In vivo 2-Photon סידן הדמיה ב Layer 2 / 3 של עכברים
Summary
כדי להבין את הדינמיקה של הרשת microcircuits ב הניאוקורטקס, חיוני להקליט בו זמנית את הפעילות של מספר גדול של נוירונים. In-vivo שני הפוטונים הדמיה סידן היא השיטה היחידה המאפשרת להקליט את הפעילות העצבית של אוכלוסייה צפופה עם רזולוציה של תא בודד.
Abstract
כדי להבין את הדינמיקה של הרשת microcircuits ב הניאוקורטקס, חיוני להקליט בו זמנית את הפעילות של מספר גדול של נוירונים. In-vivo שני הפוטונים הדמיה סידן היא השיטה היחידה המאפשרת להקליט את הפעילות העצבית של אוכלוסייה צפופה עם רזולוציה של תא בודד. השיטה מורכבת השתלת חלון הדמיה גולגולתי, הזרקת סידן פלורסנט אינדיקטור צבע זה יכול להיות נלקח על ידי מספר גדול של נוירונים ולבסוף להקליט את פעילותם של הנוירונים עם הדמיה זמן לשגות סידן שימוש ב-vivo two מיקרוסקופ פוטון. שיתוף הזרקת astrocyte ספציפי צבעים מאפשרת להבדיל בין הנוירונים האסטרוציטים. הטכניקה ניתן לבצע בעכברים לבטא מולקולות ניאון subpopulations ספציפיים של נוירונים כדי להבין טוב יותר את האינטראקציות רשת של קבוצות שונות של תאים.
Protocol
Discussion
היתרון של שיטה זו על פני הקלטות אלקטרו היא שזה פחות פולשני ומאפשר הקלטות של פעילות צפופה רשתות נוירונים עצביים. כאשר עושים את זה הליך זה חשוב לזכור לטפל קיצוניים בעת ביצוע craniotomy לא לפגוע הדורה. אפילו כמות קטנה של דימום עם subdural מאוד לטשטש את ההדמיה.
Acknowledgements
ברצוננו להודות אולגה Garaschuk לדיונים מועיל על אופטימיזציה של העמסה מרבית האינדיקטורים סידן.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
Referências
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
