Coloração Maule para lignina: uma técnica para caracterizar a distribuição de lignina em seções de caule de Arabidopsis thaliana

A lignina é um importante componente estrutural da parede celular vegetal. É um polímero composto principalmente de álcoois siringílicos, ou unidades de lignina S, e álcoois guaiacil, ou unidades de lignina G, e uma população menor de álcoois para-cumarílicos chamados de unidades de lignina H.

O conteúdo da S-lignina difere em vários tecidos vegetais secundários. É encontrado principalmente nos vasos e fibras xilares e fibras interfasciculares, onde fornece suporte estrutural.

Para detectar a presença de S-lignina, pegue seções transversais da haste da dicotiledônea embebidas em agarose em um tubo. Trate as seções do caule sequencialmente com uma solução de coloração de permanganato de potássio, seguida de ácido clorídrico diluído e, finalmente, com hidróxido de amônio - uma base fraca.

Durante este tratamento, a porção S-Lignina presente na parede celular sofre uma série de alterações para finalmente gerar um produto que aparece em vermelho.

A intensidade da coloração vermelha é menor nas células do xilema devido à presença de menos S-lignina em comparação com as fibras interfasciculares, que aparecem em um vermelho mais profundo. Transfira as seções para uma lâmina e visualize-as sob um microscópio óptico.

A variação na intensidade do vermelho ajuda a entender a proporção relativa de S-lignina em tecidos vegetais lignificados.

Para coloração Maule, transfira as seções da haste para um tubo de microcentrífuga. Adicione 1 mililitro da solução de permanganato de potássio a 0,5% ao tubo que contém as seções. Pipete a solução de permanganato de potássio a 0,5% para cima e para baixo suavemente, de preferência, sem perturbar as seções.

Após uma incubação de 2 minutos e pipetagem repetida, deixe o tubo da microcentrífuga repousar até que todas as seções se acalmem. Usando uma pipeta de 1 mililitro, retire 700 microlitros de solução de permanganato de potássio a 0,5%. Adicione 700 microlitros de água destilada para enxaguar o permanganato de potássio. Repita três a quatro vezes ou até que a solução aquosa fique límpida.

Depois de descartar a água, adicione rapidamente 1 mililitro de ácido clorídrico a 3% até que a cor marrom profunda seja descarregada das seções. Isso pode acontecer dentro de 3 a 5 minutos ou pode exigir duas lavagens de 5 minutos cada. Pipete toda a solução de ácido clorídrico a 3% e adicione imediatamente 1 mililitro de solução concentrada de hidróxido de amônio antes de obter imagens sob iluminação de campo claro.