यह प्रोटोकॉल एनएससीएलसी रोगी-व्युत्पन्न ऑर्गेनोइड मॉडल में लक्षित सिग्नलिंग अवरोधकों के लिए दवा संवेदनशीलता के मानकीकृत मूल्यांकन का वर्णन करता है।
नैदानिक रोगी के नमूनों से व्युत्पन्न उपन्यास 3 डी कैंसर ऑर्गेनोइड संस्कृतियां कैंसर में लक्षित अवरोधकों के लिए इंट्राट्यूमर विषमता और उपचार प्रतिक्रिया का मूल्यांकन करने के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल प्रणाली का प्रतिनिधित्व करती हैं। गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल और अग्नाशय के कैंसर में अग्रणी काम ने रोगी-व्युत्पन्न ऑर्गेनोइड्स (पीडीओ) के वादे को रोगी-निकटवर्ती संस्कृति प्रणाली के रूप में उजागर किया है, जिसमें उभरते हुए मॉडल की बढ़ती संख्या है। इसी तरह, अन्य कैंसर प्रकारों में काम ने ऑर्गेनोइड मॉडल स्थापित करने और संस्कृति प्रोटोकॉल को अनुकूलित करने पर ध्यान केंद्रित किया है। विशेष रूप से, 3 डी कैंसर ऑर्गेनोइड मॉडल मूल ट्यूमर नमूनों की आनुवंशिक जटिलता को बनाए रखते हैं और इस प्रकार एक प्रयोगात्मक सेटिंग में आनुवंशिक रूप से सूचित लक्षित उपचारों के साथ उपचार में ट्यूमर-व्युत्पन्न अनुक्रमण डेटा का अनुवाद करते हैं। इसके अलावा, पीडीओ भविष्य में ट्यूमर के प्रतिरोध से जुड़े अनुकूलन को दूर करने के लिए तर्कसंगत संयोजन उपचारों के मूल्यांकन को बढ़ावा दे सकते हैं। उत्तरार्द्ध गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (एनएससीएलसी) में गहन अनुसंधान प्रयासों पर केंद्रित है, क्योंकि प्रतिरोध विकास अंततः लक्षित अवरोधकों की उपचार सफलता को सीमित करता है। एनएससीएलसी पीडीओ का उपयोग करके चिकित्सीय रूप से लक्षित तंत्र का प्रारंभिक मूल्यांकन तर्कसंगत संयोजन उपचारों को सूचित करने में मदद कर सकता है। यह पांडुलिपि एनएससीएलसी-व्युत्पन्न 3 डी पीडीओ में लक्षित अवरोधकों के लिए दवा संवेदनशीलता के सेल संस्कृति प्लेट-आधारित मूल्यांकन के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल का वर्णन करती है, जिसमें संयोजन उपचार और अन्य उपचार के तरीकों के लिए संभावित अनुकूलन क्षमता होती है।
ऑन्कोजेनिक ड्राइवरों के खिलाफ व्यक्तिगत उपचारों ने कैंसर के उपचार में क्रांति ला दी है, रोगी के अस्तित्व में सुधार किया है और उपचार-मध्यस्थता दुष्प्रभावों को कम किया है। आणविक निदान और अनुक्रमण प्रौद्योगिकियों में हाल की प्रगति ने मानव ट्यूमर की जटिलता पर प्रकाश डाला है, जिसमें स्थानिक और अस्थायी विषमता उपचार प्रतिक्रिया को प्रभावित करती है2। सेल संस्कृति मॉडल में इन subclonal मतभेदों recapitulating लंबे समय से अन्यथा समान सेल लाइनों में ब्याज के चयनित परिवर्तनों की जांच करने के लिए सीमित किया गया है। ट्यूमर बायोप्सी या सर्जिकल ट्यूमर लकीरों से उत्पन्न नव विकसित 3 डी पीडीओ मॉडल सेलुलर जटिलता के बेहतर प्रतिनिधित्व और रोगी-व्युत्पन्न ट्यूमर ऊतक 3 के भीतर क्रॉसस्टॉक सिग्नलिंग के लिए अनुमति देते हैं। इस प्रकार, जठरांत्र संबंधी और अग्नाशय के कैंसर से व्युत्पन्न ट्यूमर ऑर्गेनोइड्स सफलतापूर्वक उत्पन्न हुए हैं और आनुवंशिक विविधता और उपचार प्रतिक्रिया के निर्धारकों को फिर से शुरू करते हैं4,5,6। गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (एनएससीएलसी) में, ऑर्गेनोइड विकास और स्थापना चुनौतियों को स्वीकार किया जाता है, और भविष्य में एनएससीएलसी पीडीओ के व्यापक और अधिक व्यवस्थित उपयोग को सक्षम करने के लिए संस्कृति तकनीकों और चयनात्मक मीडिया कारकों के अनुकूलन की आवश्यकता होती है7,8।
अवशिष्ट ट्यूमर कोशिकाओं को लक्षित करने वाले संयोजी उपचारों को विकसित करना जो प्रारंभिक दवा उपचार का सामना करते हैं, प्रतिरोध विकास को रोकने और अंततः रोगी के अस्तित्व में सुधार करने के लिए आवश्यक है। ऑर्गेनोइड संस्कृतियों की वास्तुकला जटिलता को देखते हुए, शास्त्रीय दवा प्रतिक्रिया मापदंडों को दवा संवेदनशीलता के सटीक और पुन: प्रस्तुत करने योग्य परीक्षण की अनुमति देने के लिए अनुकूलित करने की आवश्यकता है। इमेजिंग-आधारित readouts10,11 और शास्त्रीय सेल व्यवहार्यता assays सेलुलर एटीपी बहुतायत को मापने6,12, अन्य तकनीकों के बीच, पीडीओ संस्कृतियों में प्रोफ़ाइल दवा प्रतिक्रियाओं के लिए उपलब्ध हैं। यहां, हम एनएससीएलसी पीडीओ मॉडल में ज्ञात नैदानिक ड्राइवरों के खिलाफ लक्षित चिकित्सा के लिए दवा संवेदनशीलता का मूल्यांकन करने के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल विकसित और वर्णन करते हैं।
यह पांडुलिपि एनएससीएलसी-व्युत्पन्न 3 डी पीडीओ मॉडल में दवा संवेदनशीलता का आकलन करने के लिए एक मानकीकृत प्रोटोकॉल विकसित और वर्णन करती है। दवा संवेदनशीलता अध्ययन के अलावा, दवा संवेदनशीलता में अंतर के अंतर्निहित कारणों को निर्धारित करने के लिए उपलब्ध ऑर्गेनोइड मॉडल के आगे लक्षण वर्णन की आवश्यकता है। इसमें ऑर्गेनोइड्स और रोगी के नमूनों की आनुवंशिक प्रोफाइलिंग और ऑर्गेनोइड्स के लिए उपलब्ध अन्य विश्लेषण शामिल हो सकते हैं, जैसे कि भेदभाव मार्करों और सामान्य सेलुलर सिग्नलिंग बायोमाकर्स और फिजियोलॉजी 13,29 के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री स्टेनिंग।
प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदम
यहां उल्लिखित प्रोटोकॉल एक मानकीकृत वर्कफ़्लो प्रदान करता है जो सावधानीपूर्वक पालन किए जाने पर सटीक और पुन: प्रस्तुत करने योग्य दवा संवेदनशीलता विश्लेषण की अनुमति देता है। निम्नलिखित चरणों में विशेष देखभाल की जानी चाहिए: एकल-सेल निलंबन की पीढ़ी के दौरान TrypLE और DNAse I पाचन, BME2 में एकल-सेल निलंबन की सीडिंग, उपचार तक ऑर्गेनोइड विकास की निगरानी, मीडिया परिवर्तन, और ल्यूमिनेसेंस-आधारित सेल उत्तरजीविता रीडआउट के दौरान BME2 एम्बेडेड ऑर्गेनोइड्स के विघटन और लाइसिस। (1) जबकि TrypLE-आधारित ऑर्गेनोइड्स के पृथक्करण के बाद अतिरिक्त DNAse I पाचन नियमित संस्कृति रखरखाव के दौरान ऑर्गेनोइड मॉडल का विस्तार करने के लिए आवश्यक नहीं है, DNAse I पाचन को दवा वृद्धि प्रयोगों के लिए सीडिंग करते समय छोड़ा नहीं जाना चाहिए क्योंकि यह एकल-सेल निलंबन और सटीक सेल गिनती में ऑर्गेनोइड समूहों का बेहतर अलगाव सुनिश्चित करता है। (2) BME2 में एकल-सेल निलंबन की सीडिंग कमरे के तापमान पर BME2 के ठोसीकरण को देखते हुए एक महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करती है। इस प्रकार, अधिकतम 1-2 पंक्तियों को एक बार में बीज देने की आवश्यकता होती है, और अतिरिक्त पंक्तियों को बीजित करने से पहले नमूनों को बर्फ पर रखा जाना चाहिए। ध्यान दें, कोशिकाओं को ऊपर और नीचे पाइप करने की आवश्यकता होती है जब एक सजातीय सेल निलंबन के लिए अनुमति देने के लिए सीडिंग जारी रखी जाती है। (3) बीज बोने से उपचार के लिए 7-दिवसीय विस्तार के दौरान ऑर्गेनोइड विकास की सावधानीपूर्वक निगरानी करने की आवश्यकता है। अपेक्षित विकास का एक उदाहरण चित्र 1B और अनुपूरक तालिका 1 में दिया गया है। ध्यान दें, ब्राइटफील्ड माइक्रोस्कोपी और छवि विश्लेषण द्वारा ऑर्गेनोइड आकार में परिवर्तन का आकलन करना जैसा कि चित्रा 1 बी में प्रस्तुत किया गया है, ऑर्गेनोइड विकास और दोहरीकरण समय में अंतर के सटीक मूल्यांकन की अनुमति दे सकता है। दोहरीकरण समय दवा प्रतिक्रियाओं पर प्रभाव डाल सकता है, जैसा कि हाल ही में साहित्य 30 में चर्चा की गई है। यदि ऑर्गेनोइड विकास दर प्रस्तुत उदाहरण से काफी अधिक है, तो उपचार की शुरुआत तक एक छोटा विस्तार समय और कम उपचार अवधि पर विचार किया जा सकता है। (4) इसके अलावा, एस्पिरेटिंग ऑर्गेनोइड्स से बचने के लिए मीडिया को बदलते समय विशेष देखभाल की जानी चाहिए। 6 बजे की स्थिति में BME2 एम्बेडेड ऑर्गेनोइड्स की सीडिंग स्थिति मीडिया की एक सुरक्षित आकांक्षा के लिए अनुमति देती है जब प्लेटों को 180 डिग्री तक दक्षिणावर्त बदल दिया जाता है और मीडिया ऑर्गेनोइड्स की विपरीत स्थिति में एस्पिरेटेड होता है। (5) अंत में, जीवित रहने के रीडआउट के दौरान BME2 एम्बेडेड ऑर्गेनोइड्स की पूरी तरह से लाइसिस सटीक परिणाम रिकॉर्ड करने के लिए आवश्यक है। निर्माता के निर्देशों के अनुसार, नमूनों को बार-बार ऊपर और नीचे पाइप किया जाना चाहिए, आदर्श रूप से अनफ़िल्टर्ड युक्तियों का उपयोग करके, उचित लाइसिस सुनिश्चित करने के लिए। इनक्यूबेशन बार का पालन किया जाना चाहिए जैसा कि वर्णित है। इसके अलावा, एलिसा प्लेट रीडर का उपयोग करके अंतिम रीडआउट के लिए एक सफेद, अपारदर्शी-नीचे 96-अच्छी तरह से प्लेट में लिसेट के 75% (कुल मात्रा के बजाय) को स्थानांतरित करना एक उपयुक्त मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है, क्योंकि यह प्रत्येक अच्छी तरह से एक ही मात्रा और हवा के बुलबुले की अनुपस्थिति का आश्वासन देता है जिसे जोरदार पिपेटिंग द्वारा पेश किया जा सकता है।
ध्यान दें, BME2-एम्बेडेड ऑर्गेनोइड संस्कृतियों में दवा प्रतिक्रियाओं की प्रोफाइलिंग नियमित सेल लाइन संस्कृतियों (चित्रा 2, चित्रा 3 ए) में देखे जाने की तुलना में एक उच्च मानक विचलन दिखा सकती है। उच्च मानक विचलन कई कारकों पर आधारित है, जिसमें बीएमई 2 के साथ काम करते समय सीडिंग में मामूली भिन्नताओं की बढ़ती संभावना और प्रारंभिक 7-दिवसीय विकास अवधि में कुओं में व्यक्तिगत ऑर्गेनोइड विकास दर में अंतर शामिल है। इस प्रकार, प्रति दवा एकाग्रता के बराबर या चार से अधिक तकनीकी प्रतिकृतियों को बीज दिया जाना चाहिए।
सबसे महत्वपूर्ण बात, सामान्य वायुमार्ग उपकला कोशिकाओं द्वारा ऑन्कोजेनिक ड्राइवर उत्परिवर्तन और सीमित संदूषण को ले जाने वाली घातक कोशिकाओं की उपस्थिति का सावधानीपूर्वक मूल्यांकन किया जाना चाहिए। एनएससीएलसी स्थापना में चुनौतियां सामान्य वायुमार्ग उपकला कोशिकाओं के विकास का पक्ष ले सकती हैं7। ऑन्कोजेनिक ड्राइवर उत्परिवर्तन की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए कॉपी नंबर प्रोफाइलिंग या पीसीआर- और अनुक्रमण-आधारित दृष्टिकोण एनएससीएलसी ऑर्गेनोइड संस्कृतियों की गुणवत्ता सुनिश्चित करने के लिए पसंद के तरीके हैं।
विधि के संशोधन और समस्या निवारण
बुनियादी मीडिया समाधानों में जोड़े गए मीडिया और संबंधित विकास कारक लक्षित अवरोधकों के लिए दवा की प्रतिक्रिया को काफी प्रभावित कर सकते हैं। वे बाईपास रिसेप्टर्स और सिग्नलिंग मार्गों को सक्रिय करते हैं जो दवा की प्रतिक्रिया को प्रभावित करते हैं और सीमित करते हैं (उदाहरण के लिए, एफजीएफ, एचजीएफ, ईजीएफ)26। जबकि एक विकास-कारक समृद्ध और अनुरूप मीडिया ऑर्गेनोइड संस्कृति के विस्तार के लिए इष्टतम हो सकता है, दवा वृद्धि और संवेदनशीलता मूल्यांकन को कम विकास-कारक मीडिया में किया जाना चाहिए, जैसा कि ऊपर उल्लिखित है। यह विभिन्न मीडिया योगों और दवा प्रतिक्रिया डेटा (चित्रा 3 सी) की तुलना में आंतरिक अनुभव पर आधारित है। जबकि मीडिया समाधान कुछ दवा उपचार के प्रति संवेदनशीलता की डिग्री को प्रभावित कर सकते हैं और IC50 मूल्यों को स्थानांतरित कर सकते हैं, संवेदनशीलता या प्रतिरोध के मजबूत फेनोटाइप मीडिया सूत्रीकरण (चित्रा 3 सी, डी) के बावजूद स्पष्ट हैं। इसके अलावा, मीडिया फॉर्मूलेशन में सामान्य स्थिरता और ऑर्गेनोइड संस्कृतियों में दवा प्रतिक्रियाओं को प्रोफाइल करने की सिफारिश की जाती है, और प्रति एकाग्रता के बराबर या चार से अधिक तकनीकी प्रतिकृतियों को सीड करने की आवश्यकता होती है। यह संवेदनशीलता बनाम में बेंचमार्क रेंज के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। ब्याज के अवरोधक के लिए प्रतिरोध।
विधि की सीमाएँ
यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल एनएससीएलसी 3 डी कैंसर ऑर्गेनोइड मॉडल की संवेदनशीलता का वर्णन करता है लक्षित अवरोधकों के लिए जब रोगी-व्युत्पन्न कैंसर कोशिकाओं को सुसंस्कृत किया जाता है। अतिरिक्त प्रयोगों, जिसमें ड्राइवर ऑन्कोजीन और माध्यमिक उत्परिवर्तन की उपस्थिति के लिए मार्ग निषेध और अनुक्रमण विश्लेषण के बारे में फार्माकोडायनेमिक विश्लेषण शामिल है, दवा प्रतिरोध और संवेदनशीलता के विस्तृत लक्षण वर्णन के लिए आवश्यक है। इसके अलावा, ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट में गैर-कैंसर बाईस्टैंडर कोशिकाओं द्वारा इंटरैक्शन या स्रावित कारकों से प्राप्त माइक्रोएनवायरमेंटल उत्तेजनाओं जैसे बायस्टैंडर कारकों का हिसाब नहीं दिया जाता है, और उपन्यास प्रोटोकॉल की आवश्यकता होती है जब प्रतिरक्षा या स्ट्रोमल कोशिकाओं के साथ सह-संस्कृति ऑर्गेनोइड मॉडल का प्रयास किया जाता है। हाल के काम ने ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट इंटरैक्शन और प्रतिरक्षा चेकपॉइंट इनहिबिटर के लिए प्रोफ़ाइल प्रतिक्रियाओं को दोहराने के लिए ऑर्गेनोइड मॉडल के उपयोग पर प्रकाश डाला है, जैसे कि एंटी-पीडी-एल 1 उपचार 13,31।
मौजूदा / वैकल्पिक तरीकों के संबंध में विधि का महत्व
3 डी कैंसर organoid मॉडल आनुवंशिक विविधता और मूल ट्यूमर 4,5,6 में मौजूद उपचार प्रतिक्रिया के निर्धारकों recapitulate. विशेष रूप से, स्थानिक और अस्थायी विषमता ट्यूमर के विकास को बढ़ावा दे सकती है, और समानांतर उद्भव और ट्यूमर सबक्लोन्स का अनुक्रमिक विकास 32,33 हो सकता है। इंट्राट्यूमर विषमता चिकित्सीय दबाव 9,34,35 के तहत अधिक लचीला ट्यूमर कोशिकाओं के चयन के लिए महत्वपूर्ण है। यहां प्रदान किया गया प्रोटोकॉल रोगी-निकटतम नमूनों में लक्षित अवरोधकों के साथ उपचार के लिए संवेदनशीलता के तेजी से मूल्यांकन की अनुमति देता है। इस प्रकार, ऑर्गेनोइड मॉडल में अधिक पारंपरिक सजातीय सेल लाइन मॉडल पर लाभ होते हैं, जिनमें आनुवंशिक विविधता या सेल लाइनों या रोगी-व्युत्पन्न का उपयोग करके दीर्घकालिक अध्ययन की कमी होती है। इसके अलावा, वर्तमान प्रोटोकॉल लागत और विश्लेषणात्मक क्षमता के बारे में कुछ सीमाओं के साथ उपचार और संयोजन उपचार दृष्टिकोण के कई हथियारों तक स्केलिंग की अनुमति देता है। इस प्रकार, मुख्य रूप से लक्षित अवरोधक को बढ़ाते हुए एक निश्चित खुराक पर ब्याज की दूसरी दवा जोड़ना और इसकी तुलना मुख्य रूप से लक्षित अवरोधक की वृद्धि से करना अकेले संभावित संयुक्त प्रभावों का कुशलतापूर्वक मूल्यांकन करने और न्यूनतम अतिरिक्त बायोमास की आवश्यकता के साथ करने की अनुमति देता है (पूरक चित्रा 3)। इमेजिंग-आधारित आकलन की तुलना में ऑर्गेनोइड विकास और दवा प्रतिक्रिया की निगरानी के लिए उपयोग किया जाता है, यहां वर्णित ल्यूमिनेसेंस-आधारित सेल उत्तरजीविता परख में न्यूनतम उपकरण और प्रशिक्षण की आवश्यकता के साथ समान संवेदनशीलता है।
विशिष्ट अनुसंधान क्षेत्रों में विधि का महत्व और संभावित अनुप्रयोग
एक मानकीकृत पाइपलाइन विकसित करना जो रोगी के नमूनों से कैंसर ऑर्गेनोइड मॉडल स्थापित करने की अनुमति देता है और बाद की दवा संवेदनशीलता प्रोफाइलिंग में महत्वपूर्ण नैदानिक प्रयोज्यता क्षमता होती है। पूर्व विवो औषधीय प्रोफाइलिंग ने ट्यूमर में कमजोरियों और प्रतिरोधी-संबद्ध विशेषताओं का पता लगाने में मान्यता प्राप्त की है, जो रोगियों में उपचार की प्रतिक्रिया से संबंधित है36,37। महत्वपूर्ण रूप से, दवा संवेदनशीलता के पूर्व विवो प्रोफाइलिंग क्लिनिक में उपचार चयन और प्रतिरोध तंत्र को संबोधित करने वाले तर्कसंगत संयोजन उपचारों के डिजाइन में सहायता कर सकते हैं। कुल मिलाकर, यह दृष्टिकोण आणविक चिकित्सा या संयुक्त उपचार regimens के लिए बेहतर व्यक्तिगत रणनीतियों को सक्षम करने में मदद कर सकता है। उत्तरार्द्ध दवा सहिष्णुता और प्रतिरोध तंत्र को लक्षित करने में मदद कर सकता है और भविष्य में रोगी परिणामों में सुधार करने के लिए नैदानिक प्रतिक्रिया को गहरा कर सकता है।
The authors have nothing to disclose.
हम जेरोन पी रूज (यूसीएसएफ) और केल्विन जे कुओ (स्टैनफोर्ड) की प्रयोगशालाओं को ऑर्गेनोइड संस्कृति और प्रोटोकॉल विकास के बारे में उनके इनपुट के लिए धन्यवाद देते हैं। हम आगे प्रोटोकॉल और नमूना स्थापना इनपुट के लिए Oghenekevwe एम Gbenedio (रूज लैब, UCSF) धन्यवाद. यह शोध परियोजना एनआईएच [U54CA224081] के समर्थन के साथ आयोजित की गई थी। एफ Haderk जर्मन कैंसर सहायता से Mildred Scheel पोस्टडॉक्टोरल फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था।
1.5 mL tubes | |||
15 mL centrifuge tubes | |||
500 mL Vacuum Filter/Storage Bottle System, 0.2 µm Pore 33.2 cm2 Nylon Membrane | Corning | 430773 | for both media |
96-Well, Cell Culture-Treated, Flat Clear Bottom Black Microplate | Corning | 3904 | |
96-Well, Cell Culture-Treated, Solid White Flat-Bottom Microplate | Corning | 3917 | |
A-8301 | Tocris Bioscience | 293910 | for both media |
Advanced DMEM/F-12 | Gibco | 12634010 | for LGM |
B27 | Life Technologies | 12587010 | for both media |
BioRender 2021 | https://biorender.com/ | online scientific illustration software | |
BME2 (Cultrex RGF Basement Membrane Extract, Type 2) | R&D Systems | 353301002 | |
Cell culture incubator (37 °C, 5% CO2) | |||
CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay | Promega | G9682 | 3D-CTG readout reagent |
Centrifuge holding 15 mL centrifuge tubes | |||
Deoxyribonuclease I (DNAse I) | ThermoFisher Scientific | 18047019 | |
Dulbecco's Phosphate-Buffered Salt Solution | Corning | MT21031CV | |
DMEM/F-12, GlutaMAX supplement | Gibco | 10565018 | for GM |
GlutaMax | Gibco | 35050061 | for LGM |
GraphPad Prism software (version 9.2.0) | GraphPad | statistical analysis software | |
HEPES | Gibco | 15630080 | for both media |
hFGF-10 | PeproTech | 100-26-100ug | for GM |
hFGF-7 | PeproTech | 100-19-50ug | for GM |
hNoggin | PeproTech | 120-10C-100ug | for both media |
hRspondin | PeproTech | 120-38-100ug | for GM |
Low retention pipette tips, 20 µL (P20) | ThermoFisher Scientific | 2149P-05-HR | |
Low retention pipette tips, 200 µL (P200) | ThermoFisher Scientific | 2069-05-HR | |
Regular length pipette tips, 1000 µL (P1000) | ThermoFisher Scientific | 2179-HR | |
Multichannel pipette | |||
N-Acetylcysteine | Fisher Scientific | 50-424-777 | for both media |
Nicotinamide | Sigma Aldrich | N0636-100G | for both media |
Osimertinib | Selleck Checm | S7297 | |
Penicillin-Streptomycin-Glutamine | Gibco | 10378016 | for LGM |
Penicillin/Streptomycin | Cytiva HyClone | SV30010 | for GM |
Pipettes (different sizes) | |||
Plate reader | Molecular Devices | SpectraMax M5 | equipment, alternative readers may be used |
Primocin | Invivogen | ant-pm-1 | for GM |
SB202190 | Selleck Chem | S1077 | for GM |
TrypLE Express Enzyme | Gibco | 12604021 | |
Vacuum pump and tubing | |||
Vi-CELL XR Cell Analyzer | Beckman Coulter | Vi-CELL XR | cell analyzer / counter |