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बहाली की सुविधा के लिए चंदवा बनाने वाले विशाल केल्प का फील्ड संग्रह और प्रयोगशाला रखरखाव

Published: June 7, 2024 doi: 10.3791/66092
Automatic Translation
1, 2, 1, 1, 3, 4, 5, 5, 6, 1, 1, 1
1Department of Ecology and Evolutionary Biology, University of California, Irvine, 2Department of Ecology and Evolutionary Biology, University of California, Santa Cruz, 3Facultad de Ciencias Marinas, Universidad Autónoma de Baja California, 4Facultad de Ciencias, Universidad Autónoma de Baja California, 5Instituto de Investigaciones Oceanológicas, Universidad Autónoma de Baja California, 6The Nature Conservancy

Summary

यह प्रोटोकॉल क्षेत्र संग्रह और क्षेत्र सेटिंग्स में 'हरी बजरी' तकनीक की सफलता और सीमाओं को संबोधित करने के लिए बहाली परीक्षणों में उपयोग के लिए चंदवा बनाने विशाल केल्प के साथ वरीयता प्राप्त सब्सट्रेट के नियमित प्रयोगशाला रखरखाव का वर्णन करता है।

Abstract

चंदवा बनाने वाले केल्प्स आवश्यक नींव प्रजातियां हैं, जो जैव विविधता का समर्थन करती हैं और सालाना $ 500 बिलियन से अधिक मूल्य की पारिस्थितिकी तंत्र सेवाएं प्रदान करती हैं। जलवायु-संचालित पारिस्थितिक तनावों के कारण विशाल केल्प वनों की वैश्विक गिरावट नवीन बहाली रणनीतियों की आवश्यकता को रेखांकित करती है। 'ग्रीन बजरी' के रूप में जानी जाने वाली एक उभरती हुई बहाली तकनीक का उद्देश्य व्यापक पानी के नीचे श्रम के बिना बड़े क्षेत्रों में युवा केल्प को बीज देना है और लागत-प्रभावशीलता और मापनीयता के कारण एक आशाजनक बहाली उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है। यह वीडियो लेख विशाल केल्प, मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा के संवर्धन के लिए एक प्रोटोकॉल और उपकरण दिखाता है। यह क्षेत्र सेटिंग्स में इस पद्धति की सफलताओं और सीमाओं को संबोधित करने के लिए आगे के अध्ययन के लिए एक संसाधन भी प्रदान करता है। हम 'हरी बजरी' तकनीक का उपयोग करके प्रारंभिक जीवन चरणों के साथ वरीयता प्राप्त सब्सट्रेट को इकट्ठा करने, स्पोरुलेटिंग, टीकाकरण, पालन, रखरखाव और निगरानी के लिए क्षेत्र और प्रयोगशाला-आधारित तरीकों की रूपरेखा तैयार करते हैं। प्रोटोकॉल केल्प संरक्षण उद्देश्यों को पूरा करने में शोधकर्ताओं, प्रबंधकों और हितधारकों का समर्थन करने के लिए इस क्षेत्र में वर्तमान बहाली प्रथाओं को सरल और केंद्रीकृत करता है।

Introduction

चंदवा बनाने वाले केल्प्स (लैमिनेरियल्स के क्रम में भूरे रंग के मैक्रोलेगा) विश्व स्तर पर महत्वपूर्ण नींव प्रजातियां हैं, जो समशीतोष्ण और आर्कटिक समुद्रों में तटीय चट्टानी चट्टानों पर हावीहैं। ये केल्प्स संरचनात्मक रूप से जटिल और अत्यधिक उत्पादक बायोजेनिक आवास बनाते हैं जिन्हें केल्प वनों के रूप में जाना जाता है जो टैक्सोनॉमिक रूप से विविध समुद्री समुदायों का समर्थन करतेहैं। दुनिया भर में केल्प वन मनुष्यों को कई पारिस्थितिकी तंत्र सेवाएं प्रदान करते हैं, जिनमें वाणिज्यिक मत्स्य उत्पादन, कार्बन और पोषक चक्रण और मनोरंजक अवसर शामिल हैं, जिनका कुल अनुमानित मूल्य $ 500 बिलियनप्रति वर्ष है।

उनके पर्याप्त मूल्य के बावजूद, केल्प वन कई क्षेत्रों में बढ़ते मानवजनित दबावों का सामना करतेहैं 3. जलवायु परिवर्तन तापमान विसंगतियों 3,4,5,6,7 की बढ़ती आवृत्ति के साथ संयुक्त लंबी अवधि के महासागर वार्मिंग के कारण kelps के लिए सबसे महत्वपूर्ण खतरों में से एक प्रस्तुत करता है. समुद्र के तापमान में वृद्धि पोषक तत्व सीमा8 के साथ जुड़े हुए हैं, जबकि शारीरिक थ्रेसहोल्ड से ऊपर गर्मी तनाव के संपर्क में मृत्यु दर9 में परिणाम कर सकते हैं. परिवर्तनीय क्षेत्रीय स्थानीयतनावों 7 के साथ संयोजन में, केल्प आबादी विश्व स्तर पर प्रति वर्ष लगभग 2% की गिरावट आ रही है10 महत्वपूर्ण नुकसान औरकुछ क्षेत्रों 6,11,12,13,14 में वैकल्पिक समुदाय राज्यों के लिए लगातार बदलाव के साथ। अकेले केल्प आबादी की प्राकृतिक वसूली सक्रिय बहाली के महत्व को रेखांकित करते हुए, वर्तमान और अनुमानित नुकसान 15,16,17,18 की सीमा को उलटने के लिए पर्याप्त नहीं हो सकती है।

वर्तमान केल्प बहाली के प्रयासों तटीय चट्टानी चट्टानों 3,19 पर इन महत्वपूर्ण नींव प्रजातियों को फिर से स्थापित करने के लिए पद्धतियों का एक संयोजन का उपयोग कर सकते हैं. साइट-विशिष्ट चिंताओं को संबोधित करने के लिए चुनी गई पद्धतियां भौगोलिक संदर्भ, केल्प रिकवरी के लिए विशिष्ट बाधाओं और सामाजिक-पारिस्थितिक संदर्भ11 पर निर्भर करती हैं। सामाजिक-पारिस्थितिक प्रणालियों के कनेक्शन और अन्योन्याश्रयता को समझना महत्वपूर्ण है, और हस्तक्षेप जो स्थानीय संस्थानों को संलग्न करते हैं और स्थानीय समुदायों से समर्थन प्राप्त करते हैं, सफल बहाली प्रयासों की संभावना को बढ़ातेहैं 20.

जलवायु परिवर्तन के अलावा, शाकाहारी दबाव या अंतर-विशिष्ट प्रतिस्पर्धा ड्राइव, गिरावट, या वसूली को दबा देती है (उदाहरण के लिए, समुद्री अर्चिन13, शाकाहारी मछली 21,22, टर्फ शैवाल 9,23, या आक्रामक शैवाल24)। बहाली इन जैविक तनाव25 को हटाने पर ध्यान केंद्रित कर सकते हैं, हालांकि इन तरीकों पर्याप्त संसाधनों और निरंतर रखरखाव11 की आवश्यकता है. केल्प प्रजातियों की वसूली उत्प्रेरित करने के लिए, वहाँ एक प्रत्यक्ष बोने दृष्टिकोण की दिशा में प्रयास किया गया है, उदाहरण के लिए, बेंथोस कि पर्यावरण26 में zoospores रिलीज करने के लिए उपजाऊ केल्प ब्लेड से भरा जाल बैग वजन. हालाँकि, यह विधि समय-गहन है और इसके लिए तकनीकी पानी के नीचे की स्थापना और हटाने की आवश्यकता होती है। अन्य मामलों में पूरे वयस्क दाता पौधों की बड़ी मात्रा में प्रत्यारोपण पर ध्यान केंद्रित किया जाता है, जो निकटता से जुड़े और कमजोर दाता आबादी से समझौता कर सकते हैं और अक्सर निरंतर प्रत्यारोपण27 पर निर्भरता के कारण छोटे पैमाने तक सीमित होते हैं।

उन क्षेत्रों के लिए, जहां केल्प बीजाणु सीमा निवास स्थान विखंडन के कारण केल्प वन वसूली में बाधा डाल सकती है, एक अपेक्षाकृत नया केल्प बहाली दृष्टिकोण जिसे 'हरी बजरी' तकनीक कहा जाता है, पेश किया गया था। तकनीक का दक्षिणी नॉर्वे28 में फ्लोडेविजेन रिसर्च स्टेशन में सफलतापूर्वक परीक्षण किया गया था और लागत-प्रभावशीलता और मापनीयता के कारण बहाली के लिए एक आशाजनक विकल्प का प्रतिनिधित्व किया गया था। इस तकनीक का वर्कफ़्लो इस प्रकार है: (1) खेत में प्रजनन वयस्क केल्प से एकत्र उपजाऊ ऊतक से एक बीजाणु समाधान बनाया जाता है और फिर बजरी जैसे छोटे सब्सट्रेट पर वरीयता प्राप्त होती है; (2) प्रारंभिक चरण के केल्प्स को सब्सट्रेट पर प्रयोगशाला-नियंत्रित अजैविक स्थितियों में पाला जाता है; (3) दृश्य स्पोरोफाइट्स के साथ सब्सट्रेट को ' हरी बजरी' के रूप में विशिष्ट भित्तियों पर क्षेत्र में तैनात किया जाता है, जहां स्पोरोफाइट्स बढ़ते रहते हैं। ध्यान दें कि वयस्क व्यक्तियों के विशिष्ट प्रत्यारोपण प्रयासों के लिए गोताखोरों द्वारा श्रमसाध्य और लागत-अवरोधक पानी के नीचे की स्थापना की आवश्यकता होती है, और 'हरी बजरी' तकनीक सतह28 से सरल तैनाती का उपयोग करती है।

'ग्रीन बजरी' तकनीक को वर्तमान में विभिन्न वातावरणों और कई लैमिनेरियन केल्प प्रजातियों में कई अंतरराष्ट्रीयकार्य समूहों के सदस्यों द्वारा आजमाया जा रहा है। यह प्रोटोकॉल ऊतक संग्रह, स्पोरुलेशन, बीजारोपण, पालन की स्थिति, नियमित रखरखाव, और विशाल केल्प, मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा का उपयोग करके क्षेत्र में इस बहाली तकनीक को तैनात करने से पहले प्रारंभिक चरण केल्प की निगरानी के लिए आवश्यक सुविधाओं, सामग्रियों और विधियों का वर्णन करता है। यह प्रोटोकॉल शोधकर्ताओं, प्रबंधकों और हितधारकों के लिए एक मूल्यवान संसाधन है जो विभिन्न क्षेत्र सेटिंग्स में एम. पाइरिफेरा के साथ इस पद्धति की सफलताओं और सीमाओं में अंतर्दृष्टि प्रदान करना चाहते हैं।

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Protocol

इस प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में इस्तेमाल केल्प ऊतकों एकत्र और परमिट S-202020004-20205-001 के तहत मछली और वन्यजीव के कैलिफोर्निया विभाग द्वारा पर्यवेक्षित थे.

1. सुविधाओं और सामग्रियों की तैयारी

  1. सुनिश्चित करें कि केल्प संवर्धन सुविधाएं तापमान (10-15 डिग्री सेल्सियस) बनाए रख सकती हैं, पूर्ण-स्पेक्ट्रम प्रकाश (0-180 माइक्रोन फोटॉन एम -2 एस -1) प्रदान कर सकती हैं, और फ़िल्टर वातन (0.2 माइक्रोन ताकना आकार) प्रदान कर सकती हैं। एक अंतर्निहित आउटलेट या तारों और टयूबिंग, रोशनी और एक वायु स्रोत (चित्रा 1) के लिए एक एक्सेस पोर्ट के साथ इनक्यूबेटर सिस्टम का उपयोग करें। यदि एक इनक्यूबेटर प्रणाली परियोजना के दायरे, बजट, या इच्छित पैमाने के भीतर नहीं है, तो ठंडा, प्राकृतिक समुद्री जल या चिलर (चित्रा 2) द्वारा टेम्पर्ड पानी के स्नान का उपयोग करें। विशिष्ट विवरण के लिए सामग्री की तालिका देखें।
    1. विकास मीडिया में थर्मामीटर रखें या तापमान 10-18 डिग्री सेल्सियस के बीच सुनिश्चित करने के लिए तापमान बंदूक का उपयोग करें।
      नोट: पालन तापमान साइट- और मौसम-विशिष्ट30 हैं।
    2. 12 घंटे प्रकाश की फोटोपेरियोड के लिए पूर्ण-स्पेक्ट्रम रोशनी प्रोग्राम करें: प्रकाश स्रोत पर समय सेटिंग्स को बदलकर या यांत्रिक टाइमर का उपयोग करके 12 घंटे अंधेरा। बजरी के पास सतह के नीचे एक जलरोधक प्रकाश संश्लेषक रूप से सक्रिय विकिरण (PAR) क्वांटम मीटर के साथ प्रकाश की तीव्रता को मापें और एक मंद प्रकाश स्रोत का उपयोग करके या सिलोफ़न को लेयरिंग करके समायोजित करें (वनस्पति गैमेटोफाइट संवर्धन के मामले में, धारा 9 देखें) या प्रकाश स्रोत पर जाल (प्रकाश तीव्रता समायोजन के विवरण के लिए, धारा 6.3 देखें)।
    3. स्पोरुलेशन के एक दिन बाद वायु पंपों का उपयोग करके उचित वातन सुनिश्चित करें। हवा जनित जीवाणु संदूषण को कम करने के लिए फिल्टर (0.2 माइक्रोन ताकना आकार) का उपयोग करें।
      नोट: 'हरी बजरी' संवर्धन के लिए, वातन दबाव सभी संस्कृति कंटेनरों में पानी प्रसारित करने के लिए पर्याप्त होना चाहिए, जबकि बीज वाले सब्सट्रेट के लिए प्रारंभिक चरण केल्प के लगाव को परेशान नहीं करना चाहिए। यदि बल्किंग गैमेटोफाइट बायोमास ( धारा 9.2 देखें) मौजूद हैं, तो संस्कृति मीडिया में निलंबित गैमेटोफाइट्स को बनाए रखने के लिए वातन दबाव पर्याप्त होना चाहिए।
  2. सामग्री और स्टेशनों को स्टरलाइज़ करें। इन्हें समय से पहले तैयार करें ( सामग्री की तालिकादेखें)।
    1. 70% आइसोप्रोपिल अल्कोहल का उपयोग करके सतहों को साफ करें। यदि संभव हो तो 'हरी बजरी' नर्सरी के बाहर प्रजनन सोरी ऊतक और साफ संग्रह उपकरण को संभालें।
    2. निम्नलिखित नसबंदी विधियों का उपयोग करें: एक प्रयोगशाला ग्रेड डिटर्जेंट का उपयोग करके कुल्ला के बाद आसुत जल के साथ पूरी तरह से कुल्ला, एक पतला ब्लीच समाधान (निर्माता के निर्देशों के अनुसार) में भिगोएँ, इसके बाद आसुत जल के साथ पूरी तरह से कुल्ला, और उपयुक्त सेटिंग्स (कांच के बने पदार्थ या उपकरणों) का उपयोग करके आटोक्लेव। नसबंदी के बाद, सामग्री को एक सीलबंद कंटेनर में संग्रहीत किया जा सकता है या पन्नी के साथ लपेटा जा सकता है।
    3. लैब-ग्रेड डिटर्जेंट का उपयोग करके संवर्धन के लिए उपयोग किए जाने वाले ढक्कन के साथ कंटेनरों को साफ़ और साफ करें, इसके बाद आसुत जल के साथ पूरी तरह से कुल्ला।
      नोट: लिडेड कल्चर कंटेनर ग्रोथ मीडिया के वाष्पीकरण को कम करने में मदद करेंगे। हवा के आदान-प्रदान की अनुमति देने के लिए ढक्कन को थोड़ा खुला छोड़ दें, या हवाई संदूषण को कम करने के लिए चेक वाल्व का उपयोग करें। यदि ढक्कन वाले कंटेनर उपलब्ध नहीं हैं, तो पैराफिन फिल्म जैसे थर्माप्लास्टिक के साथ संस्कृति कंटेनरों को सील करें और 2-3 छिद्र करें। यदि बड़े टैंकों का उपयोग किया जा रहा है, तो पारदर्शी प्लास्टिक से बने वाष्पीकरण रोधी कवर का उपयोग करें।
    4. सुनिश्चित करें कि बजरी एक बनावट या थोड़ा pited सतह के बाद से gametophytes अधिक एक उच्च rugosity32,33 के साथ सब्सट्रेट पर बनाए रखा जा करने की संभावना है. बजरी को तब तक स्क्रब और कुल्ला करें जब तक कि पानी किसी भी धूल या मलबे को हटाने के लिए साफ न हो जाए। बजरी को कम से कम 24 घंटे के लिए 10% पतला ब्लीच समाधान में भिगोएँ और फ़िल्टर-निष्फल समुद्री जल से कुल्ला करें (धारा 2.1 देखें)। वैकल्पिक रूप से, स्क्रबिंग और रिंसिंग के बाद, बजरी को डी-आयनीकृत (डीआई) पानी में 1 सप्ताह के लिए भिगो दें32.
      नोट: आदर्श रूप से, स्थानीय रूप से काटा सब्सट्रेट बहाली साइट के संदूषण को कम करने के लिए प्रयोग किया जाता है. वैकल्पिक रूप से, मछलीघर-ग्रेड बजरी की सिफारिश की जाती है। चूना पत्थर जैसे कैल्केरियस सब्सट्रेट से बचें, जिससे ऊतक विरंजन और प्रत्यारोपित केल्प्स32 की मृत्यु दर हो सकती है।

2. विकास मीडिया की तैयारी

  1. संसाधन उपलब्धता के आधार पर निम्नलिखित विधियों के अनुसार समुद्री जल को फ़िल्टर और स्टरलाइज़ करें। प्रत्येक सप्ताह संस्कृति कंटेनरों को ताज़ा करने के लिए आवश्यक फिल्टर-निष्फल समुद्री जल की मात्रा की गणना करें ( धारा 7 देखें) और तदनुसार इस निस्पंदन / नसबंदी कार्य को शेड्यूल करें। 8-10 डिग्री सेल्सियस पर 6 महीने तक अंधेरे कंटेनरों में फिल्टर-निष्फल समुद्री जल के बड़े बैचों को स्टोर करें। यदि प्रशीतन उपलब्ध नहीं है, तो एक अंधेरे, ठंडे क्षेत्र में स्टोर करें।
    1. 0.55-1 माइक्रोन के एक ताकना आकार के साथ एक वैक्यूम निस्पंदन प्रणाली का उपयोग कर फिल्टर पानी. फिल्टर को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए सभी पानी को खींचने से पहले वैक्यूम स्रोत को बंद कर दें, और फ़िल्टर किए गए पानी को एक समर्पित बाँझ कंटेनर में डालें। बड़ी मात्रा के लिए, प्रवाह-थ्रू निस्पंदन सिस्टम का उपयोग करें। उदाहरण के लिए, तीन pleated फिल्टर (10 माइक्रोन, 5 माइक्रोन, और 1 माइक्रोन) की एक श्रृंखला के माध्यम से समुद्री जल चलाने के लिए सबसे छोटे छिद्र आकार से व्यवस्थित.
      नोट: यदि प्राकृतिक समुद्री जल सुलभ नहीं है, तो कृत्रिम समुद्री जल तैयार किया जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, प्राकृतिक समुद्री जल को एक्वैरियम स्टोर से थोक में खरीदा जा सकता है और अक्सर फ़िल्टर्ड, सैनिटाइज़ और पीएच संतुलित किया जाता है। इन विकल्पों के लिए मीडिया संवर्धन अभी भी आवश्यक है।
    2. यूवी और/या ऑटोक्लेविंग विधियों का उपयोग करके फ़िल्टर्ड समुद्री जल को स्टरलाइज़ करें। निर्माता द्वारा अनुशंसित प्रवाह दर पर एक मछलीघर यूवी प्रकाश के लिए प्रवाह के माध्यम से सिस्टम कनेक्ट करें। आटोक्लेव-सुरक्षित कांच के बने पदार्थ में थोड़ा खुला ढक्कन के साथ या पन्नी के साथ कवर किया और एक तरल चक्र (121 डिग्री सेल्सियस; 1-2 पीएसआई, 15-30 मिनट तरल34 की मात्रा के आधार पर।
      नोट: संस्कृति के शुरुआती चरणों के लिए फ़िल्टर्ड समुद्री जल को ऑटोक्लेविंग की सिफारिश की जाती है।
  2. पोषक तत्वों और विटामिन के साथ फिल्टर-निष्फल समुद्री जल का संवर्धन एम. पाइरिफेरा विकास के लिए महत्वपूर्ण है। प्रोवासोली समृद्ध समुद्री जल मीडिया (पीईएस) एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला माध्यम है जिसे अल्गल संस्कृतियों35 के लिए डिज़ाइन किया गया है। इस मीडिया को अल्गल संस्कृति केंद्रों से खरीदें। एम पाइरिफेरा विकास के लिए पीईएस और अतिरिक्त विटामिन की तैयारी34 में वर्णित है।
    1. पीईएस के 20 एमएल के साथ फ़िल्टर किए गए समुद्री जल के हर 1 एल को समृद्ध करें। वैकल्पिक रूप से, औद्योगिक स्तर के संवर्धन मीडिया का उपयोग करें।
    2. निर्माता की सिफारिशों के अनुसार संवर्धन समाधान स्टोर करें। संवर्धन समाधानों के क्षरण से बचने के लिए विकास मीडिया की आवश्यकता होने पर फिल्टर-निष्फल समुद्री जल को समृद्ध करें।

3. क्षेत्र संग्रह

  1. स्थानीय एम. पाइरिफेरा आबादी के प्राकृतिक प्रजनन चक्र की नकल करने के लिए स्पोरोफिल संग्रह का समय निर्धारित करें। स्पोरोफिल संग्रह के लिए उचित समय सुनिश्चित करने के लिए स्थानीय विशेषज्ञों (जैसे, केल्प शोधकर्ताओं, प्रबंधकों, पारिस्थितिकीविदों, नागरिक वैज्ञानिकों, गोताखोर समूहों) से परामर्श करें।
  2. केल्प ऊतक संग्रह के लिए आवश्यक परमिट प्राप्त करें जो स्थानीय कानूनों और विनियमों को पूरा करते हैं। यह संवर्धन प्रक्रिया का एक समय लेने वाला हिस्सा हो सकता है और इसे परियोजना की समयसीमा में शामिल किया जाना चाहिए।
  3. स्व-निहित पानी के नीचे श्वास तंत्र (SCUBA) द्वारा 10-15 उपजाऊ एम. पाइरिफेरा व्यक्तियों से 3-5 स्पोरोफिल ब्लेड का चयन करने के लिए, दृश्यमान सोरी के साथ, कम से कम 2 मीटर की दूरी पर। स्वच्छ और अक्षुण्ण स्पोरोफिल का चयन करें, यदि संभव हो तो, बिना किसी दूषण या गिरावट के। इस बिंदु से मूल व्यक्ति के अनुसार स्पोरोफिल ब्लेड को अलग से स्टोर करें।
    नोट: स्पोरोफिल वयस्क केल्प के होल्डफास्ट के ऊपर, आधार पर घने "स्कर्ट" में बढ़ते हैं, और गैस से भरे न्यूमेटोसिस्ट की कमी से पहचाना जा सकता है1. परिपक्व सोरस ऊतक अक्सर आसपास के ऊतक1 की तुलना में थोड़ा उठाया और रंग में गहरा होता है।
  4. अंधेरे संग्रह बैग में परिवहन स्पोरोफिल ब्लेड सूरज की रोशनी के लिए overexposure से बचने के लिए, साइट से कम से कम समुद्री जल के साथ ब्लेड गीला रखने के लिए, और लगभग 12 डिग्री सेल्सियस पर कूलर में स्टोर संवर्धन अंतरिक्ष में आगमन तक. सुनिश्चित करें कि नमूने बर्फ के सीधे संपर्क में नहीं हैं।
    नोट: स्पोरोफिल को अन्य स्थानों से या वहां से भेजा जा सकता है।
    1. समुद्री जल के साथ स्पोरोफिल कुल्ला। लपेटें ब्लेड, एक एकल एम से एकत्र. pyrifera व्यक्ति, नम कागज तौलिये में समुद्री जल में भिगोया और फिर एल्यूमीनियम पन्नी में प्रकाश प्रवेश और अतिरिक्त desiccation से बचने के लिए36. भंडारण की इस विधि को आमतौर पर "बरिटो विधि" के रूप में जाना जाता है।
    2. इन पैकेजों को बर्फ के साथ कूलर में रखें, एक सुरक्षात्मक बाधा जैसे पुनर्नवीनीकरण बबल रैप या कार्डबोर्ड के साथ। रात भर शिपमेंट के लिए कूलर तैयार करें। सुनिश्चित करें कि कोई शिपमेंट प्राप्त करने के लिए उपलब्ध है और पैकेज को प्रशीतित स्थितियों में रखें।

4. स्पोरुलेशन

  1. यदि संभव हो तो, स्पोरोफिल को 10-15 डिग्री सेल्सियस के बीच तापमान नियंत्रित वातावरण में और किसी भी अन्य संस्कृतियों से दूर संसाधित करें। समय से पहले उपकरणों और स्टेशनों को तैयार और निष्फल करें। संदूषण को कम करने के लिए केल्प ऊतक को संभालते समय सुरक्षात्मक दस्ताने पहनें।
  2. वैकल्पिक रूप से प्रशीतित परिस्थितियों में 12-48 घंटे के लिए स्पोरोफिल स्टोर करें, सोरस ऊतक37 से बीजाणु रिलीज को प्रोत्साहित करना। स्टोर करने के लिए, धारा 3.3 में वर्णित "बरिटो विधि" का उपयोग करें।
  3. पके सोरस ऊतक का चयन करें और बाँझ कैंची का उपयोग करके इसे 25 सेमी2 वर्गों में काट लें। आनुवंशिक विविधता को बढ़ावा देने के लिए 10-15 व्यक्तिगत केल्प माता-पिता से 1-2 स्वच्छ सोरी वर्गों का चयन करें।
    नोट: यदि संग्रहीत किया जाता है, तो वैकल्पिक रूप से कागज़ के तौलिये पर आंशिक स्पोरुलेशन का सबूत मिलता है, जो उपजाऊ सोरस ऊतक की उपस्थिति का संकेत देता है। सोरस ऊतक अक्सर आसपास के ऊतकों की तुलना में थोड़ा उठा हुआ और गहरे रंग का होता है।
  4. साफ करने के लिए, धीरे से सोरस ऊतक के दोनों किनारों को एक दिशा में केवल फिल्टर-निष्फल समुद्री जल के साथ नम बाँझ धुंध के साथ साफ़ करें। यदि आवश्यक हो, पूरी तरह से दूषण को दूर करने के लिए एक बाँझ रेजर ब्लेड के साथ धीरे से सोरस ऊतक परिमार्जन. 30 एस से 1 मिनट के लिए मीठे पानी के स्नान में सोरी अनुभाग को डुबोएं और फिल्टर-निष्फल समुद्री जल से कुल्ला।
    नोट: मीठे पानी के स्नान को ताज़ा करें और क्रॉस-संदूषण को कम करने के लिए विभिन्न व्यक्तियों से अलग-अलग सोरी वर्गों को संभालते समय उपयोग में आने वाली सामग्री को निष्फल करें।
  5. एक बाँझ 50 एमएल अपकेंद्रित्र ट्यूब के भीतर 10-15 डिग्री सेल्सियस के लिए टेम्पर्ड फिल्टर-निष्फल समुद्री जल में प्रत्येक सोरी अनुभाग जलमग्न। अधिकतम 4 घंटे के लिए स्पोरुलेट करने के लिए अंधेरे में 4-12 डिग्री सेल्सियस पर ट्यूब रखें। यदि रेफ्रिजरेटर अनुपलब्ध है, तो इसे कम रोशनी, ठंडे क्षेत्र में स्टोर करें।
    नोट: वैकल्पिक रूप से, सोरी वर्गों को एक एकल, बाँझ कंटेनर में स्पोरुलेट किया जा सकता है।
  6. एक यौगिक माइक्रोस्कोप और हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके, 4 घंटे तक हर 30 मिनट में 3-4 नमूनों के बीजाणु घनत्व का निरीक्षण करें। नमूने के बीच विंदुक युक्तियाँ बदलें. यदि घनत्व कम से कम 10,000 बीजाणु mL-1 हैं ( खंड 5.1.1 देखें), तो अगले चरण पर जाएँ। यदि एक सोरी सेक्शन 4 घंटे के बाद कोई बीजाणु पैदा नहीं करता है, तो नमूना त्याग दें। बीजाणु रिलीज के बाद घंटों के भीतर बस सकते हैं लेकिन एक परिपत्र गति में तैरते हुए देखे जा सकते हैं।
  7. बाँझ चिमटी के साथ ट्यूबों से प्रत्येक सोरी अनुभाग निकालें. परिणामस्वरूप बीजाणु समाधान को एक एकल, निष्फल कंटेनर में मिलाएं और अंतिम संयुक्त घनत्व की मात्रा निर्धारित करें।

5. टीकाकरण

  1. टीकाकरण के लिए आवश्यक बीजाणु समाधान की अंतिम मात्रा की गणना करें। सुनिश्चित करें कि अंतिम एकाग्रता संस्कृति कंटेनरों में लगभग 500-1,000 बीजाणु एमएल-1 है।
    1. हेमोसाइटोमीटर के केंद्र ग्रिड की गिनती से संयुक्त बीजाणु नमूने की एकाग्रता की गणना करने के लिए, गिनती को 10-4 एमएल (हेमोसाइटोमीटर में देखे गए समाधान की मात्रा का प्रतिनिधित्व करते हुए) से विभाजित करें।
    2. प्रत्येक कंटेनर में जोड़ने के लिए बीजाणु समाधान की मात्रा निर्धारित करने के लिए, संस्कृति कंटेनरों के भीतर सब्सट्रेट जलमग्न करने के लिए आवश्यक विकास मीडिया की मात्रा निर्धारित करें।
    3. प्रत्येक कंटेनर में बीजाणुओं की कुल संख्या खोजने के लिए, इस समुद्री जल की मात्रा को वांछित एकाग्रता से गुणा करें।
    4. जोड़ा जा करने के लिए बीजाणु समाधान की कुल मात्रा निर्धारित करने के लिए, बीजाणु समाधान में प्रति एमएल बीजाणुओं की एकाग्रता से बीजाणुओं की कुल राशि विभाजित.
  2. केल्प विकास की निगरानी के लिए संस्कृति कंटेनरों के भीतर बाँझ ग्लास स्लाइड रखें। पर्याप्त निगरानी के लिए संस्कृति कंटेनरों में यादृच्छिक रूप से वितरित कम से कम 30 स्लाइड शामिल करें ( धारा 7 में विवरण देखें)।
  3. एक बाँझ विंदुक टिप है कि विकास मीडिया में जलमग्न substrates होता है का उपयोग संस्कृति कंटेनर में बीजाणु समाधान की गणना की मात्रा टीका लगाना. कंटेनर को बंद करें और बीजाणुओं को वितरित करने के लिए धीरे से हिलाएं। कंटेनर को संस्कृति प्रणाली में सील करें और रखें।

6. पालन की स्थिति

  1. तैनाती स्थल पर तापमान के आधार पर तापमान 10-15 डिग्री सेल्सियस के बीच सेट करें।
  2. 1 दिन के बाद, एक फ़िल्टर्ड वायु स्रोत के साथ प्रकाश वातन प्रदान करें।
  3. जलीय पौधों के लिए पूर्ण-स्पेक्ट्रम एलईडी रोशनी को 12 घंटे की रोशनी में सेट करें: 12 घंटे का अंधेरा चक्र, 0-180 माइक्रोन फोटॉन एम -2 एस -1 के बीच प्रकाश तीव्रता के साथ:
    1. 0-1 दिन से प्रकाश की तीव्रता को 5-10 माइक्रोन फोटॉन एम-2 एस-1 पर सेट करें और 1 सप्ताह के अंत तक 20 - 30 माइक्रोन फोटॉन एम-2 एस-1 तक बढ़ाएं।
    2. इस बिंदु से, 6 wk के अंत में 180 μmol फोटॉन m-2 s-1 के विकिरण तक पहुंचने तक हर 3-4 दिन में 10-20 μmol फोटॉन m-2 s-1 द्वारा विकिरण बढ़ाएं।
    3. 8 सप्ताह के अंत तक 180 माइक्रोन फोटॉन एम-2 एस-1 पर संस्कृतियों को पीछे करना जारी रखें, या जब स्पोरोफाइट्स लंबाई में लगभग 1-2 सेमी तक पहुंच गए हों।

7. निगरानी

  1. विकास का आकलन करने के लिए पहले दो हफ्तों के लिए दैनिक/हर दूसरे दिन कम से कम दो यादृच्छिक ग्लास स्लाइड की निगरानी करें।
    1. निगरानी करने के लिए, निष्फल चिमटी के साथ स्लाइड को संभालने और यह एक साफ पेट्री डिश में जगह पर्याप्त निष्फल समुद्री जल युक्त कांच स्लाइड जलमग्न करने के लिए. क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए हटाए जाने के बाद संस्कृतियों में ग्लास स्लाइड वापस न करें।
    2. प्रारंभिक चरण केल्प का निरीक्षण करने के लिए 40-400x आवर्धन पर एक यौगिक या उल्टे माइक्रोस्कोप का उपयोग करें। निम्नलिखित समयरेखा के साथ विकास को ट्रैक करें (विकासात्मक जीवन इतिहास चरणों के उदाहरणों के लिए चित्र 3 देखें)।
      नोट: बसे हुए बीजाणु 0-1 डी पर देखे जाते हैं। बीजाणु कुछ घंटों के भीतर अंकुरित हो सकते हैं, जैसा कि एक रोगाणु ट्यूब के गठन से प्रदर्शित होता है। अंकुरण आमतौर पर 1-2 डी पर मनाया जाता है। प्रारंभिक गैमेटोफाइट्स आमतौर पर 1-4 डी पर देखे जाते हैं। युग्मकजनन, वह प्रक्रिया जिसके द्वारा कोशिकाएं नर और मादा युग्मक बनाने के लिए विभाजन और भेदभाव से गुजरती हैं, आमतौर पर पहले दो हफ्तों के भीतर देखी जाती है। महिला कोशिकाएं पुरुषों की तुलना में 5-7 गुना बड़ी होती हैं। नर गैमेटोफाइट्स पतली, फिलामेंटस शाखाएं बढ़ती हैं, जबकि मादाएं आकार में अधिक गोल या अंडाकार होती हैं। मादाएं आमतौर पर 2-3 सप्ताह के भीतर अंडे या ओवा का उत्पादन करती हैं। पुरुषों से जारी शुक्राणु मादाओं तक तैरते हैं और अंडों को निषेचित करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप द्विगुणित युग्मज का निर्माण होता है। सही टीकाकरण घनत्व होने निकटता38,39 द्वारा सफल प्रजनन सुनिश्चित करेगा. निषेचित अंडे भ्रूण स्पोरोफाइट्स में विकसित होते हैं। स्पोरोफाइट्स आमतौर पर 2-4 सप्ताह के भीतर देखे जाते हैं। युग्मनज तेजी से कोशिका विभाजन से गुजरता है, जिसके परिणामस्वरूप लगभग 6-8 सप्ताह के भीतर 1-2 सेमी ब्लेड की वृद्धि होती है।
  2. दो सप्ताह के बाद, स्वस्थ विकास और संदूषण के लिए सप्ताह में कम से कम दो यादृच्छिक ग्लास स्लाइड की निगरानी करें जब तक कि स्पोरोफाइट्स आकार में 1-2 सेमी तक न पहुंच जाएं।
    नोट: स्वस्थ विकास सुनहरे-भूरे रंग (हरे या पारदर्शी के विपरीत) रंग की विशेषता है। वहाँ कई मात्रात्मक मैट्रिक्स है कि एक उल्टे खुर्दबीन के साथ कांच स्लाइड पर मनाया जा सकता है, उत्तरजीविता, अंकुरण दर, वनस्पति विकास, प्रजनन परिपक्वता और उर्वरता, और लिंग अनुपात40 सहित कर रहे हैं.
  3. एक माइक्रोस्कोप के साथ बैक्टीरिया, कवक, सिलिअट्स और डायटम द्वारा संदूषण का आकलन करें। पृथक संदूषण को हटा दें। जर्मेनियम डाइऑक्साइड (जीईओ2) ( धारा 8.3 देखें) उपचार के साथ डायटम संदूषण के शुरुआती संकेतों को नियंत्रित करें।

8. रखरखाव

  1. धारा 6.3 के अनुसार प्रकाश की स्थिति को समायोजित करें।
  2. हर हफ्ते, एम. पाइरिफेरा विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्वों और खनिजों को फिर से भरने के लिए विकास मीडिया बदलें।
    1. उचित तापमान पर ताजा विकास मीडिया को ठंडा करें। सुनिश्चित करें कि इस प्रक्रिया के दौरान तापमान 15 डिग्री सेल्सियस से अधिक न हो।
    2. बीज वाले सब्सट्रेट को परेशान करने से बचने के लिए संवर्धन कंटेनरों से साइफन मीडिया। कंटेनर लगभग खाली होने तक मीडिया को बहने दें। desiccation को कम करने के लिए तुरंत मीडिया को ताज़ा करें। विकास कंटेनरों को फिर से भरते समय, उन्हें थोड़ा झुकाएं ताकि मीडिया सब्सट्रेट को कम से कम परेशान करने के लिए संवर्धन कंटेनर के किनारे नीचे चला जाए।
    3. प्रकाश विकिरण में अंतर के लिए खाते में साप्ताहिक मीडिया परिवर्तन के दौरान बेतरतीब ढंग से कंटेनर या टब की स्थिति को पुनर्व्यवस्थित करें।
      नोट: गतिविधियों और Macrocystis संस्कृतियों के लिए अपेक्षाओं को ट्रैक करने के लिए एक कैलेंडर के लिए पूरक फ़ाइल 1 देखें। यह प्रकाश और वातन के समायोजन के समय के साथ-साथ साप्ताहिक मीडिया परिवर्तनों को इंगित करता है।
  3. वैकल्पिक रूप से, जर्मेनियम डाइऑक्साइड (जीईओ2) के उपचार के साथ डायटम संदूषण को नियंत्रित करें। व्यापक डायटम संदूषण को कम करने के लिए बीज वाले सब्सट्रेट में जोड़े गए समुद्री जल के प्रत्येक 1 एल में 250 मिलीग्राम/एमएल जीईओ2 के 0.3-0.5 एमएल जोड़ें।
    नोट: जीईओ2 अल्गल युग्मक उत्पादन को रोक सकता है। अंकुरण के बाद और अंडे और शुक्राणु उत्पादन (1-7 डी) की चोटियों से पहले और / या अंडे निषेचन और स्पोरोफाइट टिप्पणियों (>21 डी) के बाद छोटी खिड़की में जीईओ2 का उपचार लागू करें, इसके बाद रासायनिक को हटाने के लिए 48 घंटे बाद मीडिया परिवर्तन होता है। ये समयसीमा संस्कृति की स्थिति को देखते हुए भिन्न हो सकती है, इसलिए माइक्रोस्कोपी के साथ जीवन स्तर के विकास की निगरानी करना जीईओ2 आवेदन के समय का आकलन करने का सबसे अच्छा तरीका है। यदि डायटम संदूषण संस्कृति कंटेनरों में बनी रहती है और प्रारंभिक चरण केल्प्स पर अतिवृद्धि देखी जाती है, तो सब्सट्रेट को फिर से बोने पर विचार करें।

9. विशालकाय केल्प वनस्पति गैमेटोफाइट संवर्धन

  1. प्राकृतिक चट्टान से मौसमी स्पोरोफिल संग्रह पर निर्भरता को कम करने के लिए साल भर वनस्पति परिस्थितियों में गैमेटोफाइट संस्कृतियों का प्रचार करें।
    1. 12 प्रकाश में 5-20 माइक्रोन फोटॉन एम -2 एस -1 की तीव्रता पर लाल बत्ती में 4-12 डिग्री सेल्सियस पर विकास मीडिया से भरे फ्लास्क में स्रोत आबादी के अनुसार गैमेटोफाइट संस्कृतियों को स्टोर करें: 12 अंधेरे चक्र।
    2. निरंतर वातन प्रदान करें और हर 2-6 महीने में मीडिया बदलें।
  2. गैमेटोफाइट्स के थोक-अप बायोमास के लिए जो 'हरी बजरी' बीजारोपण में उपयोग के लिए अलैंगिक रूप से बढ़ रहे हैं, गैमेटोफाइट्स को निलंबित करने के लिए वातन बढ़ाएं, मीडिया परिवर्तनों की आवृत्ति को साप्ताहिक में बढ़ाएं, और हर दो सप्ताह में गैमेटोफाइट्स को टुकड़ा करें।
    1. संस्कृति फ्लास्क में गैमेटोफाइट बायोमास को हिलाकर या हिलाकर निलंबित करें और यदि आवश्यक हो तो संलग्न गैमेटोफाइट्स को हटाने के लिए एक बाँझ उपकरण के साथ संस्कृति फ्लास्क के किनारों को परिमार्जन करें।
    2. निलंबित गैमेटोफाइट्स को एक बाँझ ब्लेंडर या कॉफी ग्राइंडर में डालें और बायोमास एकाग्रता के आधार पर लगभग 5-15 बार 1-2 एस के लिए गैमेटोफाइट समाधान को पल्स करें, जब तक कि कोई गुच्छेदार द्रव्यमान दिखाई न दे।
  3. 'हरी बजरी' बीजारोपण के लिए प्रजनन को प्रेरित करने के लिए, जैसा कि ऊपर बताया गया है, टुकड़ा गैमेटोफाइट्स। फिर, सब्सट्रेट को टीका लगाना और पूर्ण-स्पेक्ट्रम एलईडी लाइट को 5-20 से 45-60 माइक्रोन फोटॉन एम -2 एस -1 (+10 माइक्रोमोल फोटॉन एम -2 एस -1 दैनिक फोटो-अनुकूलन के लिए) बढ़ाएं, फिर 180 माइक्रोन फोटॉन एम -2 एस -1 के विकिरण तक पहुंचने तक 10-20 माइक्रोन फोटॉन एम -2 एस -1 हर 3-4 डी तक बढ़ाएं।

10. तैनाती

  1. प्रयोगशाला संवर्धन के 6-8 सप्ताह के बाद, सुनिश्चित करें कि किशोर स्पोरोफाइट्स 1-2 सेमी लंबे हैं और तैनाती के लिए तैयार हैं (चित्र 4)। तैनाती से पहले 24 घंटे संस्कृति कंटेनरों में विकास मीडिया को ताज़ा करें।
  2. बजरी तैनाती के लिए आवश्यक परमिट प्राप्त करें जो स्थानीय कानूनों और विनियमों को पूरा करते हैं। यह संवर्धन प्रक्रिया का एक समय लेने वाला हिस्सा हो सकता है और इसे परियोजना की समयसीमा में शामिल किया जाना चाहिए।
  3. केल्प को हाइड्रेटेड रखने के लिए समुद्री जल में भिगोए गए तौलिये से ढकी ट्रे में 'हरी बजरी' का परिवहन करें। ट्रे को बर्फ से इंसुलेटेड कूलर में रखें, यह सुनिश्चित करते हुए कि वे बर्फ के सीधे संपर्क में नहीं हैं। सुनिश्चित करें कि परिवहन के दौरान सब्सट्रेट और स्पोरोफाइट टुकड़ी के लुढ़कने से बचने के लिए 'हरी बजरी' को कसकर पैक किया गया है।
    नोट: अंतरिक्ष उपलब्धता के आधार पर, हैंडलिंग को कम करने के लिए सब्सट्रेट को उनके संस्कृति कंटेनरों या टब में भी ले जाया जा सकता है।
  4. एक छायांकित कूलर में 6 घंटे तक 'हरी बजरी' का परिवहन करें। सबसे सीधी धूप से बचने के लिए तैनाती का समय होना चाहिए। यदि नाव से तैनात किया जा रहा है, तो तैनाती प्रक्रिया के दौरान सीधे धूप से बचने के लिए एक छायांकित संरचना का उपयोग करें।
  5. नई साइटों पर और छोटे पैमाने पर परीक्षण करते समय नीचे की चट्टान पर या SCUBA के माध्यम से सतह से 'हरी बजरी' को सावधानी से बिखेरें।

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Representative Results

'हरी बजरी' बहाली तकनीक पायलटिंग चरण में अभी भी है, अन्य प्रजातियों28 के लिए सीमित संयंत्र अस्तित्व डेटा के साथ, और Macrocystis pyrifera के लिए अभी तक कोई प्रकाशित डेटा. इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित क्षेत्र संग्रह और प्रयोगशाला रखरखाव का उपयोग करते हुए, हमने काल्पनिक 'हरी बजरी' परिनियोजन(चित्रा 5)से पहले दो अलग-अलग दाता केल्प आबादी के लिए साइट-विशिष्ट पालन स्थितियों के महत्व का परीक्षण किया। प्रजनन केल्प ऊतक कैलिफोर्निया (यूएसए) में कूलर K1 (सांता क्रूज़ 36.60167 ° N, 121.88508 ° W) और गर्म K4 (सैन डिएगो, 32.85036 ° N, -117.27600 ° W) आबादी से एकत्र किया गया था और दो तापमानों पर पाला गया था: (1) 12 डिग्री सेल्सियस (समुद्री शैवाल जलीय कृषि के लिए मानक संवर्धन तापमान, और K1 के लिए औसत शीतकालीन एसएसटी), और (2) 20 डिग्री सेल्सियस (K4 के लिए औसत ग्रीष्मकालीन एसएसटी, और K1 के लिए 4 °C हीटवेव)। केल्प जीवन चरण के विकास की निगरानी के लिए उपयोग की जाने वाली सभी ग्लास स्लाइड को एक मानकीकृत ग्रिड के साथ चिह्नित किया गया था, और उच्च-रिज़ॉल्यूशन छवियों को इस ग्रिड का उपयोग करके एक उल्टे माइक्रोस्कोप और कैमरा (एन = 5 छवियों प्रति नमूना, 2.479 मिमी x 1.859 मिमी) का उपयोग करके समय के माध्यम से निश्चित क्षेत्रों के अवलोकन को सक्षम करने के लिए एक संदर्भ के रूप में कैप्चर किया गया था।

24 डी पोस्ट स्पोरुलेशन के बाद, गैमेटोफाइट्स को माइक्रोस्कोप छवियों (एन = 60 नमूनों से 300 छवियों) से गिना गया था। गैमेटोफाइट काउंट में अंतर के लिए परीक्षण करने के लिए, सामान्यीकृत रैखिक मिश्रित प्रभाव मॉडल को पैकेज glmmTMB41 में फ़ंक्शन glmmTMB() का उपयोग करके पॉइसन वितरण के साथ नियोजित किया गया था, और जोड़ीदार तुलना पैकेज emmeans42से emtrends() के साथ R में आयोजित की गई थी। हमारे परिणाम बताते हैं कि थर्मल परिवर्तनशीलता के लिए गैमेटोफाइट्स की प्रतिक्रिया K1 और K4 आबादी (t = 2.7, p = 0.007) के बीच भिन्न थी, जहां तापमान का गर्म K4 आबादी के लिए कोई प्रभाव नहीं था (अनुमान = -0.01, मानक त्रुटि [SE] = 0.01, विश्वास अंतराल [CI] = [-0.03, 0.01]), लेकिन कूलर K1 आबादी के लिए प्रभाव पड़ा (अनुमान = -0.06, एसई = 0.02, सीआई = [-0.10, -0.03]) (चित्रा 6 ए), थर्मल सहिष्णुता लक्षणों में एक संभावित अनुकूली विचलन का सुझाव देता है। केल्प गैमेटोफाइट्स को अक्सर प्रतिरोध चरण43 के रूप में चित्रित किया जाता है, जिसका अर्थ है कि वे एक सर्व-उद्देश्यीय फेनोटाइप उत्पन्न करते हैं जो तनाव सहिष्णु और पर्यावरणीय परिवर्तनशीलता के लिए अपेक्षाकृत असंवेदनशील है। हालांकि, इन परिणामों से संकेत मिलता है कि थर्मल परिवर्तनशीलता इस प्रारंभिक चरण में एक महत्वपूर्ण दबाव लगाती है।

32 डी पोस्ट स्पोरुलेशन के बाद, लगभग 1 मिमी से अधिक लंबाई वाले दृश्यमान स्पोरोफाइट्स को प्रत्येक 2.5 सेमी की संपूर्णता पर 7.5 सेमी ग्लास स्लाइड (एन = 72 कुल नमूने) द्वारा गिना गया था। दृश्यमान स्पोरोफाइट काउंट में अंतर के लिए परीक्षण करने के लिए, सामान्यीकृत रैखिक मिश्रित प्रभाव मॉडल को पैकेज glmmTMB में फ़ंक्शन glmmTMB() का उपयोग करके पॉइसन वितरण के साथ नियोजित किया गया था और जोड़ीदार तुलना R में पैकेज emmeans से emtrends() के साथ आयोजित की गई थी। हमारे परिणाम बताते हैं कि थर्मल परिवर्तनशीलता के लिए स्पोरोफाइट्स की प्रतिक्रिया K1 और K4 विभेदित आबादी (z = 0.92, p = 0.36) के बीच समान है, जहां तापमान का गर्म K4 आबादी (अनुमान = -0.66, SE = 0.04, CI = [-0.74, - 0.57]) के साथ-साथ कूलर K1 जनसंख्या (अनुमान = -0.85, SE = 0.13, CI = [-1.10, -0.60]) (चित्र 6B). 20 डिग्री सेल्सियस पर पाले गए नमूनों में 12 डिग्री सेल्सियस (एसई = 82.4 ± 9.8 माध्यम) पर पाले गए लोगों की तुलना में कुछ दृश्यमान स्पोरोफाइट्स (एसई = 0.4 = 0.4 ± 0.2 माध्यम) ±± वृद्धि हुई। इस परिणाम से पता चलता है कि स्पोरोफाइट उत्पादन गैमेटोफाइट चरण की तुलना में तापमान के प्रति अधिक संवेदनशील है, और प्रोटोकॉल में उल्लिखित स्पोरोफाइट विकास को प्राप्त करने के लिए साइट-विशिष्ट संवर्धन तापमान 15 डिग्री सेल्सियस से अधिक नहीं होना चाहिए।

Figure 1
चित्रा 1: 'हरी बजरी' इनक्यूबेटर प्रणाली का आरेख। (ए) वानस्पतिक रूप से गैमेटोफाइट संस्कृतियों को थोक करने के लिए लाल प्रकाश स्रोत। (बी) बिजली के तारों और टयूबिंग के लिए एक्सेस पोर्ट, एक बाहरी आउटलेट के लिए अग्रणी। (सी) लाल-बत्ती अनुभाग से पूर्ण-स्पेक्ट्रम प्रकाश को अवरुद्ध करने के लिए संरचना। (डी) एक 'हरी बजरी' संवर्धन खंड। (ई) पूर्ण स्पेक्ट्रम प्रकाश स्रोत। (एफ) ट्यूबिंग लाइनें बाहरी फ़िल्टर्ड वायु स्रोत से जुड़ी हैं। (जी) वायुजनित संदूषण को कम करने के लिए वाल्वों की जाँच करें। (एच) व्यक्तिगत संस्कृति कंटेनर जो संदूषण को कम करते हैं। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: 'हरी बजरी' जल स्नान प्रणाली का आरेख। (ए) जलमग्न पंप के साथ चिलर ( I में)। (बी) पानी के स्नान के लिए 20 गैलन टब। (सी) पानी के स्नान को पुन: प्रसारित करने के लिए नाली। (डी) पानी के स्नान के पुनरावर्तन के लिए वाल्व। (ई) प्रकाश स्रोत। (च) पारदर्शी ढक्कन और वातन खोलने के साथ 2.5 एल 'हरी बजरी' कंटेनर। (छ) वातन स्रोत। (एच) पाइप जो जलमग्न पंपों के उपयोग से पानी को पुन: प्रसारित करते हैं। (I) सबमसबल पम्पों वाले टब से/से चिलर तक/से वाटर बाथ रिसीवर। (जे) पानी के स्नान वाष्पीकरण को कम करने के लिए ऐक्रेलिक कवर। (के) प्रकाश की तीव्रता को समायोजित करने के लिए मेष छाया। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्रा 3: मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा विकास। "प्रयोगशाला विकास परीक्षणों से मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा के विकासात्मक जीवन इतिहास चरण"। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा के साथ वरीयता प्राप्त 'हरी बजरी'। मैक्रोकिस्टिस पाइरिफेरा के साथ बोई गई हरी बजरी को प्रयोगशाला में तब तक सुसंस्कृत किया जाता है जब तक कि स्पोरोफाइट्स 1-2 सेमी तक नहीं पहुंच जाते। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्रा 5: प्रायोगिक समय श्रृंखला। कैलिफोर्निया (यूएसए) में एकत्र की गई दो आबादी से उत्पन्न मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा गैमेटोफाइट्स और स्पोरोफाइट्स के प्रयोगात्मक विकास और विकास के बाद एक समय श्रृंखला से उदाहरण छवियां और दो अलग-अलग तापमानों पर सुसंस्कृत। K1 = सांता क्रूज़, K4 = सैन डिएगो। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्रा 6: प्रतिनिधि परिणाम। मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा जीवन चरणों के लिए मनाया गया K1 सांता क्रूज़ सैन डिएगो K4 सांता क्रूज़ मूल की आबादी 12 और 20 डिग्री सेल्सियस की निरंतर थर्मल स्थितियों में सुसंस्कृत है। त्रुटि पट्टियाँ, माध्य ± 1 SE. तारांकन चिह्न (*) सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर को दर्शाता है (p < 0.05)। (ए) 24 दिन में गैमेटोफाइट्स (एन = 60 नमूनों से कुल 300 छवियां)। (बी) दिन 32 पर दृश्यमान स्पोरोफाइट्स (एन = 72 नमूने, 7.5 सेमी क्षेत्र द्वारा मानकीकृत 2.5 सेमी के भीतर)। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

पूरक फ़ाइल 1. कृपया इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

मानवजनित जलवायु परिवर्तन दुनिया के महासागरों 44,45,46,47,48 के स्वास्थ्य के लिए एक बढ़ता हुआ खतरा है, जिसके परिणामस्वरूप बड़ी गड़बड़ी और जैव विविधताका नुकसान 49,50,51,52 है। अवक्रमित पारिस्थितिक तंत्र की बहाली में तेजी लाने के लिए, संयुक्त राष्ट्र ने 2021 से 2030 तक "पारिस्थितिकी तंत्र बहाली पर संयुक्त राष्ट्र दशक" घोषित किया है, जो "सतत विकास के लिए महासागर विज्ञान के संयुक्त राष्ट्र दशक" के साथ मेल खाता है, जिसका उद्देश्य समुद्र के स्वास्थ्यमें गिरावट को उलटना है। कार्रवाई के लिए इस वैश्विक कॉल के अनुरूप, केल्प वन एलायंस ने वर्ष 204054 तक 1 मिलियन हेक्टेयर को बहाल करने और 3 मिलियन हेक्टेयर केल्प वन की रक्षा करने के लिए केल्प वन चैलेंज शुरू किया है। समुद्री बहाली55 से कम है, और केल्प पारिस्थितिक तंत्र को प्रवाल भित्तियों, मैंग्रोव जंगलों और समुद्रीघास के मैदानों जैसे आवासों की तुलना में काफी कम ध्यान मिलता है। अपमानित पारिस्थितिक तंत्र की बहाली को समुद्री पारिस्थितिक तंत्र के पुनर्निर्माण में प्रभावी दिखाया गया है, लेकिन औसतन $ 80,000 - $ 1,600,000 प्रति हेक्टेयर के बीच खर्च हो सकता है, औसत कुल लागत दो से चारगुना अधिक होने की संभावना है। वर्तमान और अनुमानित नुकसान तत्काल संरक्षण हस्तक्षेप के रूप में स्केलेबल, व्यवहार्य और लागत प्रभावी केल्प बहाली पद्धतियों को विकसित करने पर कॉल करते हैं।

वर्तमान केल्प बहाली के प्रयास केल्प हानि के साइट-विशिष्ट ड्राइवरों को संबोधित करने के लिए पद्धतियों के संयोजन का उपयोग करते हैं, जिसमें वयस्क केल्प्स का प्रत्यारोपण, ज़ोस्पोर्स और / या गैमेटोफाइट्स का प्रत्यक्ष बीजारोपण, चराई नियंत्रण और कृत्रिम भित्तियों की स्थापनाशामिल है। हालाँकि, इन विधियों के लिए पर्याप्त संसाधनों की आवश्यकता होती है और इनकी मापनीयता सीमित होती है। वयस्क केल्प्स के विशिष्ट प्रत्यारोपण के लिए गोताखोरों द्वारा बेंथोस पर कृत्रिम सामग्री या संरचनाओं की श्रमसाध्य तैनाती की आवश्यकता होती है। तटीय चट्टानी भित्तियों को फिर से स्थापित करने के लिए नीचे-ऊपर हस्तक्षेप, जैसे प्रतियोगियों और चराई को नियंत्रित करना, श्रम लागत से भी प्रतिबंधित हैं क्योंकि वे इन जैविक तनावों के मैनुअल पानी के नीचे हटाने या बहिष्करण पर भरोसा करते हैं11. 'हरी बजरी' तकनीक सतह से सरल तैनाती के साथ इन सीमाओं पर काबू पाने, कोई पानी के नीचे किस्त या तकनीकी ज्ञान और अपेक्षाकृत कम लागत28 पर scalability की आवश्यकता है. यह अभिनव दृष्टिकोण एक आशाजनक बहाली उपकरण प्रदान करता है, जो अपनी पूरी क्षमता32 को अनलॉक करने के लिए विभिन्न स्थानों और वातावरणों में व्यापक परीक्षणों का आग्रह करता है।

जबकि 'हरी बजरी' के साथ सफल बहाली के प्रयासों को नॉर्वे में चीनी केल्प, सैकरीना लैटिसिमा26 का उपयोग करके आश्रय वाले fjords में प्रलेखित किया गया है, यह तकनीक अभी भी पूर्वी प्रशांत क्षेत्र में मैक्रोसिस्टिस पाइरिफेरा के लिए पायलटिंग चरण में है। इसकी सीमा के भीतर एम. पाइरिफेरा आउटप्लांट्स की अपेक्षित उत्तरजीविता को संबोधित करने के लिए अतिरिक्त परीक्षणों की आवश्यकता है। एम. पाइरिफेरा वृद्धि की विशिष्ट तरंग-उजागर स्थितियों में, छोटी बजरी में गति और घर्षण की संभावना अधिक हो सकती है, जिससे क्षतिग्रस्त बहिर्रोपण हो सकता है। इसके अलावा, एम. पाइरिफेरा के गैस से भरे न्यूमेटोसिस्ट द्वारा प्रदान की गई सकारात्मक उछाल से 'हरी बजरी' के बहिर्वाह को बहाली स्थल से प्रभावी ढंग से दूर ले जाया जा सकता है, और इस प्रकार, बजरी का आकार और वजन इस प्रजाति का पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण कारक हैं। हाल के एक पायलट अध्ययन में (मई 2022; एन्सेनाडा, बाजा कैलिफोर्निया, मैक्सिको), एम पाइरिफेरा के साथ क्षेत्र में प्रारंभिक सफलता देखी गई है, जो आसपास के सब्सट्रेट के लिए हैप्टेरा लगाव और क्षेत्र में दो महीने के बाद लंबाई में 1.2 मीटर तक पहुंचने वाले किशोरों के विकास से संकेत मिलता है (चित्र 4)। यह एक स्पष्ट अवसर को प्रदर्शित करता है जिसे पूर्वी प्रशांत में एम. पाइरिफेरा के लिए 'हरी बजरी' का उपयोग करने में अभी तक खोजा जाना बाकी है। यह वीडियो एम. पाइरिफेरा के साथ 'हरी बजरी' तकनीक दिखाता है और यह एक मूल्यवान संसाधन है जो विभिन्न क्षेत्र सेटिंग्स में सफलताओं और सीमाओं को संबोधित करने वाले अध्ययनों का समर्थन करने के लिए बहाली के संवर्धन चरण में मौजूदा प्रथाओं को सरल और केंद्रीकृत करता है।

'हरी बजरी' तकनीक के साथ, कई छोटी, व्यक्तिगत बजरी इकाइयों को एक पैमाने पर बोया जा सकता है जो वयस्क पौधों के साथ अधिक सामान्य प्रत्यारोपण दृष्टिकोण की तुलना में सफलता की संभावना को बढ़ा सकता है। हालांकि, इस तकनीक का प्रमुख स्केलेबल पहलू सतह से इसकी सरल तैनाती है, जो नाव द्वारा बड़े क्षेत्रों की बहाली की सुविधा प्रदान कर सकता है। क्षेत्र सेटिंग्स के लिए जहां छोटे बजरी की तैनाती उपयुक्त नहीं है, इस प्रोटोकॉल को प्रत्यारोपण के लिए अनुकूलित किया जा सकता है एम. पाइरिफेरा सब्सट्रेट की एक विस्तृत श्रृंखला पर, जिसमें बड़ी बजरी या यहां तक कि छोटे बोल्डर, स्ट्रिंग जिसे प्राकृतिक या तैनात पानी के नीचे के एंकर से बांधा जा सकता है, या टाइलें जिन्हें बोल्ट किया जा सकता है या अधिक उजागर परिस्थितियों में समुद्री डाकू के लिए समुद्री एपॉक्सी का उपयोग करके चिपकाया जा सकता है। ये तैनाती अनुकूलन एम. पाइरिफेरा संवर्धन के लिए आवश्यक सुविधाओं को नहीं बदलेंगे, लेकिन बाद में तैनाती की लागत में वृद्धि करेंगे।

मानवजनित गड़बड़ी और जलवायु परिवर्तन वर्तमान में प्राकृतिक आबादी के अनुकूलन की क्षमता पर काबू पा रहे हैं। यह पारंपरिक संरक्षण प्रयासों के लिए महत्वपूर्ण चुनौतियां पेश करता है जो पारिस्थितिक तंत्र को उनके ऐतिहासिक राज्यों 58,59,60,61,62,63 में बहाल करते हैं। इस प्रकार, संरक्षण ढांचे लचीलापन और अनुकूली क्षमता64 पर विचार अग्रिम प्रबंधन को शामिल करने के लिए विस्तार किया है. जलवायु परिवर्तन को संबोधित करने के लिए अग्रिम प्रबंधन वन पारिस्थितिकी प्रणालियों में पेड़ प्रजातियों के लिए लागू किया जा रहा है65 और आगे बहाली के प्रयासों के लिए प्रस्तावित किया गया है66,67 outplants की विकासवादी क्षमता को बढ़ाने के लिए. हालांकि इन रणनीतियों स्वाभाविक स्थलीय वातावरण में हेरफेर करने के लिए आसान कर रहे हैं, कई अध्ययन समुद्री वातावरण 62,68,69,70 में उनके आवेदन का पता लगाने के लिए शुरू कर रहे हैं. उदाहरण के लिए, प्रवाल भित्तियों कई मानवजनित तनाव है कि अभूतपूर्व गिरावट71,72 में हुई है द्वारा धमकी दी है. इन महत्वपूर्ण नींव प्रजातियों के नुकसान के जवाब में, सक्रिय बहाली और सहायता प्राप्त अनुकूलन तकनीकों तेजी से शेष प्रवाल भित्तियों और उनके संबद्ध कार्यों 62,73,74 के संरक्षण के लिए वकालत कर रहे हैं. एक तकनीक में गर्मी तनाव75 के प्रति सहनशीलता बढ़ाने के लिए अपनी वर्तमान प्रजाति वितरण सीमा के भीतर व्यक्तियों को स्थानांतरित करना शामिल है। चंदवा बनाने kelps की बहाली के बारे में, 'हरी बजरी' इस तरह के कमजोर क्षेत्रों के लिए लचीला जीनोटाइप के स्थानांतरण, संकरण के रूप में गैर आनुवंशिक हेरफेर, या बहाली कार्यक्रमों76,77 के लिए अधिक प्रतिरोधी उपभेदों प्राप्त करने की दिशा में उद्देश्य से परिणामों के साथ पर्यावरणीय तनाव62 के रूप में सहायता प्राप्त अनुकूलन तकनीकों का पता लगाने के लिए एक अनुकूलन ढांचे है.

केल्प पारिस्थितिकी तंत्र संरक्षण की सफलता को बनाए रखने के लिए बहाली के प्रयासों को बढ़ाने के लिए स्थानीय समर्थन का उपयोग करना महत्वपूर्ण है। स्थानीय हितधारकों को शामिल करने से बहाली की जरूरतोंके लिए स्थानीय खरीद-इन 6,50 बढ़ सकती है और तटीय नेतृत्व को बढ़ावा मिल सकता है जिसके परिणामस्वरूप बाद में केल्प पारिस्थितिकी तंत्र संरक्षण की फंडिंग और दीर्घायु में वृद्धि हो सकती है। अन्य सभी केल्प बहाली पद्धतियों के साथ, विविध पारिस्थितिक, सामाजिक-आर्थिक और संरक्षण उद्देश्यों को एकीकृत करने वाले संरचित निर्णय लेने वाले ढांचे केल्प पारिस्थितिक तंत्र और उन समुदायों के लिए इष्टतम परिणाम प्राप्त करने में मदद करेंगे जो वे11 का समर्थन करते हैं।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

इस काम को कैलिफोर्निया सागर ग्रांट केल्प रिकवरी रिसर्च प्रोग्राम आर / एचसीई -17 द्वारा जेबीएल और एमईएसबी को वित्त पोषित किया गया था, एक राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन रिसर्च ट्रेनीशिप अवार्ड डीजीई -1735040 पीडीडी, द नेचर कंजर्वेंसी, श्मिट मरीन टेक्नोलॉजी पार्टनर्स, सस्टेनेबल ओशन एलायंस, टिंकर फाउंडेशन से एपी-एल, और द क्लाइमेट साइंस एलायंस बाजा वर्किंग ग्रुप आरबीएल और जेएल के लिए। हम कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, इरविन में स्टीवन एलीसन, कैस्केड सॉर्टे, सामंथा कनिंघम, सैम वेबर और कैटलिन यी को धन्यवाद देते हैं; मार्क कैर, पीटर रायमोंडी, सारा एमिन्हाइज़र , कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, सांता क्रूज़ में ऐनी कपुसिंस्की; द नेचर कंजरवेंसी में वाल्टर हेडी और नोरा एडी; विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय, मिल्वौकी में फिलिप अल्बर्टो और गेब्रियल मोंटेसिनोस; जोस एंटोनियो ज़र्टुचे-गोंजालेज, अलेजांद्रा फरेरा-एरिएटा, और लिलियाना फेरेरा-एरिएटा यूनिवर्सिडैड ऑटोनोमा डी बाजा कैलिफोर्निया में; लुइस मालपिका-क्रूज़, एलिसिया अबाडिया-कार्डसो, और मेक्सकैल से डैनियल डिआज़-गुज़मैन; MexCalitos गोताखोर अलेजांद्रा रेयेस, मोनिका पेराल्टा, टेरेसा तवेरा, जूलिया नवरेटे, ऐनोआ विलाल्टा, जेरेमी बाउर और अल्फोंसो फरेरा; और तकनीकी सलाह के लिए नैन्सी कारुसो। हम जल स्नान प्रणाली को विकसित करने के लिए उपयोग की जाने वाली सुविधाएं प्रदान करने के लिए Instituto de Investigaciones Oceanológicas, Universidad Autónoma de Baja California को धन्यवाद देते हैं। हम पानी के नीचे और ड्रोन वीडियो सामग्री के लिए इरा स्पिट्जर को धन्यवाद देते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.22 µm filters Milipore SCGPS05RE Natural seawater sterilization
1 L glass bottles Amazon B07J6JP4D1 Natural seawater sterilization
1 µm filters (water + air) Amazon B01M1VWUWL Natural seawater sterilization
1'' PVC 90-Degree Elbow Home Depot 203812125 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
10 µm filters Amazon B00D04BG56 Natural seawater sterilization
20 µm filters Amazon B082WS9NPH Natural seawater sterilization
3x5mm tubing Amazon B0852HXPN6 Option 1 Small scale - Incubator
4x4'' Sterile Gauze Amazon B07NDK8XM3 Sporulation
4x6mm tubing Amazon B08BCRV1FY Option 1 Small scale - Incubator
5 µm filters Amazon B082WS9NPH Natural seawater sterilization
50 mL falcon tubing Amazon B01M04HGPJ Sporulation
8x10mm tubing Amazon B01MSM3LLZ Option 1 Small scale - Incubator
Air filters Thermo Fisher MTGR85010 Option 1 Small scale - Incubator
Alcohol lamp Amazon B07XWD9WWC Sporulation
Ammonium iron(II) sulfate hexahydrate ACS reagent, 99% Sigma 215406-100G Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Aquarium Grade Gravel Amazon B07XRCKFBJ Option 1 Small scale - Incubator
Biotin powder, BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, 99% Sigma B4639-100MG Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Boric Acid, 99.8%, 10043-35-3, MFCD00011337, BH3O3, 61.83, 500g Thermo Fisher 5090113707 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Calcium D-Pantothenate,ge98.0% (T),C9H17NO5,137-08-6,25g,D-Pantothenic Acid Calcium Salt, P0012-25G 1/EA Thermo Fisher P001225G Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Check valves Amazon B08HRZR4MM Option 1 Small scale - Incubator
Clear tubing 3/8'' - 10 ft Amazon B07MTYMW13 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
COBALT(II) SULFATE HEPTAH-100G, WARNING - California - Cancer Hazard, 93-2749-100G 1/EA Thermo Fisher 5090114752 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Compound microscope with camera OMAX M83EZ-C50S Monitoring
Culture flask Thermo Fisher 07-250-080 Option 1 Small scale - Incubator
Culture light Amazon B07RRRPJ63 Option 1 Small scale - Incubator
Culture stoppers Amazon B07DX6J7QD Option 1 Small scale - Incubator
Drainage connector Amazon B00GUZ6CV0 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
EDTA CAS Number: 6381-92-6 Molecular Formula: C10H14N2O8Na2- 2H2O Molecular Weight: 372.2 Thermo Fisher 50213299 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Eisco Safety Pack Graduated Cylinder Sets Class A, ASTM, Capacity: 10 mL, 25 mL, 50 mL, Graduations: 0.2 mL, 0.5 mL, 1.0 mL, Borosilicate 3.3 Glass, Autoclavable: Yes, Class: Class A, Graduated: Yes, Tolerance: 0.10 mL, 0.17 mL, 0.25 mL Thermo Fisher S81273 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Eisco Safety Pack Graduated Cylinder Sets Class A, ASTM, Capacity: 50 mL, 100 mL, 250 mL, Graduations: 1.0 mL, 1.0 mL, 2.0 mL, Borosilicate 3.3 Glass, Autoclavable: Yes, Class: Class A, Graduated: Yes, Tolerance: 0.25 mL, 0.50 mL, 1.0 mL Thermo Fisher S81275 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Eisco Safety Pack Volumetric Flask Sets - Class A, ASTM, Capacity: 10 mL, 25 mL, 50 mL, Borosilicate 3.3 Glass, Autoclavable: Yes, Class: Class A, Closure Material: Glass, Closure Size: Stopper Number: 9, 9, 13, Closure Type: Penny Stopper, Graduated: Ye Thermo Fisher S81271 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Filter holder Amazon B07LCKBKCT Natural seawater sterilization
Fisherbrand Graduated Cylinders, Capacity: 500 mL, Graduations: 5 mL, Borosilicate Glass, Autoclavable: Yes, Limit of Error: +/-4.0 mL, Recommended Applications: Education, Subdivision: 5 mL, S63460 1/EA Thermo Fisher S63460 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
FLEXACAM C1 Camera Leica FLEXACAM C1 Monitoring
Folic acid, C19H19N7O6, CAS Number59303, vitamin m, pteroylglutamic acid, vitamin b9, folvite, folacin, folacid, pteroyllglutamic acid, pteglu, folic acid, folate, 25g, 100781, CHEBI:27470, Yellow to Orange, 2004190, 441.41, OVBPIULPVIDEAOLBPRGKRZSAN Thermo Fisher AAJ6083314 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Free Standing 20 Gallon Utility Sink Amazon B094TLH19L Option 2 - Medium scale - Water bath systems
GERMANIUM DIOXIDE 99.99 10GR Thermo Fisher AC190000100 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Glass Graduated Cylinders, Class A Round Base, Eisco, For Use With: Measuring liquids, Capacity: 1000 mL, Graduations: 10 mL White, CH0344OWT 1/EA Thermo Fisher S88442 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Glass slides Amazon B00L1S93PS Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Glycerol phosphate disodium salt hydrate isomeric mixture Sigma G6501-100G Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Growth containers -3.4 Qt- 3.25 Lt transparent containers with transparent lid Container store #10014828 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Growth light Amazon B086R14MFW Option 1 Small scale - Incubator
Hemocytometer Amazon B07TJQDKLJ Sporulation
Hinged plastic jars SKS Bottle & Packaging 40280125.01S Option 1 Small scale - Incubator
Inositol research grade, USP/NF For bacteriology. Optically inactive. Tested for its suitability in tissue culture. Size - 100G Storage Conditions - +15 C TO +30 C Catalog Number - 26310.01 CAS 87-89-8 Thermo Fisher 50247745 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Instant Ocean - 50 G Amazon B000255NKA Option 1 Small scale - Incubator
Inverted Microscope Leica DMi1 Leica DMi1 Monitoring
Iron(III) chloride hexahydrate ACS reagent, 97% Sigma 236489-100G Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Licor Ligth Meter Data Logger Licor LI-250A Monitoring
Light/temperature HOBO data logger Amazon B075X2SWKN Monitoring
Lights 150W Amazon B0799DQM9V Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Manganese sulfate monohydrate meets USP testing specifications Sigma M8179-100G Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Medium size rocks 2-3 inch, 20 pounds Home Depot 206823930 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Nicotinic Acid, 99%, C6H5NO2, CAS Number59676, daskil, apelagrin, acidum nicotinicum, akotin, 3carboxypyridine, niacin, 3pyridinecarboxylic acid, nicotinic acid, pellagrin, wampocap, 250g, 109591, CHEBI:15940, 1.4, 2004410, 293 deg.C (559 deg.F), 123.11, Thermo Fisher AAA1268330 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
p-Aminobenzoic acid 99.82% 4-aminobenzoic acid, C7H7NO2, CAS Number: 150-13-0, 25g, 0210256925 1/EA Thermo Fisher ICN10256925 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
PCV cement Amazon B001D9WRWG Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Plastic water valve Amazon B0006JLVE4 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Plastic water valve Amazon B07G5FY7X1 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Precision scale 1mg Amazon B08DTH95FN Materials to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Pump for filtered air Amazon B0BG2BT9RX Option 1 Small scale - Incubator
PVC tubing 1x24'' Home Depot 202300505 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Quantum Light meter Apogee Instruments MQ-510 Monitoring
Refrigerated Incubator Thermo Fisher 15-103-1566 Option 1 Small scale - Incubator
Rubber Grommets Amazon B07YZD22ZP Option 1 Small scale - Incubator
Salinity refractometer ATC B018LRO1SU Monitoring
Shade mesh 6x50 ft Home depot 316308418 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Sodium Nitrate ge 99.0% Nitric Acid, Sodium Salt, NNaO3, CAS Number: 7631-99-4, 500g, 1/EA Thermo Fisher BP360500 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Soldering for aeration opening Amazon B08R3515SF Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Spray isporopyl alcohol Amazon ‎ B08LW5P844 Sporulation
Stainless steel sissors Amazon B07BT4YLHT Sporulation
Stainless steel tray Amazon B08CV33YXG Sporulation
Stainless steel twizzers Amazon B01JTZTAJS Sporulation
Stir Bars Amazon B07C4TNKXB Materials to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Submersible circulation pump 400 GPH Amazon B07RZKRM13 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Submersible Spherical Quantum Sensor Waltz US-SQS/L Monitoring
Temperature gun Infrared Thermometer 749 B07VTPJXH9 Monitoring
Thiamine hydrochloride BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture Sigma T1270-25G Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Thymine 99% 2, 4-Dihydroxy-5-methylpyrimidine, C5H6N2O2, CAS Number: 65-71-4, 25g, 157850250 1/EA Thermo Fisher AC157850250 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Transparent Acrylic sheet 24x48 inch Home Depot 202038048 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Tubing water circulation 1''x10 ft Amazon B07ZC1PSF3 Option 2 - Medium scale - Water bath systems
UV light for natural seawater sterilization Amazon B018OI7PYS Natural seawater sterilization
Vacum pump Amazon B087XBTPVW Natural seawater sterilization
Vitamin B12 BioReagent, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture, suitable for plant cell culture, 98% Sigma V6629-100MG Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Volumetric Flasks, Class A Glass, Eisco, with Polypropylene Stopper, Graduated, White printed markings, Capacity: 1000 mL, CH0446IWT 1/EA Thermo Fisher S89446 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Volumetric Flasks, Class A Glass, Eisco, with Polypropylene Stopper, Graduated, White printed markings, Capacity: 500 mL, CH0446HWT 1/EA Thermo Fisher S89445 Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment
Water Chiller 200-600GPM Amazon B07BHHP71C Option 2 - Medium scale - Water bath systems
Y-splitters for 4x6mm tubing Amazon B08XTJKFCH Option 1 Small scale - Incubator
Zinc sulfate heptahydrate BioReagent, suitable for cell culture Sigma Z0251-100G Chemicals to create Provasoli’s Enriched Seawater (PES) and vitamins for media enrichment

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References

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पर्यावरण विज्ञान अंक 208
बहाली की सुविधा के लिए चंदवा बनाने वाले विशाल केल्प का फील्ड संग्रह और प्रयोगशाला रखरखाव
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Dawkins, P. D., Paz-Lacavex, A.,… More

Dawkins, P. D., Paz-Lacavex, A., Fiorenza, E. A., Rush, M. A., Beas-Luna, R., Lorda, J., Malpica-Cruz, L., Sandoval-Gil, J. M., McHugh, T. A., Han, M. K., Bracken, M. E. S., Lamb, J. B. Field Collection and Laboratory Maintenance of Canopy-Forming Giant Kelp to Facilitate Restoration. J. Vis. Exp. (208), e66092, doi:10.3791/66092 (2024).

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