O protocolo aqui fornece uma amostragem dinâmica detalhada em tempo real do fluido extracelular do hipocampo de ratos acordados usando um sistema de microdiálise.
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Artigo de método
Coleta Dinâmica em Tempo Real de Fluido Extracelular do Hipocampo de Ratos Conscientes Usando um Sistema de Microdiálise
Neste artigo
Resumo
Resumo
Uma variedade de doenças do sistema nervoso central (SNC) está associada a alterações na composição do líquido extracelular hipocampal (HCEC). No entanto, a dificuldade em obter o HECF em tempo real de ratos conscientes tem restringido por muito tempo a avaliação da progressão da doença do SNC e a eficácia da terapia etnomédica. Encorajadoramente, uma técnica de microdiálise cerebral pode ser usada para amostragem contínua com as vantagens de observação dinâmica, análise quantitativa e um pequeno tamanho de amostragem. Isso permite o monitoramento de mudanças no conteúdo de fluido extracelular para compostos de ervas tradicionais e seus metabólitos no cérebro de animais vivos. O objetivo deste estudo foi, portanto, implantar com precisão uma sonda de microdiálise do líquido cefalorraquidiano na região hipocampal de ratos Sprague Dawley (SD) com um aparelho estereotáxico cerebral tridimensional, cortando pesos moleculares superiores a 20 kDa. O HECF de alta qualidade foi então obtido de ratos conscientes usando um sistema de controle de amostragem de microdiálise com uma taxa de amostragem ajustável de 2,87 nL/min - 2,98 mL/min. Em conclusão, nosso protocolo fornece um método eficiente, rápido e dinâmico para a obtenção do HECF em ratos acordados com a ajuda da tecnologia de microdiálise, o que nos fornece possibilidades ilimitadas para explorar melhor a patogênese das doenças relacionadas ao SNC e avaliar a eficácia das drogas.
Introdução
Doenças do sistema nervoso central (SNC) com alta morbidade, como doenças neurodegenerativas, traumatismo cranioencefálico, lesão cerebral induzida por hipóxia de altitude e acidente vascular cerebral isquêmico, são causas cruciais da crescente mortalidade em todo o mundo 1,2,3. O monitoramento em tempo real de citocinas e alterações proteicas em regiões específicas do cérebro contribui para a precisão diagnóstica de doenças do SNC e estudos farmacocinéticos cerebrais após medicação. A investigação científica tradicional utiliza homogeneizado de tecido cerebral ou uma recolha....
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Protocolo
O protocolo experimental foi conduzido de acordo com os requisitos do Comitê de Uso de Animais de Laboratório e Cuidados e Uso de Animais Institucionais da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (Número de registro: 2021-11). Ratos machos da raça Sprague Dawley (SD) (280 ± 20 g, 6-8 semanas de idade) foram utilizados para o presente estudo.
1. Cirurgia de implante de sonda de microdiálise cerebral
- Utilizar isoflurano a 3% e 1,5% para indução e manutenção da anestesia em ratos, respectivamente, utilizando um sistema de anestesia animal em mistura ar-oxigênio a 0,6 L/min. Certifique-se de que os rat....
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Resultados
Seguindo o protocolo experimental acima e os parâmetros de amostragem estabelecidos na Tabela 1, o HECF de rato semelhante à água, incolor e transparente foi obtido na taxa de amostragem estabelecida (Figura 1K). A pressão osmótica do HECF de rato obtido foi de 290-310 mOsm/L, o que pode indiretamente garantir a qualidade das amostras18,19.
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Discussão
A patogênese das doenças do SNC ainda não é totalmente compreendida, o que dificulta o desenvolvimento de novas terapias e fármacos. Estudos têm demonstrado que a maioria das doenças do SNC está intimamente relacionada às lesões hipocampais20,21,22. A técnica de microdiálise cerebral proposta pode ter como alvo regiões específicas do cérebro, especialmente o hipocampo, o que a diferencia da abordagem tradicional de coleta de HEC.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (82104533), pelo Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan (2021YJ0175) e pela Fundação de Ciência Pós-Doutoral da China (2020M683273). Os autores gostariam de agradecer ao Sr. Yuncheng Hong, engenheiro de equipamentos sênior da Tri-Angels D&H Trading Pte. Ltd. (Singapura) pela prestação de serviços técnicos para a técnica de microdiálise.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Forno de secagem ao ar | Suzhou Great Electronic Equipment Co., Ltd | GHG-9240A | |
| Sistema de anestesia animal | Rayward Life Technology Co., Ltd | R500IE | |
| Mantenedor da temperatura animal | Rayward Life Technology Co., Ltd | 69020 | |
| Líquido cefalorraquidiano artificial | Pequim leagene biotech. Co., Ltd | CZ0522 | |
| Sonda | de microdiálise cerebral Cateter CMA Microdialysis AB | T56518 | |
| Harness de infusão CMA Microdialysis AB | T56518 | ||
| Covance | Instech Laboratories, Inc. | CIH95 | |
| Resinas à base de dentadura | Shanghai Eryi Zhang Jiang Biomaterials Co., Ltd | 190732 | |
| Broca craniana elétrica | Rayward Life Technology Co., Ltd | 78001 | |
| Barbeador elétrico | Rayward Life Technology Co., Ltd | CP-5200 | |
| Tanque de movimento livre para animais | CMA Microdiálise AB | CMA120 | |
| Injeção de heparina sódica | Chengdu Haitong Pharmaceutical Co., Ltd | H51021208 | |
| Iodophor | Sichuan Lekang Pharmaceutical Accessories Co., Ltd | 202201 | |
| Isofluran | Rayward Life Technology Co., Ltd | R510-22 | |
| Cateter de microdiálise estilete | ; Tubo de coleta de microdiálise CMA Microdialysis AB | 8011205 | |
| Coletor de microdiálise CMA Microdialysis AB | 7431100 | ||
| Tubulação de microdiálise CMA Microdialysis AB | CMA4004 | ||
| fep | CMA Microdialysis AB | 3409501 | |
| Microdiálise in vitro stand | Bomba de microinjeção de microdiálise CMA Microdialysis AB | CMA130 | |
| CMA Microdialysis AB | 788130 | ||
| Seringa para microdiálise (1,0 mL) | Adaptador de tubo de microdiálise CMA Microdialysis AB | 8309020 | |
| CMA Microdiálise AB | 3409500 | ||
| Suturas cirúrgicas não absorvíveis | Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd | S19004 | |
| Pinça oftálmica | Rayward Life Technology Co., Ltd | F12016-15 | |
| Osmômetro | Lö ser | OM 807 | |
| Colírio de hialuronato de sódio | URSAPHARM Arzneimittel GmbH | H20150150 | |
| Aparelho de estereotaxia | Rayward Life Technology Co., Ltd | 68025 | |
| Tesoura cirúrgica | Rayward Life Technology Co., Ltd | S14014-15 | |
| Tesoura cirúrgica | Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd | BY-103 | |
| Agulha de seringa | CMA Microdiálise AB | T56518 | |
| Solução de tripsina | Boster Biological Technology, Ltd. | ||
| Limpador ultrassônico | Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd | KMH1-240W8101 |
Referências
- Erkkinen, M. G., Kim, M. O., Geschwind, M. D. Clinical neurology and epidemiology of the major neurodegenerative diseases. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 10 (4), 033118(2018).
- Salehi, A., Zhang, J. H., Obenaus, A.
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Reimpressões e permissões
