Captação e Descelularização de Membros Posteriores de Rato Usando Biorreator Ex Vivo à Base de Perfusão para Alotransplante Composto Vascularizado

Aisha Adil; Golnaz Karoubi; Siba Haykal

doi:10.3791/64069

É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.

Artigo de método

Captação e Descelularização de Membros Posteriores de Rato Usando Biorreator Ex Vivo à Base de Perfusão para Alotransplante Composto Vascularizado

2.2K visualizações

⸱

DOI:

10.3791/64069

⸱

9 de junho de 2022

Aisha Adil¹^,² , Golnaz Karoubi¹^,³ , Siba Haykal¹^,²^,⁴

¹Latner Thoracic Research Surgical Laboratories, University Health Network, Toronto General Hospital, ²Institute of Medical Science, Temerty Faculty of Medicine, University of Toronto, ³Institute of Laboratory Medicine and Pathobiology, Temerty Faculty of Medicine, University of Toronto, ⁴Division of Plastic & Reconstructive Surgery, Department of Surgery, University of Toronto

Neste artigo

Resumo

Descrevemos a técnica cirúrgica e o processo de descelularização de membros posteriores compostos de ratos. A descelularização é realizada usando dodecil sulfato de sódio de baixa concentração através de um sistema de perfusão de máquina ex vivo.

Resumo

Pacientes com lesões traumáticas graves e perda tecidual requerem reconstrução cirúrgica complexa. O alotransplante composto vascularizado (VCA) é uma via reconstrutiva em evolução para a transferência de múltiplos tecidos como uma subunidade composta. Apesar da natureza promissora da VCA, as necessidades imunossupressoras a longo prazo são uma limitação significativa devido ao aumento do risco de malignidades, toxicidade de órgãos-alvo e infecções oportunistas. A engenharia tecidual de andaimes compostos acelulares é uma alternativa potencial na redução da necessidade de imunossupressão. Neste documento, descreve-se a aquisição de um membro posterior de um rato e sua subsequente descelularização usando dodecil sulfato de sódio (SDS). A estratégia de aquisição apresentada baseia-se na artéria femoral comum. Um sistema de biorreator baseado em perfusão mecânica foi construído e utilizado para descelularização ex vivo do membro posterior. A descelularização perfusional bem-sucedida foi realizada, resultando em uma aparência branca translúcida do membro posterior. Observou-se uma rede vascular intacta, perfusável, em todo o membro posterior. As análises histológicas mostraram a remoção do conteúdo nuclear e a preservação da arquitetura tecidual em todos os compartimentos teciduais.

Introdução

A VCA é uma opção emergente para pacientes que necessitam de reconstrução cirúrgica complexa. Lesões traumáticas ou ressecções tumorais resultam em perda volumétrica de tecido que pode ser difícil de reconstruir. A VCA oferece o transplante de múltiplos tecidos, como pele, osso, músculo, nervos e vasos, como um enxerto composto de um doador para um receptor¹. Apesar de sua natureza promissora, a VCA é limitada devido a regimes imunossupressores de longo prazo. O uso ao longo da vida dessas drogas resulta em aumento do risco de infecções oportunistas, neoplasias malignas e toxicidade de órgãos-alvo ^1,2,3....