La mejora de la denervación renal mitigó la hipertensión inducida por la infusión de angiotensina II
Summary
Aquí, presentamos un protocolo para la denervación simpática renal (RDN) en ratones con hipertensión inducida por infusión de angiotensina II. El procedimiento es repetible, conveniente y permite estudiar los mecanismos reguladores de RDN sobre hipertensión e hipertrofia cardíaca.
Abstract
Los beneficios de la denervación simpática renal (RDN) sobre la presión arterial se han demostrado en un gran número de ensayos clínicos en los últimos años. Sin embargo, el mecanismo regulador de RDN en la hipertensión sigue siendo difícil de alcanzar. Por lo tanto, es esencial establecer un modelo RDN más simple en ratones. En este estudio, se implantaron mini bombas osmóticas llenas de angiotensina II en ratones C57BL / 6 de 14 semanas de edad. Una semana después de la implantación de la mini bomba osmótica, se realizó un procedimiento RDN modificado en las arterias renales bilaterales de los ratones utilizando fenol. A los ratones de la misma edad se les dio solución salina y se les sirvió como grupo simulado. La presión arterial se midió al inicio del estudio y cada semana posteriormente durante 21 días. Luego, se recolectaron la arteria renal, la aorta abdominal y el corazón para el examen histológico utilizando tinción de H&E y Masson. En este estudio, presentamos un modelo de RDN simple, práctico, repetible y estandarizado, que puede controlar la hipertensión y aliviar la hipertrofia cardíaca. La técnica puede denervar los nervios simpáticos renales periféricos sin daño a la arteria renal. En comparación con los modelos anteriores, el RDN modificado facilita el estudio de la patobiología y la fisiopatología de la hipertensión.
Introduction
La hipertensión es una enfermedad cardiovascular crónica importante en todo el mundo. La hipertensión no controlada podría dañar los órganos diana y contribuir a la insuficiencia cardíaca, accidente cerebrovascular y enfermedades renales crónicas 1,2,3. La prevalencia de la hipertensión ha aumentado del 20% al 31% entre 1991 y 2007 en China. El número de adultos con hipertensión en China podría duplicarse tras una reciente revisión de los criterios diagnósticos para la hipertensión (130/80 mmHg)4. La hipertensión puede ser controlada por medicamentos, sin embargo, aproximadamente el 20% de los pacientes son incapaces de controlar su hipertensión, incluso cuando reciben al menos tres fármacos antihipertensivos (incluyendo un diurético) a la dosis máxima tolerada, lo que puede conducir al desarrollo de hipertensión resistente a los medicamentos5.
Se ha demostrado que la denervación simpática renal (RDN) es un tratamiento potencial para la hipertensión. En 2009, Krum y sus colegas informaron sobre el tratamiento de la hipertensión resistente utilizando RDN por primera vez. Se encontró que la ablación percutánea de la arteria renal puede causar efectivamente la reducción persistente de la presión arterial en los pacientes6. Sin embargo, el fracaso del ensayo Symplicity Hypertension 3 (HTN-3) impidió la aplicación de RDN7, convirtiendo RDN en una terapia controvertida. Sin embargo, la perspectiva de RDN aún no se ha descartado. Ensayos clínicos recientes, incluyendo RADIANCE-HTN SOLO, SPYRAL HTN-OFF MED/ON MED y SPYRAL HTN-OFF MED Pivotal han confirmado la eficacia de RDN en la hipertensión 8,9,10,11,12. Por lo tanto, es necesario realizar una investigación mecanicista más detallada para explorar los efectos de la RDN.
El propósito general de este estudio es demostrar cómo se puede modificar la RDN en ratones para producir una cirugía más simple y estable. Un gran número de experimentos han estudiado diversos enfoques de RDN, como la crioablación intravascular, la ecografía extracorpórea y la aplicación local de una sustancia química o neurotoxina en diferentes modelos animales 13,14,15,16,17. El modelo RDN generado mediante ablación química con fenol es un modelo experimental bien establecido para estudiar la patogénesis de la activación simpática en la hipertensión. Este modelo se genera por corrosión química de los nervios simpáticos renales con solución de fenol / etanol al 10% utilizando un hisopo de algodón18. Por un lado, la RDN convencional inhibe potencialmente la actividad simpática renal, que luego disminuye la secreción de renina y la reabsorción de sodio, y aumenta el flujo sanguíneo renal. Por otro lado, suprime el sistema renina-angiotensina-aldosterona19. Por lo tanto, RDN tiene un efecto beneficioso sobre la hipertensión. Sin embargo, el modelo RDN generado por ablación química carece de criterios de ablación y tiempo de ablación y los detalles del procedimiento experimental aún no están claros. Además, no hay informes técnicos disponibles. En este informe, describimos un protocolo quirúrgico para la generación del modelo RDN con fenol utilizando papel de pesaje en hipertensión inducida por angiotensina II (Ang II) en ratones C57BL / 6. Envolvemos la arteria renal con papel de pesaje que contiene fenol y unificamos el tiempo de ablación, lo que ayuda a establecer un modelo RDN más reproducible y confiable. Este modelo experimental tiene como objetivo evaluar el efecto de la RDN sobre la hipertensión.
Protocol
Representative Results
Discussion
Si la RDN podría disminuir la presión arterial se ha vuelto controvertida desde la publicación del resultado negativo del ensayo de simplicidad HTN-3 7,25. Sin embargo, los diversos ensayos clínicos y experimentos con animales han demostrado resultados positivos y efectivos de RDN en humanos y animales hipertensos 9,10,11,12,13,14,15,16,17.<sup class="xref…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81770420), la Comisión de Ciencia y Tecnología de la Municipalidad de Shanghai (20140900600), el Laboratorio Clave de Medicina Geriátrica Clínica de Shanghai (13dz2260700), la Especialidad Clínica Municipal Clave de Shanghai (shslczdzk02801) y el Centro de Enfermedad Arterial Coronaria Geriátrica, Hospital Huadong Afiliado a la Universidad de Fudan.
Materials
| Angiotensin II | Sangon Biotech | CAS:4474-91-3 | To make a hypertensive animol model |
| Anti-Tyrosine Hydroxylase antibody | Abcam | ab137869 | To evaluate the expression of TH of renal nerves |
| Blood Pressure Analysis | Visitech Systems | BP-2000 | Measure the blood pressure of mice |
| Mini-osmotic pump | DURECT Corporation | CA 95014 | To fill with Angiotensin II |
| Norepinephrine ELISA Kit | Abcam | ab287789 | to measure renal norepinephrine levels |
| Phenol | Sangon Biotech | CAS:108-95-2 | Damage the renal sympathetic nerve |
| Weighing paper | Sangon Biotech | F512112 | To destroy renal nerve with weighing paper immersed with phenol; https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F512112. |
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