स्पोडोप्टेरा लिटुरा में वृषण संलयन की माइक्रोसर्जिकल बाधा
Summary
एल्यूमीनियम पन्नी microsurgically स्पोडोप्टेरा litura के वृषण के बीच डाला गया था वृषण के संलयन में बाधा डालने के लिए. प्रक्रिया में ठंड, फिक्सिंग, कीटाणुशोधन, चीरा, बाधा रखना, suturing, पश्चात खिला, और निरीक्षण शामिल हैं। यह दृष्टिकोण ऊतक गठन के साथ हस्तक्षेप करने के लिए एक विधि प्रदान करता है।
Abstract
आरएनए हस्तक्षेप (आरएनएआई) जैसे आनुवांशिक तरीकों का उपयोग करने के बजाय और नियमित रूप से इंटरस्पेस्ड शॉर्ट पैलिंड्रोमिक रिपीट (CRISPR)/ CRISPR-संबद्ध एंडोन्यूक्लिएज Cas9 को क्लस्टर किया गया था, इसके विकास और प्रजनन पर इस माइक्रोसर्जरी के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए स्पोडोप्टेरा लिटुरा के वृषण के बीच एक भौतिक बाधा माइक्रोसर्जिकल रूप से डाली गई थी। वृषण के बीच एल्यूमीनियम पन्नी डालने के बाद, कायापलट के दौरान कीट मोल्टिंग सामान्य रूप से आगे बढ़ी। कीट वृद्धि और विकास उल्लेखनीय रूप से परिवर्तित नहीं किए गए थे; हालांकि, शुक्राणु बंडलों की संख्या बदल गई अगर वृषण संलयन microsurgery द्वारा बंद कर दिया गया था. इन निष्कर्षों का तात्पर्य है कि वृषण संलयन को अवरुद्ध करने से पुरुष प्रजनन क्षमता प्रभावित हो सकती है। विशिष्ट सिग्नलिंग मार्गों के कार्य का अध्ययन करने के लिए अंगों के बीच संचार को बाधित करने के लिए विधि को आगे लागू किया जा सकता है। पारंपरिक सर्जरी की तुलना में, माइक्रोसर्जरी को केवल ठंड एनेस्थेटाइजेशन की आवश्यकता होती है, जो कार्बन डाइऑक्साइड एनेस्थेटाइजेशन से बेहतर है। Microsurgery भी सर्जरी साइट क्षेत्र को कम करता है और घाव भरने की सुविधा देता है। हालांकि, विशिष्ट कार्यों के साथ सामग्री के चयन को आगे की जांच की आवश्यकता है। ऑपरेशन के दौरान चीरों को बनाते समय ऊतक की चोट से बचना महत्वपूर्ण है।
Introduction
संलयन ऊतक या अंग विकास में एक सामान्य घटना है। उदाहरणों में ड्रोसोफिला 1 और तालू मॉर्फोजेनेसिस, न्यूरल ट्यूब मॉर्फोजेनेसिस, और चूहों और चिकन 2 में दिल के मॉर्फोजेनेसिस में पृष्ठीय क्लोजर और थोरेक्स क्लोजर शामिल हैं। CRISPR और RNAI को संलयन 2,3,4 की प्रक्रिया में जीन की भूमिकाओं की जांच करने के लिए लागू किया गया है।
स्पोडोप्टेरा लिटुरा (एस लिटुरा, लेपिडोप्टेरा: नोक्टुइडी) एक हानिकारक पॉलीफैगस कीट है जो व्यापक रूप से एशिया के उष्णकटिबंधीय और उपोष्णकटिबंधीय क्षेत्रों में वितरित किया जाता है, जिसमें चीन 4,5,6 शामिल हैं। एस लिटुरा के व्यापक वितरण को आंशिक रूप से इसकी शक्तिशाली प्रजनन क्षमता के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है, जो गोनाड विकास के लिए प्रासंगिक है। पुरुष बांझपन इस कीट को नियंत्रित करने के लिए एक दृष्टिकोण है। जैसा कि वृषण संरचना के योजनाबद्ध आंकड़े में दिखाया गया है, वृषण वृषण म्यान द्वारा संलग्न होते हैं, जिसमें बाहरी म्यान (पेरिटोनियल म्यान) और आंतरिक बेसल लामिना शामिल हैं। बेसल लामिना कूपिक उपकला बनाने के लिए आंतरिक रूप से फैली हुई है और वृषण के आंतरिक क्षेत्र को रोम नाम के चार कक्षों में अलग करती है (चित्रा 1)।
रोम में, माइटोसिस और अर्धसूत्रीविभाजन के बाद शुक्राणुओं में शुक्राणुओं का विकास होता है, और फिर शुक्राणु की थैलियों में शुक्राणुओं को शुक्राणु बंडल बनाने के लिए एक ही दिशा में संरेखित किया जाता है। शुक्राणुजनन के दौरान, प्राथमिक शुक्राणुकोशिकाएं यूपाइरीन शुक्राणुओं या एपिरीन शुक्राणुओं में अंतर करती हैं। लार्वा चरण में शुक्राणुकोशिकाएं एक लम्बी नाभिक के सिर से जुड़ी एक लंबी पूंछ के साथ यूपाइरीन शुक्राणु में विकसित होती हैं; ये अंडे को निषेचित कर सकते हैं। इसके विपरीत, मध्य-प्यूपल चरण में शुक्राणुओं को एक त्यागे गए नाभिक के साथ एपिरीन शुक्राणु में विकसित किया जाता है; ये शुक्राणु eupyrene शुक्राणु9,10 के अस्तित्व, गति और निषेचन में सहायता करते हैं। प्यूपा का 6 वां दिन वह अवधि है जिसके दौरान वृषण में प्रचुर मात्रा में यूपाइरीन और एपिरीन शुक्राणु बंडल होते हैं।
चित्र 1: लेपिडोप्टेरा कीटों की वृषण संरचना का योजनाबद्ध आरेख11. कृपया इस आकृति के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।
वृषण संलयन लेपिडोप्टेरा ऑर्डर 11,12 के अधिकांश कीड़ों में होता है, खासकर उन प्रजातियों में जो कृषि कीट हैं। वृषण संलयन लार्वा चरण में द्विपक्षीय रूप से बढ़ने वाले वृषणों की एक जोड़ी को संदर्भित करता है, एक दूसरे के पास आता है और एक दूसरे का पालन करता है, अंततः एक एकल गोनाड 11 में एकीकृत होता है। स्पोडोप्टेरा लिटुरा में, यह लार्वा से प्यूपल चरण तक कायापलट के दौरान होता है। 5 वें इंस्टार (L5D1) के दिन 1 से 6 वें इंस्टार (L6D4) के दिन 4 तक, वृषण की जोड़ी धीरे-धीरे आकार में बढ़ती है, और रंग हाथीदांत-सफेद से हल्का पीला हो जाता है। यह बेहोश लाल हो जाता है क्योंकि यह प्रीपुपल चरण (L6D5 से L6D6) तक पहुंचता है। दो द्विपक्षीय सममित वृषण prepupal चरण के दौरान एक दूसरे से संपर्क करते हैं, एक में फ्यूज, और मोड़ anticlockwise (doral दृश्य) pupal और वयस्क चरणों में एक एकल वृषण का उत्पादन करने के लिए11. यह घटना रेशम के कीड़ों में नहीं होती है, जिनका काफी आर्थिक महत्व है और 5000 वर्षों से पालतू बनाया गया है। इस प्रकार, यह माना जाता है कि वृषण का संलयन प्रजनन क्षमता में सुधार करता है।
स्पोडोप्टेरा लिटुरा वृषण संलयन के महत्व को निर्धारित करने के लिए, प्रक्रिया को अवरुद्ध करने के प्रभावों की जांच करना महत्वपूर्ण है। इस प्रोटोकॉल में, एल्यूमीनियम पन्नी को अंडकोष के बीच माइक्रोसर्जिकल रूप से डाला गया था ताकि उन्हें अलग रखा जा सके, और कीड़ों और उनके वृषणों के विकास में परिणामस्वरूप परिवर्तनों का अध्ययन किया गया था।
Protocol
Representative Results
Discussion
स्पोडोप्टेरा लिटुरा में अंडकोष संलयन को माइक्रोसर्जिक रूप से बाधित करने के बाद, शुक्राणु बंडलों की संख्या में कमी आई, जिसने इस परिकल्पना का समर्थन किया कि यह संलयन प्रजनन क्षमता के लिए फायदेमंद है?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (Nos.: 31772519, 31720103916; ) और सिल्कवर्म जीनोम जीव विज्ञान, दक्षिण पश्चिम विश्वविद्यालय (No.: sklsgb2013003) की राज्य कुंजी प्रयोगशाला से एक खुला अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| 75% Rubbing alcohol | Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd | Q/370285HNW 001-2019 | |
| Colored Push Pins | Deli Group Co.,LTD | 0042 | |
| Corneal Scissors | Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd | MR-S221A | Curved and blunt tip |
| Glad Aluminum Foil | Clorox China(Guangzhou) Limited | 831457 | 10 cm*2.5 cm*0.6 |
| Medical Cotton Swabs (Sterile) | Winner Medical Co., Ltd. | 601-022921-01 | |
| Medical Iodine Cotton Swab | Winner Medical Co., Ltd. | 608-000247 | |
| Needle holder | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. | J32030 | 14 cm fine needle |
| Sterile surgical blade | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD | #11 | |
| Suigical Blade Holder | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD | K6-10 | Straight 3# |
| Suture thread with needle | Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd | needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm | |
| Tying Forceps | Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd | MR-F201T-3 | Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head |
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