपास के ऊतक, जिसमें केंद्रीय और परिधीय तंत्रिका तंत्र के घटक शामिल हैं, गर्मी के प्रति संवेदनशील होते हैं, और यदि क्षतिग्रस्त हो जाती है तो पिछले पैर पक्षाघात हो सकता है।
यद्यपि कोई पश्चात मृत्यु दर सीधे शल्य प्रक्रिया से जुड़ी नहीं थी, लेकिन गंजे SKH1-Hrhr चूहों की एक छोटी संख्या, जो विशेष रूप से ठंड के प्रति संवेदनशील हैं, हाइपोथर्मिया विकसित की गई हैं और सामान्य एनेस्थीसिया के बाद ठीक होने में विफल रही हैं। इसलिए, सभी सौंदर्य घटनाओं के दौरान पूरक गर्मी प्रदान की जानी चाहिए और माउस को एनेस्थेटाइज्ड होने के दौरान निरंतर निगरानी की आवश्यकता होती है।
इस अध्ययन में वर्णित विधि सर्जिकल साइट संक्रमण से जुड़ी नहीं थी। हालांकि, पेरिऑपरेटिव अवधि के दौरान सर्जिकल घाव में सूक्ष्मजीवों के हस्तांतरण को रोकने के लिए एसेप्टिक तकनीक का उपयोग किया जाना चाहिए। बायोल्यूमिनेसेंट या फ्लोरोसेंट सूक्ष्मजीवों के साथ घाव का टीका प्रक्रिया में शामिल किया जा सकता है। यह तकनीक संक्रामक जीवों और उनके रोगजनन25का अध्ययन करने में उपयोगी हो सकती है . उदाहरण के लिए, बायोल्यूमिनेसेंट बैक्टीरिया के बहिर्जात जोड़ या इंजेक्शन, वीवो पूरे पशु इमेजिंग25में उपयोग कर माइक्रोबियल बोझ की निगरानी की अनुमति दे सकते हैं। यह देखते हुए कि माउस बाल वीवो पूरे पशु फ्लोरेसेंस और बायोल्यूमिनेसेंस इमेजिंग में हस्तक्षेप करने के लिए जाना जाता है, हेयरलेस SKH1-Hrhr चूहों फ्लोरोसेंट या बायोल्यूमिनेसेंट रिपोर्टर्स से जुड़े अध्ययनों के लिए आदर्श मेजबान हैं।
घाव ऊतक नमूनों को विभिन्न समय बिंदुओं पर एकत्र किया जा सकता है और हिस्टोलॉजिकल और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण के लिए संसाधित किया जा सकता है। प्रोटीन और आरएनए त्वचा बायोप्सी से अलग किया जा सकता है और आणविक जीव विज्ञान तकनीकों घाव भरने में शामिल प्रमुख अणुओं की अभिव्यक्ति का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
वर्तमान अध्ययन में, हमने बर्न घाव भरने और एलोजेनिक त्वचा एनग्रेफ्टमेंट का एक प्रायोगिक मॉडल बताया। इस प्रक्रिया को संशोधित किया जा सकता है और प्रीक्लिनिकल अध्ययन के लिए एक मॉडल के रूप में काम कर सकते हैं।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को ला दिशा गेनेरले डी एल’आर्ममेंट, एल’एग्नेस डी एल’इनोवेशन डी डेफेन्स और इकोले पॉलीटेक्निक द्वारा समर्थित किया गया था। हम अपने सहयोगी श्री यान प्लांटियर को इकोले पॉलीटेक्निक से धन्यवाद देते हैं जिन्होंने अंतर्दृष्टि और विशेषज्ञता प्रदान की जिसने वीडियो फ़ाइल के उत्पादन में बहुत सहायता की। लेखक इस परियोजना के दौरान प्रदान की गई अपनी पशु भलाई और देखभाल विशेषज्ञता के लिए श्री बेनोत पेटमैन और सुश्री शार्लोट ऑरियू को INSERM Lavoisier (SEIVIL) US 33, होपिटल पॉल ब्रोस, विल्लेजुफ को धन्यवाद देते हैं।
1 ml syringue | Terumo | SS + 01T1 | |
26 G needle | Terumo Agani | NN-2613R | 1/2'' – 0,45 X 12mm |
96X21 mm Petri Dish | Dutscher | 193199 | |
Animal Weighing scale | Kern | EMB 5.2K5 | |
BALB/c mouse | Janvier labs | BALB/cAnNRj | 6-weeks old |
Biopsy foam pads 30.2X25.4X2mm | Simport | M476-1 | |
Bond polymer Refine Red | Leica Biosystems | DS9390 | |
Brass block | BVG | custom-designed | Circular 10 mm in diameter |
Buprenorphine (BUPRECARE) | Axience | FR/V/6328396 3/2011 | administered subcutaneously at a dose of 0.05 μg/ g |
Burning apparatus Kausistar 400 | TraçaMatrix | 34010 | |
CaseViewer | 3DHISTECH Ltd. | 3Dhistech, Budapest, Hungary | |
Collagen I antibody | Abcam | ab34710 | Recommanded concentration 1:50; 1:200 |
D-(+)- glucose (Dextrose) | Sigma Aldrich | G-8769-100 ml | |
DAB | Leica Biosystems | AR9432 | |
Digital camera | NIKON | D3400 | objective: SIGMA 18-250mm F3.5-6.3 DC MACRO C45 |
Depilating cream | Veet | ||
Disposable scalpels | Swann Morton | 6601 | |
DPBS | PAN biotech | P04-36300 | |
Ethanol absolute | VWR chemicals | 20821.310 | |
Fibronectin antibody | Abcam | ab23750 | Recommanded dilution 1:1000 |
Filter 0.22um | Sartorius | 16532 | |
Fine Scissors | F.S.T. | 14094-11 | |
Forceps Dumont | F.S.T. | 11295-10 | |
Hair clippers | AESCULAP | B00VAQ4KUY (ISIS) | |
Heating pad | Petelevage | 120070 | |
Isofluorane | Piramal healthcare | FR/V/03248850/2011 | |
Ketamine | Imalgene | FR/V/0167433 4/1992 | surgical anesthetic, administered intraperitoneally at a dose of 100mg/kg |
Lactated Ringers solution | Flee-Flex | 1506443 | |
Lamina multilabel slide scanner | Perkin Elmer | ||
LAS software | Leica | version 2.7.3 | |
Leica Bond III | Leica Biosystem | 1757 | |
Leukosilk dressing | BSN medical | 72669-01 | |
Lidocaine | Aguettant | N01BB02 | local analgesic, administered subcutaneously at a dose of 0.05 μg/ g |
Manometer | Kern | HDB-5K5 | |
Masson Trichrome Staining kit | Sigma-Aldrich | HT15-1KT | |
Micromesh Biopsy cassettes | Simport | M507 | |
Multiphoton inverted stand Leica SP5 microscope | Leica microsystems | DM500 | Scanner 8000Hz NDD PMT detectors |
Non adhering dressing Adaptic | Systagenix | A6222 | 12.7cm X 22.9 cm |
Ocrygel | Tvm France | ### | |
Paracetamol 300mg | Dolliprane | Liquiz | |
Paraformaldheyde 4% | VWR chemicals | 1169945 | |
Povidone-iodine | MEDA pharma | D08AG02 | diluted to 1:2 |
SKH1-Hrhr mouse | Charles river | 686SKH1-HR | 6-weeks old |
Slides | Thermoscientific | AGAA000080 | |
Surgical adhesive | BSN medical | 9927 | |
Sterile Gauze | Hartmann | 418545/9 | 10 X 10 cm |
Sterile water | Versylene Fresenius | B230521 | |
Surgical drape | Hartmann | 2775161 | |
Ti:Sapphire ChameleonUltra | Coherent | DS 16-02-16 F | 690-1040 nm |
Thermal imaging Camera | Testo | Testo 868 | |
Xylazine (Rompum 2%) | Bayer | FR/V/ 8146715 2/1980 | surgical anesthetic, administered intraperitoneally at a dose of 10 mg/kg |