커피 베리 보어 hypothenemus hampei에 대한 통제제 및 살충제를 테스트하는 방법론
Summary
그린 커피 과일 (GF)을 사용하는 방법은 커피 베리 보러 (CBB)에 대한 살충제의 독성을 테스트하기 위해 개발되었습니다. 살충제 또는 독성 물질은 CBB 감염 전후에 소독 된 GF에 적용되었습니다. 곤충 사망률, 기피성 및 생식 능력은 다른 매개 변수 외에도 평가되었습니다.
Abstract
커피 베리 보러 (CBB) Hypothenemus hampei를 치료하기 위해 살충제를 권장하기 전에 성인 곤충에 대한 이러한 살충제의 사망률과 혐오감 또는 생식 출력에 미치는 영향을 아는 것이 중요합니다. 그러나 현재 이용 가능한 방법은 성인 사망률만을 평가하여 다른 행동 방식을 가진 새로운 살충제의 선택을 제한합니다. 이 연구에서는 실험실 조건에서 CBB에 대한 다양한 효과를 확인하기 위해 다양한 실험 방법을 조사했습니다. 이를 위해 그린 커피 과일(GFs)을 수집하고 차아염소산나트륨 용액에 침지한 후 자외선을 조사하여 소독하였다. 병행하여, 콜로니로부터의 CBB 성인은 차아염소산나트륨 용액에 침지함으로써 소독되었다. 과일 보호 (preinfestation)를 평가하기 위해 과일을 플라스틱 상자에 넣고 살충제를 적용했습니다. 이어서, CBB 성인을 GF 당 두 개의 CBB의 비율로 방출하였다. GFs를 1, 7, 15 및 21일 후에 CBB 감염 및 생존을 평가하기 위해 조절된 조건 하에 방치하였다. CBB 감염 후(postinfestation) 후 살충제 효능을 평가하기 위해, CBB 성인은 21°C에서 3시간 동안 2:1 비율로 GFs를 방출하였다. 복부가 부분적으로 노출 된 CBB 성인을 보여주는 감염된 과일을 선택하여 96 웰 랙에 넣고 과일에 지루한 CBB를 직접 처리했습니다. 20 일 후, 과일을 해부하고, 각 과일 내부의 CBB 생물학적 단계를 기록하였다. GF는 CBB에 대한 독성, 화학 및 생물학적 살충제를 평가하기 위해 자연 조건을 모방하는 기질 역할을했습니다.
Introduction
커피 베리 보러 (CBB), Hypothenemus hampei는 콜롬비아에서 1988 년에 처음 발견되었으며 이후 커피 작물의 가장 중요한 해충 종이되었습니다. CBB 암컷은 출생 과일을 이미 수정 된 상태로 남겨두고 1,2에서 방출하는 휘발성 화학 물질에 의해 인도 된 새로운 과일을 찾습니다. 완전한 사이클은 25°C의 온도에서23일3일 이내에 성취된다. 주기는 창시자 여성이 씨앗을 관통하고 과일 내정자에 알을 낳는 것으로 시작됩니다. eclosed 애벌레는 씨앗을 먹습니다. 이 시점에서 과일이 해부되면 창립자 여성과 자손을 모두 관찰 할 수 있습니다. 14 일 후, 애벌레는 번데기가되고, 번데기 단계는 5 일간 지속됩니다. 성인 단계에서 암컷은 형제 자매들과 교배하고, 새로 수정 된 암컷은 손상된 과일에서 날아 다니며 새로운 커피 과일을 찾아 새로운 사이클4를 시작합니다.
침투 과정과 애벌레 먹이의 결과 모두 커피 씨앗을 손상시켜 커피 음료의 품질을 떨어 뜨리고 수익을 크게 줄입니다. 커피 농장에서 5 % 이상의 감염은 일반적으로 경제적 한계점으로 간주됩니다.
CBB 방제는 문화적 통제 및 농경 관행, 천연 생물학적 제제 및 화학 살충제의 사용을 포함한 통합 해충 관리 (IPM) 전략을 기반으로하며, 이는 안전 조건과시기 적절한 적용이 필요합니다4.
CBB의 통제를위한 새로운 살충제를 평가하기 위해서는 신속한 결과를 얻을 수있는 저렴한 방법론이 필요합니다. 실험실 및 현장 절차 모두 살충제가 통합 된 커피 를 함유 한 인공 식단5,6 또는 건조 양피지 커피 7,8,9에 살충제를 분무하는 것을 포함하여 현재 사용되고 있습니다. 또한, 곤충학적 슬리브로 덮인 커피 나뭇가지를 사용하여 현장에서 수행된 실험은10,11; 그러나 이러한 방법은 강렬한 노동과 긴 평가 기간이 필요합니다.
자연 필드 조건과 유사한 조건, 즉 빠르고 저렴한 조건은 녹색 또는 잘 익은 커피 과일을 사용하는 것입니다. 그러나 이러한 과일은 CBB 개발에 적합한 조건에서 유지되어야하며, 품질과 특성을 유지하기 위해 미생물에 의한 변화와 오염 물질을 피해야합니다. 이를 위해 다양한 소독제 뿐만 아니라 열 및 방사선 7,9,12,13,14,15,16과 관련된 절차가 사용되었습니다.
또한 CBB에 대한 살충제 평가 방법은 과일을 찾아 날아 다니거나 과일을 관통하는 성인 여성의 시뮬레이션을 필요로합니다17,18. 이를 위해 8,11,19현장에서 인공 과일 침입이 수행되었지만이 과정은 노동 집약적이며 환경 조건에 달려 있습니다.
여기에서는 현장 조건과 유사한 통제 된 환경 조건 하에서 CBB에 다른 영향을 줄 수있는 제품의 평가를위한 표준화 된 방법론을 설명합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 프로토콜에서 곤충뿐만 아니라 과일의 소독은 중요한 단계입니다. 밭의 과일을 실험실에서 사용하면 미생물과 진드기가 표피 7,15,16에 존재하기 때문에 높은 오염과 탈수를 자주 보입니다. 따라서 소독되지 않은 과일이나 곤충을 사용하면 박테리아 나 곰팡이와 같은 미생물에 의한 오염으로 인해 곤충이 사망하여 생물 분?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자들은 콜롬비아 국립 커피 재배자 연맹, 곤충학과 (Diana Marcela Giraldo, Gloria Patricia Naranjo), Experiment Station Naranjal 및 Jhon Félix Trejos의 조수들에게 감사를 표합니다.
Materials
| Beaker with spout, low form 500 mL | BRAND PP | BR87826 | |
| Benchtop Shaker | New Brunswick Scientific Innova 4000 Incubator Shaker | ||
| Dishwashing liquid soap-AXION | Colgate-Palmolive | AXION | |
| Hood; Horizontal Laminar Flow Station | Terra Universal | Powder-Coated Steel, 1930 mm W x 1118 mm D x 1619 mm H, 120 V (https://www.terrauniversal.com/hood-horizontal-laminar-flow-station-9620-64a.html) | |
| Insects CBB | BIOCAFE | (http://avispitas.blogspot.com/p/biocafe.html). | |
| Multi Fold White paper towels | Familia | 73551 | |
| Preval Spray unit | Preval Merck | Z365556-1KT | https://www.sigmaaldrich.com/CO/es/product/sigma/z365556?gclid=Cj0KCQiAweaNBhDEARIsAJ 5hwbfZOy1TWGj6huatFtRQt AzOyHe5-oBiKnOUK2T1exuuk WwJLdvxkvsaAjoYEALw_wcB |
| Reversible Racks 96-Well | heathrowscientific | HEA2345A | https://www.heathrowscientific.com/reversible-racks-96-well-i-hea2345a |
| Scalpel blades N 11 | Merck | S2771-100EA | |
| Scalpel handles N3 | Merck | S2896-1EA | |
| Sodium Hypochloride | The clorox company | Clorox | |
| Stereo Microscope | Zeiss | Stemi 508 | https://www.zeiss.com/microscopy/int/products/stereo-zoom-microscopes/stemi-508.html |
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