在体内2光子层钙成像对小鼠的2 / 3
Summary
要了解在大脑皮层的微型网络的动态，这是必不可少的，同时记录了大量的神经元活动。在活体双光子钙成像是唯一的方法，允许一个记录密集的人口与单细胞的分辨率神经元活动。
Abstract
要了解在大脑皮层的微型网络的动态，这是必不可少的，同时记录了大量的神经元活动。在活体双光子钙成像是唯一的方法，允许一个记录密集的人口与单细胞的分辨率神经元活动。该方法包括在植入颅成像窗口，可以采取由大量的神经元，最后录制的神经元在体内的双光子显微镜使用时间的推移钙成像活动注入了荧光钙指示剂。星形胶质细胞特异性染料合作注入允许一个有别于星形胶质细胞神经元。该技术可以进行小鼠中表达的荧光分子在特定的神经元亚群，以便更好地了解不同的细胞群体的网络交互。
Protocol
准备的荧光钙指示剂。我们使用acetoxymethyl酯的染料，或AM短染料。这些染料注射细胞外时，可采取由细胞。我们通常使用浓度为1毫米俄勒冈绿BAPTA – 1 AM或荧光凌晨4点。上午染料可从Invitrogen公司在50微克小瓶。首先，我们准备在20％DMSO聚醚F – 127的解决方案。我们热烈的解决方案之前，每天使用，直到其明确的。我们溶解的钙指标的20％为15-20分钟到10毫米的浓度聚醚F-127/DMSO。然后，我们到1mm的解决方案中包含?…
Discussion
电生理记录，这种方法的优势在于它是创伤小，允许在密集的神经元的神经网络活动的录音。执行此过程时，重要的是要记得拿时要格外小心执行了开颅手术，不损伤硬脑膜。即使是少量硬膜下出血，大大模糊的影像。
Acknowledgements
我们要感谢奥尔加Garaschuk有益的讨论，优化大容量装载的钙指标。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Oregon Green BAPTA1-AM | Reagent | Invitrogen | O-6807 | |
| Fluo 4- AM | Reagent | Invitrogen | F-14201 | |
| Sulforhodamine 101 | Reagent | Invitrogen | S-359 | |
| Pluronic F-127 in DMSO | Reagent | Invitrogen | P-3000MP | |
| Centrifugal Filter (0.45 micron) | Reagent | Millipore | UFC3 0HV 0S |
Referências
- Garaschuk, O., Milos, R. I., Konnerth, A. Targeted bulk-loading of fluorescent indicators for two-photon brain imaging in vivo. Nat Protoc. 1, (2006).
- Stosiek, C., Garaschuk, O., Holthoff, K., Konnerth, A. In-vivo two-photon calcium imaging of neuronal networks. Proc Natl Acad Sci USA. 100, 7319-7324 (2003).
- Pologruto, T. A., Sabatini, B. L., Svoboda, K. ScanImage: flexible software for operating laser scanning microscopes. Biomed Eng Online 2:13. Biomed Eng Online. 2, (2003).
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In Vivo2-Photon Calcium ImagingLayer 2/3MiceNetwork DynamicsMicrocircuitsNeocortexSimultaneous RecordingActivity Of NeuronsLarge Number Of NeuronsSingle-cell ResolutionCranial Imaging WindowFluorescent Calcium Indicator DyeTime Lapse Calcium ImagingIn-vivo Two Photon MicroscopeAstrocyte-specific DyesNetwork InteractionsSubpopulations Of Neurons
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Golshani, P., Portera-Cailliau, C. In Vivo 2-Photon Calcium Imaging in Layer 2/3 of Mice. J. Vis. Exp. (13), e681, doi:10.3791/681 (2008).