O presente protocolo descreve o método de análise da flora intestinal utilizando o sequenciamento do gene 16S rRNA baseado em Illumina e fornece uma estrutura para avaliar a eficácia de decocções fitoterápicas.
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Artigo de método
Efeitos do Desmodium caudatum sobre os hormônios gastrintestinais e a flora intestinal em ratos com gastrite
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
A fim de explorar preliminarmente os efeitos de Desmodium caudatum sobre a gastrite e flora intestinal em ratos, um modelo de gastrite crônica em ratos foi estabelecido usando o método clássico de salicilato de sódio. Dezoito ratos com FPS foram divididos em três grupos: grupo controle (Grupo C), grupo modelo (Grupo M) e grupo tratamento (Grupo T). Cortes anatomopatológicos da parede gástrica foram retirados dos ratos de cada grupo. Além disso, as concentrações de gastrina e malondialdeído no soro dos ratos de cada grupo foram determinadas por ELISA. Adicionalmente, os efeitos de D. caudatum na flora intestinal de ratos com gastrite foram explorados através de uma comparação detalhada das comunidades bacterianas intestinais nos três grupos, empregando o sequenciamento do gene 16S rRNA baseado em Illumina. Os resultados indicaram que a decocção de D. caudatum pode reduzir o conteúdo de malondialdeído e aumentar o conteúdo de gastrina. Além disso, a decocção de D. caudatum aumentou a diversidade e abundância da flora intestinal, exercendo um impacto positivo no tratamento da gastrite, regulando e restaurando a flora intestinal.
Introdução
A gastrite crônica (DC), uma das doenças clínicas mais comuns, caracteriza-se por alterações inflamatórias crônicas e persistentes no epitélio da mucosa gástrica, que é frequente e repetidamente atacado por vários fatorespatogênicos1. A taxa de incidência de CG ocupa o primeiro lugar entre todos os tipos de doenças estomacais, sendo responsável por 40% a 60% da taxa de atendimento ambulatorial do Departamento de Gastroenterologia2. Além disso, a taxa de incidência geralmente aumenta com a idade, especialmente em indivíduos de meia-idade e mais velhos3. Sem dúvida, o GC reduz significativamente a q....
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Protocolo
Os procedimentos para o cuidado e uso de animais foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade Normal de Mianyang, e todas as regulamentações institucionais e governamentais relevantes sobre o uso ético de animais foram rigorosamente seguidas. Para o presente estudo, ratos SPF (espécie Kunming, machos e fêmeas, pesando 180-220 g) foram utilizados. Os animais foram obtidos de fonte comercial (ver Tabela de Materiais). Todos os animais foram alojados em ambiente livre de patógenos e proporcionaram acesso ad libitum à ração.
1. Preparação dos reagentes
- Preparar uma solução de salicila....
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Resultados
Os resultados do corte anatomopatológico da parede do estômago estão representados na Figura 1. Em comparação ao Grupo C, o Grupo M apresentou atrofia discreta da parede gástrica e inflamação leve. No entanto, quando comparado ao Grupo M, o Grupo T não apresentou inflamação evidente, metaplasia intestinal ou atrofia. Isto sugere que a decocção de D. caudatum pode efetivamente melhorar a gastrite.
Os resultados da dosagem hormonal gastrintestinal sérica es.......
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Discussão
D. caudatum, uma medicina popular comumente utilizada pela nacionalidade Qiang12, tem demonstrado eficácia significativa no tratamento de doenças gastrointestinais. Com o avanço das pesquisas farmacológicas modernas, o desequilíbrio da flora resultante do desequilíbrio da microecologia gastrointestinal é identificado como um fator-chave nas doenças gastrointestinais agudas ecrônicas22,23. Certos micro-organismos no trato intestina.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pelos principais projetos de P&&D do Departamento de Ciência e Tecnologia da Província de Sichuan (2020YFS0539).
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Análise de diversidade alfa | Mothur 1.30.2 | ||
| Kit de extração de gel de ácido desoxirribonucléico (DNA) AxyPrep | Axygen Biosciences | AP-GX-50 | |
| Análise de diversidade beta | Qiime 1.9.1 | ||
| Geladeira criogênica | Forma-86C ULT freezer | ||
| Desmodium caudatum | Hospital de Medicina Tradicional Chinesa de Beichuan Qiang Condado | ||
| E.Z.N.A. kit de solo | Omega Bio-tek | D5625-01 | |
| Illumina MiSeq Platform | Illumina Miseq PE300 / NovaSeq PE250 | ||
| Multiskan Spectrum | spectraMax i3 | ||
| OTU clustering | Uparse 7.0.1090 | ||
| Estatísticas OTU | Usearch 7.0 | ||
| Instrumento de PCR | TransGen AP221-02 | ||
| Instrumento de PCR | ABI GeneAmp 9700 | ||
| QuantiFluor-ST de fita dupla Sistema de DNA (dsDNA) | Promega Corp. | ||
| Anotação de classificação | de sequência Classificador RDP 2.11 | ||
| Salicilato de sódio | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
| Ratos SPF | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
| SPSS 18.0 | IBM |
Referências
- Marginean, C. M., et al. The importance of accurate early diagnosis and eradication in Helicobacter pylori infection: pictorial summary review in children and adults. Antibiotics (Basel). 12 (1), 60(2022).
- Sipponen, P., Maaroos, H. I.
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Reimpressões e permissões
