Preservação da fertilidade em pacientes com disfunção ovariana grave
Summary
Apresentamos detalhes de procedimentos laboratoriais para ativação in vitro livre de drogas (IVA) de folículos ovarianos para pacientes com disfunção ovariana grave. Este método poderia aumentar o número de oócitos recuperáveis por hiperestimulação ovariana e beneficiar a preservação da fertilidade para esses pacientes.
Abstract
A função ovariana diminui progressivamente durante o envelhecimento e em algumas condições fisioterológicas, incluindo anormalidade do karyótipo, doenças autoimunes, quimioterapia e radioterapia, bem como cirurgias ovarianas. Em mulheres solteiras com disfunção ovariana grave, a preservação da fertilidade é importante para futuras gestações. Embora a criopreservação de oócito seja um método estabelecido para a preservação da fertilidade, esses pacientes só poderiam preservar um número limitado de oócitos mesmo após a hiperestimulação ovariana, levando a estimulações repetidas para garantir oócitos suficientes para garantir a gravidez futura. Para resolver esse problema, desenvolvemos recentemente um procedimento de ativação in vitro (IVA) livre de drogas, que nos permite estimular estágios iniciais de folículos ovarianos a se desenvolverem até a fase do folículo pré-natural. Estes folículos pré-orais podem responder ao protocolo único de estimulação da gonadotropina, resultando em um aumento do número de oócitos recuperados por estimulação ovariana para criopreservação. O IVA livre de drogas compreendeu-se da abordagem cirúrgica e estimulação ovariana. Removemos uma parte do córtex de um ou ambos os ovários de pacientes sob cirurgia laparoscópica. Os tecidos cortical ovarianos foram cortados em pequenos cubos para interromper a via de sinalização do Hipopótamo e estimular o desenvolvimento de folículos em estágio inicial. Estes cubos foram enxertados ortotropicamente em ovários remanescentes, bem como sob a serosa de ambos os tubos de Falópio. Já publicamos o procedimento cirúrgico da IVA livre de drogas e o protocolo de estimulação ovariana subsequente, mas aqui apresentamos os detalhes dos métodos laboratoriais necessários para a IVA livre de drogas.
Introduction
A função ovariana diminui progressivamente durante o envelhecimento e algumas condições fisioterológicas, incluindo anormalidade do karyótipo, doenças autoimunes, terapias de quimioterapia e radiação e cirurgias ovarianas. A preservação da fertilidade é uma das melhores opções para mulheres solteiras com disfunção ovariana severa para preservar seu potencial para futura gravidez. Para a preservação da fertilidade, atualmente dois métodos estão disponíveis principalmente no campo onco-fertilidade. A criopreservação oócito é um procedimento bem estabelecido para a preservação da fertilidade e muitos casos de sucesso foram relatados1,2. Por outro lado, a criopreservação do tecido ovariano também foi estabelecida para preservação da fertilidade em pacientes com câncer, mas ainda é uma estratégia experimental3,4. Em ambos os métodos, são necessários múltiplos números de oócitos maduros para que a gravidez ocorra. Geralmente, pacientes com insuficiência ovariana prematura (POI), que se tornam amorréia antes dos 40 anos de idade, e mulheres de meia-idade com baixa reserva ovariana apresentaram baixa resposta ovariana (POR) à estimulação ovariana por produzir oócitos maduros5,6,7. Além disso, pacientes jovens com baixo número de folículos antral também mostraram POR para a estimulação ovariana7. Esses pacientes têm oócitos muito limitados mesmo após a hiperestimulação ovariana adequada, exigindo assim múltiplos procedimentos caros para garantir um número suficiente de oócitos para a gravidez.
A doação de oócitos seguida de fertilização in vitro (FIV) com a transferência de espermatozoides e embriões do marido (ET) é a única opção para esses pacientes POI e POR que têm dificuldades para obter seus próprios oócitos8,9,10. No entanto, a doação de oócitos é complicada por questões éticas, bem como complicações autoimunes e de gravidez11,12,13,14. Para resolver essas questões, deseja-se o estabelecimento do tratamento de infertilidade utilizando o próprio oócito dos pacientes. Para pacientes com POI, desenvolvemos a abordagem de ativação in vitro (IVA) para permitir o crescimento bem-sucedido do folículo e a geração de oócitos maduros, liderando uma série de gestações e partos15. No IVA, fragmentamos córtex ovariano após a remoção de ovários sob cirurgia laparoscópica e os cultivaram por dois dias para ativar folículos por drogas estimulantes de Akt e, em seguida, realizar enxerto heterotópico de volta em bolsas artificiais feitas sob a serosa de tubos de Falópio sob a segunda cirurgia laparoscópica15. Este procedimento promoveu o crescimento de folículos primordiais, primários e secundários após a fragmentação do córtex ovariano para promover a interrupção da sinalização de Hipopótamo16,seguido por dois dias de cultura com estimuladores de sinalização Akt17.
Em contraste com os casos graves de POI, os pacientes com reserva ovariana reduzida têm múltiplos folículos secundários. Como a interrupção da sinalização de Hipopótamo por si só é eficaz na promoção do crescimento secundário do folículo16,recentemente demonstramos gestações e entregas bem sucedidas para pacientes por usando o procedimento IVA livre de drogas envolvendo fragmentação cortical e enxerto ortotópico sem tratamento das drogas estimulantes Akt. IVA livre de drogas estimula o estágio inicial dos folículos ovarianos a se desenvolverem para o estágio do folículo pré-cirúrgico após apenas uma cirurgia e aumentou o número de oócitos recuperados para transferência de embriões de FIV15,18. A abordagem IVA livre de medicamentos tem várias vantagens em comparação com o nosso IVA original por 1) evitar a perda potencial de folículo durante a cultura, 2) minimizar a invasividade e os custos da segunda cirurgia, 3) envolvendo apenas repouso pós-cirurgia de curto prazo e 4) potencial de gravidez espontânea devido ao enxerto ortotópico. Recentemente publicamos um artigo em vídeo mostrando os procedimentos cirúrgicos do IVA19 sem drogas e protocolos detalhados de estimulação ovariana após a cirurgia20. Aqui, apresentamos detalhes dos métodos laboratoriais necessários para o IVA livre de drogas.
Protocol
Representative Results
Discussion
Neste manuscrito, mostramos um protocolo laboratorial detalhado para IVA livre de drogas. O IVA sem medicamentos é uma nova abordagem do tratamento da infertilidade para pacientes com POR com diminuição da reserva ovariana para promover o crescimento de folículos secundários, resultando em produzir oócitos mais maduros após a estimulação ovariana e aumentando na gravidez bem sucedida20. Em 15 pacientes por com diminuição da reserva ovariana, essa abordagem alcançou uma gravidez espont?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a Tatsuji Ihana, Sachiyo Kurimoto, Kazuko Takahasih, Yuki Yoshizawa, Maho Arashi, Kentaro Fujita, Erina Kudo, Yuka Kurimoto e Mayuko Wakatsuki por apoiarem o procedimento IVA livre de drogas e prof. Aaron J.W. Hsueh (Stanford University School of Medicine, Stanford, CA) pela leitura e edição críticas do manuscrito. Agradecemos também a Rebecca Truman e Gregory Truman por inserirem a narração inglesa. Este estudo foi apoiado pela The Japan Society for the Promotion of Science (JSPS), Scientific Research B (19H03801) e Challenging Exploratory Research (18K19624).
Materials
| 4.5 onz specimen container | FALCON | 354013 | Other products may also be suitable |
| 60mm dish | FALCON | 351007 | Other products may also be suitable |
| 50 x 50 cm sterile drape | HOGY Medical | SR-823 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Disposable pippete | FALCON | 357575 | Other products may also be suitable |
| Fine scissors, Curved | WPI | #14224-G | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Hot plate | TOKAI HIT | TPiE-SP | Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation |
| Human Serum Albumin Solution | Irvine Scientific | 9988 | Medium for handling ovarian tissue |
| IVA cannule | KITAZATO | 446030 IVA-6030E | Specific cannula for tissue autografting |
| KAI medical Disposable scalpel | WPI | #5 10-A | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Micro scissors, Curved | WPI | #503364 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
| Modified HTF Medium-HEPES | Irvine Scientific | 90126 | Medium for handling ovarian tissue |
| Sterile gauze | Osaki Medical | 15004 | Any type of sterile produsts may also be suitable |
| Swiss Tweezers, Curved Tips | KAI | #504505 | Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products |
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