Technique de Subnormothermic Ex Vivo Foie de perfusion pour l'entreposage, de l'évaluation et de réparation des marginaux greffes du foie

Le but de cette procédure est de préserver et d’évaluer une greffe de foie dans des conditions quasi physiologiques. Pour ce faire, on récupère d’abord la greffe de foie d’un porc donneur. Dans un deuxième temps, le foie est canulé, puis le greffon est connecté au circuit de perfusion ex vivo.

Dans la dernière étape, les propriétés de perfusion et les caractéristiques du greffon hépatique sont surveillées pendant le temps de perfusion souhaité. En fin de compte, les taux d’aspartate aminotransférase ou d’un ST et les analyses histologiques des biopsies parenchymateuses sont utilisés pour montrer la préservation de la lésion et la viabilité de la greffe hépatique. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes de conservation existantes, comme le stockage statique, est que la conservation dans des conditions physiologiques entraîne moins de dommages de conservation et permet l’évaluation fonctionnelle et le traitement du greffon avant la transplantation d’organe proprement dite.

Immédiatement après avoir induit la mort cardiaque par l’administration de chlorure de potassium, prélever 1,6 litre de sang d’un porc Yorkshire mâle de 30 à 35 kilogrammes dans des sacs CPDA fermer l’abdomen, laisser le foie intra abdominal pendant 45 minutes pour induire une lésion ischémique chaude immédiatement avant la fin de l’ischémie chaude. Time canuler l’aorte et la veine porte avec des lignes de rincage d’organe à ce moment également. Utilisez une double perfusion par pression de l’aorte et des sacs portiques entraînés par gravité pour rincer le foie avec la solution de l’Université du Wisconsin.

Ensuite, coupez le foie du porc, en laissant tous les vaisseaux restants et placez-le dans un sac d’organes. Canulez les parties supra et infra hépatiques de la veine inférieure avec des réducteurs d’un demi-pouce sur trois huitièmes de pouce avec un verrou de leurre. Canulez la veine porte et l’artère hépatique avec trois huitièmes de pouce sur quart de pouce et un quart de pouce sur trois huitièmes de pouce.

Réduit également avec un verrouillage de leurre à ce moment-là. Fermez ensuite le sachet et conservez le foie sur de la glace jusqu’à la perfusion. Pour mettre en place le circuit de perfusion ex vivo, connectez l’écoulement d’un réservoir principal à une pompe centrifuge et à un oxygénateur commercial derrière l’oxygénateur.

Divisez le tube en deux lignes. Connectez une conduite à un dialyseur qui s’écoule dans le réservoir principal. Connectez l’autre ligne à un filtre de réduction des leucocytes.

Divisez la ligne après la réduction leucocytaire Filtre en une ligne artérielle pour fournir la perfusion huit à l’artère hépatique et en une ligne veineuse porte pour délivrer la perfusation huit à un deuxième réservoir qui s’écoule dans la veine porte par écoulement par gravité. Clampez l’entrée du portail, puis connectez la ligne artérielle à une boucle de caverneuse veineuse s’écoulant dans le réservoir principal. Pour la récupération du liquide, réglez la température de départ du circuit et du bain-marie à 20 degrés Celsius.

Ensuite, couvrez le bain d’une membrane imperméable pour recueillir l’ascite ou les fuites du huit perfusé. Connectez une conduite d’aspiration entraînée par une pompe à rouleaux au réservoir principal. Relâchez ensuite la pince de sortie du réservoir principal et remplissez le circuit avec la solution de perfusion.

Démarrez la pompe centrifuge à 1 500 coups par minute, en vous assurant que tout l’air est chassé hors du circuit. Ouvrez ensuite l’alimentation en gaz de l’oxygénateur. La connexion du foie au circuit est la partie la plus délicate de la procédure.

Prenez soin d’éviter de plier le tube et d’éliminer les bulles pour éviter d’entraver l’écoulement du foie. Le niveau du réservoir à porte doit également être suivi attentivement. Il ne doit jamais fonctionner à vide.

Retirez le foie de la glace et rincez la solution de l’Université du Wisconsin avec une solution saline. Placez ensuite le foie sur la membrane au-dessus du bain-marie. Réduisez la vitesse de la pompe centrifuge à 1000 coups par minute et placez deux pinces sur le côté artériel de la boucle de la veine caverneuse.

Ensuite, coupez le tube entre les pinces et connectez les deux sorties de la veine caveuse à la conduite de la veine caverneuse. Relâchez la pince de la ligne artérielle. Versez du perfuse huit dans la canule artérielle pour éliminer les bulles et connectez la ligne à la canule.

Augmentez la pompe centrifuge à 1 500 coups par minute et relâchez la deuxième pince de la ligne de la grotte de Venner et relâchez la pince du réservoir veineux porte pour le remplir. Laissez la solution de perfusion se verser dans la canule porte, puis connectez-la. En prenant soin de maintenir les niveaux de liquide dans le réservoir à porte stables.

Après avoir connecté le foie au circuit, augmentez la température du bain-marie à 33 degrés Celsius au cours des 60 prochaines minutes. Visez un débit artériel de départ d’environ 250 millilitres par minute à 40 millimètres de mercure. Celle-ci peut atteindre 700 millilitres par minute pendant la perfusion.

Une fois que la pression est augmentée jusqu’à 70 millimètres de mercure, visez un écoulement veineux de 500 à 600 millilitres par minute à trois à cinq millimètres de mercure. Après avoir augmenté la température, le débit veineux de l’orifice augmentera jusqu’à 1 100 millilitres par minute. Abaissez le réservoir principal pour régler le débit sortant à moins deux milligrammes de mercure afin d’éviter la congestion hépatique par obstruction fonctionnelle de l’écoulement, en vous assurant qu’aucune bulle d’air n’est prise dans le tube de cavalage.

Réglez le débit de dialyse huit à 500 millilitres par heure. En prenant soin d’ajuster le débit sortant de dialyse pour que le PERFUSE eight ne soit ni dilué, ni concentré. Maintenez un pH bas pendant le début de la perfusion pour protéger l’organe.

Ajuster la pression partielle du dioxyde de carbone en continu jusqu’à 25 à 30 millimètres de mercure afin que le pH atteigne un niveau physiologique en une heure. Pour imiter les conditions physiologiques, injectez continuellement du glucose et de l’insuline dans la veine porte. Injectez soigneusement du bicarbonate de sodium ou de potassium dans le circuit sous un contrôle répétitif du sang, des gaz et des électrolytes, et surveillez la perfusion par des analyses périodiques des gaz du sang veineux et artériel et un ST.

Surveillez le débit vasculaire et la pression. Une perfusion stable maintiendra une résistance vasculaire constante à la fin de la période de perfusion ex vivo. Appelez le système de perfusion en panne, puis après avoir déconnecté le tube du foie, rincez le PERFUSE huit doublement hors du foie avec une solution glacée de l’Université du Wisconsin.

Enfin, conservez le foie sur de la glace dans un sac d’organe stérile avant la transplantation. L’obtention de débits vasculaires constants avec des pressions stables est un bon indicateur d’une oxygénation adéquate. Une fois que la température cible de 33 degrés Celsius est atteinte, les valeurs de débit se situent à une échelle constante, presque physiologique, pour le reste de la période de perfusion, en même temps que l’organe devient métaboliquement actif.

Ce graphique montre la pression partielle veineuse d’oxygène, un marqueur de la consommation d’oxygène. Au cours des deux premières heures, la pression partielle veineuse d’oxygène diminue jusqu’à un plateau alors constant. À cet état métaboliquement actif, le foie commence à produire de la bile et le dialyseur fournit une homéostasie électrolytique équilibrée.

La mesure en ligne A ST sert de moniteur des lésions cellulaires hépatiques. Par exemple, dans cette expérience, seule une faible augmentation de A ST sur toute la période de perfusion est observée. Les colorations H et E après six heures de perfusion révèlent une nécrose hépatocytaire inférieure à 5 % avec une structure lobulaire et sinusoïdale intacte.

La coloration BAS d’un foie perfusé ex vivo au même point de temps démontre un stockage de glycogène cellulaire réapprovisionné par rapport au stockage épuisé observé dans les greffons de mort cardiaque de donneur conservés à froid. À la suite de cette procédure, un modèle de reperfusion d’organe tel qu’une transplantation hépatique peut être réalisé pour étudier l’effet de la perfusion hépatique ex vivo sur les lésions de reperfusion et la fonction des organes.