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Capítulos
- 00:00Título
- 00:45Introduction
- 01:17Preparation of the Bait and SILAC Control Strain
- 02:44Grinding of Cells
- 04:05Pre-clearing Cell Lysate
- 05:51Eluting From IgG Beads by TEV Protease Cleavage
- 06:45Trichloroacetic Acid (TCA) Precipitation
- 08:11EtOH/ Acetate Precipitation
- 09:00Sample Analysis by Western Blotting and/ or Silver Staining
- 09:30Representative Results/ Outcome
- 10:15Conclusion
Aqui nós descrevemos uma nova técnica proteômica quantitativa para a identificação de complexos de proteína em Saccharomyces cerevisiae. Neste estudo, nós utilizamos o método SILAC juntamente com purificação de afinidade seguido por espectrometria de massa para identificar com alta especificidade dos parceiros de ligação de uma proteína ER, Scs2p.
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Protein ComplexesQuantitative ProteomicsS. CerevisiaeLipidsCellular MembranesCompartmentalizationIntracellular Signaling MoleculesNonvesicular RoutesMembrane Contact Sites (MCSs)Endoplasmic Reticulum (ER)Plasma Membrane (PM)Lipid-synthesizing EnzymesLipid TrafficER-PM MCSsYeast ModelEukaryotesScs2pMolecular PartnersGel ElectrophoresisIn-gel DigestionMass Spectrometry
