En musemodel af chlorhexidingluconat-induceret peritoneal skade

Summary

Denne protokol etablerer en peritonealdialyse (PD) musemodel af chlorhexidingluconat (CG)-induceret peritoneal fibrose. Den nuværende model er enkel og nem at bruge sammenlignet med andre PD dyremodeller.

Abstract

Peritoneal fibrose er en vigtig komplikation af peritonealdialyse (PD). For at undersøge og løse dette problem kræves en passende dyremodel af PD. Denne protokol etablerer en chlorhexidingluconat (CG) induceret peritoneal fibrose-model, der efterligner tilstanden hos en patient med PD. Peritoneal fibrose blev induceret ved intraperitoneal injektion af 0,1% CG i 15% ethanol i 3 uger (administreret hver anden dag), i alt ni gange i mandlige C57BL/6-mus. Peritoneale funktionelle tests blev derefter udført på dag 22. Efter at musene blev ofret, blev parietal peritoneum i abdominalvæggen og leverens viscerale peritoneum høstet. De var tykkere og mere fibrotiske, når de blev analyseret mikroskopisk efter Massons trikrome farvning. Ultrafiltreringshastigheden faldt, og glukosemassetransport indikerede en CG-induceret stigning i peritonealpermeabilitet. Den således etablerede PD-model kan have anvendelser til forbedring af PD-teknologi, dialyseeffektivitet og forlængelse af patientens overlevelse.

Introduction

Peritonealdialyse (PD) er en type nyreerstatningsterapi. PD har dog problemer, der ikke kan løses. For eksempel kan langvarig PD-behandling forårsage peritoneal skade, hvilket i sidste ende fører til ultrafiltreringssvigt og tilbagetrækning af behandling 1,2,3,4,5,6. Peritoneal fibrose er en af de mest alvorlige komplikationer ^7,8. Peritoneal fibrose er karakteriseret ved aflejring og akkumulering af ekstracellulær matrix inden for interstitium og neo-angiogenese og vaskulopati i peritoneum ^9,10.

Hovedårsagerne til disse peritoneale ændringer er tilbagevendende peritonitis og ikke-biokompatibilitet af dialysatet, som er hyperosmotisk, høj glukose, lav pH og glukosenedbrydningsproduktakkumulering^11,12. Derfor kan egnede dyreforsøgsmodeller hjælpe forskere med bedre at studere bughindens fysiologiske og patologiske ændringer under PD-terapi. Derfor er etablering af en dyre-PD-model vigtig for at forbedre PD-teknologi og dialyseeffektivitet og forlænge patientens overlevelse. Denne undersøgelse havde til formål at generere en PD-musemodel ved intraperitoneal (i.p.) injektion af chlorhexidingluconat (CG), som beskrevet tidligere^13,14. Denne PD-musemodel er enkel, nem at bruge og gennemførlig sammenlignet med andre PD-dyremodeller.

Protocol

Alle museforsøg blev godkendt af Laboratory Animal Center på E-DA Hospital / I-Shou University og blev håndteret i henhold til “Guide for the Care and Use of Laboratory Animals” (NRC, USA 2011). C57BL/6-hanmus, 7-8 uger gamle, blev anvendt til nærværende undersøgelse. 1. Kemisk forberedelse Forbered det kemiske irritationsmiddel ved at fortynde 0,1% chlorhexidingluconat (CG, se materialetabel) i 15% ethanol. <str…

Representative Results

I figur 1A, B var parietal peritoneum i abdominalvæggen markant tykkere og mere fibrotisk under Massons trikrome farvning17, hvilket indikerer, at peritoneal fibrose i den CG-eksponerede gruppe er mere alvorlig end i kontrolsaltvandsgruppen (NS). I figur 2A,B var det viscerale peritoneum på leveroverfladerne også markant tykkere og mere fibrotisk, hvilket beviser, at peritoneal fibrose i den CG-eksponerede gruppe er me…

Discussion

I denne undersøgelse præsenteres en mus PD-model ved i.p. injektion af CG, og resultaterne viste peritoneal fibrose og funktionel forringelse i denne model, som efterlignede PD-patientens tilstand.

Der er flere kritiske trin i protokollen. For det første, for at udføre en i.p. injektion af CG eller NS, skal musens abdominalvægshud afhentes ved hjælp af tang for at forhindre punkteringsinduceret intraperitoneal organskade. For det andet skal det område, der er beskadiget af ip-injektione…

Materials

0.9% Normal Saline	Y F CHEMICAL CORP., New Taipei City, Taiwan	–
10% neutral buffered formalin	Taiwan Burnett International Co., Ltd., Taipei City, Taiwan	00002A
Automatic biochemical analyzer	Hitachi Ltd., Tokyo, Japan	Labospect Series 008	for determining glucose concentration
Chlorhexidine digluconate solution, 20% in H2O	Sigma-Aldrich, MO, USA	C9394	diluted to 0.1% with 15% ethanol for injection
Ethanol	Avantor Performance Materials, LLC, PA, USA	BAKR8006-05	diluted to 15% with normal saline for working concentration
Glucose (Dianeal)	Baxter International, Inc., IL, USA	FNB9896	Commercial dialysis solution (4.25%)
GraphPad Prism 8.0	GraphPad Software, Inc., CA, US
L-type Glu 2 assay	FUJIFILM Wako, Japan	461-32403
Xylazine 20	Juily Pharmaceutical Co., Ltd., New Taipei City, Taiwan	–
Zoletil 50	Virbac Laboratories, Carros, France	–