改善肾去神经支配缓解血管紧张素II.诱导的高血压

Summary

在这里，我们提出了由血管紧张素II输注诱导的高血压小鼠肾交感神经去神经支配（RDN）的方案。该程序可重复，方便，并允许研究RDN对高血压和心脏肥大的调节机制。

Abstract

近年来，肾交感神经去神经支配（RDN）对血压的益处已在大量临床试验中得到证实。然而，RDN对高血压的调节机制仍然难以捉摸。因此，在小鼠中建立更简单的RDN模型至关重要。在这项研究中，将充满血管紧张素II的渗透迷你泵植入14周龄的C57BL / 6小鼠中。植入微型渗透泵一周后，使用苯酚对小鼠的双侧肾动脉进行改良的RDN程序。给予年龄性别匹配的小鼠盐水并作为假组。在基线时测量血压，随后每周测量血压，持续21天。然后，收集肾动脉，腹主动脉和心脏，使用H&E和Masson染色进行组织学检查。在这项研究中，我们提出了一种简单、实用、可重复和标准化的RDN模型，可以控制高血压，缓解心脏肥大。该技术可以去神经支配周围肾交感神经，而不会造成肾动脉损伤。与以前的模型相比，改进的RDN有助于研究高血压的病理生物学和病理生理学。

Introduction

高血压是全世界主要的慢性心血管疾病。不受控制的高血压可能会损害靶器官并导致心力衰竭、中风和慢性肾脏疾病¹，^2，3。1991年至2007年间，中国的高血压患病率从20%上升到31%。在最近修订高血压诊断标准（130/80 mmHg^）4后，中国成人高血压患者人数可能会翻一番。高血压可以通过药物控制，然而，大约20%的患者无法控制他们的高血压，即使以最大耐受剂量接受至少三种抗高血压药物（包括一种利尿剂），这可能导致耐药性高血压^{的发展5。}

肾交感神经去神经支配（RDN）已被证明是高血压的潜在治疗方法。2009年，Krum及其同事首次报告了使用RDN进行难治性高血压治疗。结果发现经皮肾动脉消融术可有效引起患者持续性血压降低⁶.然而，Symplicity Hypertension 3 （HTN-3） 试验的失败阻碍了 RDN 7 的应用，使 RDN^成为一种有争议的疗法。然而，RDN的前景尚未被排除。最近的临床试验，包括RADIANCE-HTN SOLO，SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED和SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal已经证实了RDN对高血压8，9^，10，^11，12的疗效。因此，需要进行更详细的机理研究来探索RDN的影响。

本研究的总体目的是证明如何修改小鼠中的RDN以产生更简单，更稳定的手术。大量的实验研究了RDN的各种方法，如血管内冷冻消融，体外超声和化学或神经毒素在不同动物模型中的局部应用¹³，¹⁴，¹⁵，^16，17。使用苯酚化学消融生成的RDN模型是研究交感神经激活对高血压发病机制的成熟实验模型。该模型是通过使用棉签10%苯酚/乙醇溶液对肾交感神经进行化学腐蚀而产生的¹⁸。一方面，常规RDN潜在地抑制肾交感神经活性，从而减少肾素分泌和钠重吸收，并增加肾血流量。另一方面，它抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统¹⁹。因此，RDN对高血压有有益的作用。然而，化学消融生成的RDN模型缺乏消融标准和消融时间，实验过程的细节尚不清楚。此外，没有可用的技术报告。在本报告中，我们描述了一种使用称重纸在血管紧张素II（Ang II）诱导的C57BL / 6小鼠高血压中用苯酚生成RDN模型的手术方案。我们用含有苯酚的称量纸包裹肾动脉并统一消融时间，这有助于建立更可重复、更可靠的 RDN 模型。该实验模型旨在评估RDN对高血压的影响。

Protocol

所有动物实验程序均符合实验动物护理和使用的相关伦理指南（NIH出版物编号85-23，2011年修订），并得到复旦大学附属华东医院动物研究委员会的批准。将14周龄雄性C57BL/6小鼠（28-30g）随机分为4组：假鼠组、假+Ang II组、RDN组、RDN+Ang II组，每组n = 6。所有动物均在24±1°C的温度受控室中在特定封闭的无病原体条件下饲养，光照/黑暗循环12小时，并随意获得标准啮齿动物食物和水。 <p class="jove_titl…

Representative Results

统计学所有数据均表示为平均值±标准偏差。单因素方差分析用于具有三个或更多条件的实验，然后进行Bonferroni事后检验以比较各个组。将等于或小于 0.05 的 p 值视为显著性。使用商业软件进行所有统计分析。 RDN后，Ang II引起的血压升高减弱在输注Ang II后1周观察到收缩压（SBP）显着升高。与Sham + Ang II组相比，RDN + Ang II组在RDN手术后21天显示SBP?…

Discussion

自症状性HTN-3^试验7，25的阴性结果发表以来，RDN是否可以降低血压一直存在争议。然而，几项临床试验和动物实验已经证明了RDN对高血压^{人和动物的积极}有效结果9，¹⁰，¹¹，¹²，¹³，^14，15，^16</…

Materials

Angiotensin II	Sangon Biotech	CAS:4474-91-3	To make a hypertensive animol model
Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody	Abcam	ab137869	To evaluate the expression of TH of renal nerves
Blood Pressure Analysis	Visitech Systems	BP-2000	Measure the blood pressure of mice
Mini-osmotic pump	DURECT Corporation	CA 95014	To fill with Angiotensin II
Norepinephrine ELISA Kit	Abcam	ab287789	to measure renal norepinephrine levels
Phenol	Sangon Biotech	CAS:108-95-2	Damage the renal sympathetic nerve
Weighing paper	Sangon Biotech	F512112	To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112.