클로르헥시딘 글루코네이트 유발 복막 손상의 마우스 모델
1School of Medicine, College of Medicine,I-Shou University, 2Division of Nephrology, Department of Internal Medicine,E-DA Hospital, 3Department of Pediatrics,National Cheng Kung University Hospital, 4Institute of Clinical Medicine, College of Medicine,National Cheng Kung University, 5Division of Nephrology, Department of Internal Medicine,E-DA Dachang Hospital
Summary
현재 프로토콜은 클로르헥시딘 글루코네이트(CG) 유발 복막 섬유증의 복막 투석(PD) 마우스 모델을 설정합니다. 현재 모델은 다른 PD 동물 모델에 비해 간단하고 사용하기 쉽습니다.
Abstract
복막 섬유증은 복막 투석(PD)의 중요한 합병증입니다. 이 문제를 조사하고 해결하기 위해서는 PD의 적절한 동물 모델이 필요합니다. 본 프로토콜은 PD 환자의 상태를 모방하는 클로르헥시딘 글루코네이트(CG) 유도 복막 섬유증 모델을 설정합니다. 복막 섬유증은 수컷 C57BL/6 마우스에서 총 9회 동안 3주 동안 15% 에탄올에 0.1% CG를 복강내 주사하여(격일로 투여) 유도했습니다. 그런 다음 22일째에 복막 기능 테스트를 수행했습니다. 생쥐를 희생시킨 후, 복벽의 정수리 복막과 간의 내장 복막을 적출 하였다. 그들은 Masson의 삼색 염색 후 현미경으로 분석했을 때 더 두껍고 섬유질적이었습니다. 한외여과율은 감소하였고, 포도당 질량수송은 CG에 의해 유도된 복막 투과성의 증가를 나타내었다. 이렇게 확립된 PD 모델은 PD 기술을 개선하고, 투석 효능을 개선하고, 환자 생존을 연장하는 데 응용할 수 있다.
Introduction
복막 투석(PD)은 일종의 신대체 요법입니다. 그러나 PD는 해결할 수 없는 문제가 있다. 예를 들어, 장기간의 PD 치료는 복막 손상을 야기할 수 있고, 결국 한외여과 실패 및 치료 중단을 초래할 수 있다(1,2,3,4,5,6). 복막 섬유증은 가장 심각한 합병증중 하나입니다 7,8. 복막 섬유증은 간질 내 세포외 기질의 침착 및 축적, 복막의 신혈관신생 및 혈관병증을 특징으로 한다 9,10.
이러한 복막 변화의 주요 원인은 재발성 복막염 및 투석액의 비생체적합성이며, 이는 고삼투압, 고포도당, 낮은 pH 및 포도당 분해 생성물 축적이다11,12. 따라서 적절한 동물 실험 모델은 연구자들이 PD 치료 중 복막의 생리학적 및 병리학적 변화를 더 잘 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다. 따라서 PD 기술 및 투석 효능을 향상시키고 환자의 생존을 연장하기 위해서는 동물 PD 모델을 구축하는 것이 중요합니다. 이 연구는 앞서 설명한 바와 같이 클로르헥시딘 글루코네이트(CG)의 복강내(i.p.) 주사에 의해 PD 마우스 모델을 생성하는 것을 목표로 했습니다 13,14. 이 PD 마우스 모델은 다른 PD 동물 모델에 비해 간단하고 사용하기 쉬우며 실현 가능합니다.
Protocol
모든 마우스 실험은 E-DA Hospital/I-Shou University의 Laboratory Animal Center의 승인을 받았으며 “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals”(NRC, USA 2011)에 따라 처리되었습니다. 7-8주령의 수컷 C57BL/6 마우스를 본 연구에 사용하였다. 1. 화학 약품 준비 0.1% 클로르헥시딘 글루코네이트(CG, 재료 표 참조)를 15% 에탄올에 희석하여 화학적 자극제를 준비합니다. </…
Representative Results
그림 1A,B에서 복벽의 정수리 복막은 Masson의 삼색 염색17에서 현저하게 두껍고 섬유화되었으며, 이는 CG 노출 그룹에서 복막 섬유증이 대조군 식염수 그룹(NS)보다 더 심각함을 나타냅니다. 그림 2A,B에서 간 표면의 내장 복막도 현저하게 두껍고 섬유화되어 CG 노출 그룹에서 복막 섬유증이 대조군 식염수군(NS)보다 더 심하다?…
Discussion
본 연구에서는 마우스 PD 모델을 i.p. CG를 주사하고, 그 결과 이 모델에서 복막 섬유증과 기능 저하가 나타나 PD 환자의 상태를 모방하였다.
프로토콜에는 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 첫째, CG 또는 NS의 i.p. 주사를 수행하기 위해서는 천자로 인한 복강 내 장기 손상을 방지하기 위해 집게를 사용하여 마우스의 복벽 피부를 집어 올려야 합니다. 둘째, 조직학적 분석을 위해 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 Shin-Han Tseng에게 비판적인 토론과 연구의 부분적인 실행에 진심으로 감사드립니다. 이 연구는 E-DA 병원 연구 재단과 대만 국립 청쿵 대학교의 EDAHP110003 및 NCKUEDA110002의 지원을 받았습니다.
Materials
| 0.9% Normal Saline | Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan | – | |
| 10% neutral buffered formalin | Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan | 00002A | |
| Automatic biochemical analyzer | Hitachi Ltd., Tokyo, Japan | Labospect Series 008 | for determining glucose concentration |
| Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O | Sigma-Aldrich, MO, USA | C9394 | diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection |
| Ethanol | Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA | BAKR8006-05 | diluted to 15% with normal saline for working concentration |
| Glucose (Dianeal) | Baxter International, Inc., IL, USA | FNB9896 | Commercial dialysis solution (4.25%) |
| GraphPad Prism 8.0 | GraphPad Software, Inc., CA, US | ||
| L-type Glu 2 assay | FUJIFILM Wako, Japan | 461-32403 | |
| Xylazine 20 | Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan | – | |
| Zoletil 50 | Virbac Laboratories, Carros, France | – |
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Citar este artigo
Chang, M., Wang, H., Chen, L., Gao, J., Hung, S., Chiou, Y., Lee, Y. A Mice Model of Chlorhexidine Gluconate-Induced Peritoneal Damage. J. Vis. Exp. (182), e63903, doi:10.3791/63903 (2022).