Axotomia do nervo facial em ratos: um modelo para estudo de resposta motoneuron para Injury

O objetivo geral deste procedimento é exodomizar o nervo facial para estudar danos nos nervos periféricos. O nervo facial se origina na ponte do tronco encefálico e sai do crânio através do estilo. Forame mastóide, o nervo então se ramifica em seus componentes principais.

Uma vez exposto, o nervo é ex autotomizado em sua saída do forame estilomastóideo. Dois marcos principais ajudam a localizar o nervo facial. O primeiro é o canal auditivo, que é composto por placas cartilaginosas brancas peroladas conectadas por uma membrana fina.

O outro é o ventre anterior do músculo digástrico, que fica no topo do nervo e sua saída do forame estilomastóideo. Depois que o nervo facial é ferido, o cientista pode estudar vários fatores, como morte do neurônio mo ou expressão gênica. O modelo de lesão do nervo facial é um dos modelos de lesão do nervo periférico mais bem caracterizados.

As vantagens dessa técnica são sua simplicidade, alta reprodutibilidade e falta de efeito nas funções vitais da paralisia facial subsequente. Além disso, devido à natureza altamente simétrica do sistema nervoso, o lado não lesionado pode servir como um controle interno emparelhado para seus experimentos. Para manter o uso de técnicas assépticas durante todo este procedimento, certifique-se de ter todas as ferramentas autoclavadas e ter um esterilizador de esferas de vidro preparado para esterilizar as ferramentas entre as operações.

Prepare a bancada cirúrgica colocando uma almofada absorvente sobre uma almofada de aquecimento, configurando o microscópio e colando o cone do nariz para que ele se alinhe com a borda do campo visual. Depois de anestesiar o mouse, certifique-se de que o mouse não tenha nenhuma resposta física a manipulações, incluindo um beliscão no dedo do pé. Em seguida, transfira o fluxo de gás da câmara de anestesia para o cone do nariz e aplique a pomada talâmica.

Posicione o mouse do lado esquerdo sobre as almofadas cirúrgicas com uma almofada aquecida abaixo. Monitore continuamente a respiração do animal e ajuste o fluxo de flúor ISO conforme necessário para manter a anestesia. Em seguida, para expor o local da cirurgia, prenda a orelha direita no cone do nariz.

A veia auricular posterior deve ser vista atravessando a orelha. Em seguida, molhe o pelo com 70% de etanol e raspe a visão. Depois de remover o pelo, limpe a pele com três esfoliações alternadas de iodo e etanol 70% com uma mira completamente limpa.

Prossiga com a cirurgia. Certifique-se de posicionar a boca quadrada de lado com a veia da orelha viajando horizontalmente. Isso tornará muito mais fácil encontrar o nervo facial.

Para determinar a localização da primeira incisão, trace a veia auricular posterior da orelha até a área posterior da protuberância da orelha. Em seguida, usando uma tesoura de mola, faça uma incisão de quatro milímetros, dois a três milímetros posterior à protuberância para fins de ensino. Esta incisão será ampliada para expor a anatomia subjacente.

Agora faça uma dissecção romba da gordura subcutânea e da fáscia. Os vasos sanguíneos e os músculos podem ser facilmente danificados por tesouras. Se ocorrer sangramento.

Aplique pressão com um cotonete estéril por pelo menos 30 segundos. Se ocorrer perda significativa de líquidos, injete até meio mililitro de solução salina intraperitoneal com uma agulha de calibre 25 ou 27. Agora localize o nervo facial usando os principais pontos de referência.

O nervo acessório espinhal é superficial ao nervo facial e pode ser visto viajando da porção do crânio. Para inervar o músculo trapézio, identifique o canal auditivo cartilaginoso. É branco perolado e pode ser visto rostral ao nervo facial.

O nervo facial envolve a parte do mimo do canal auditivo. Em seguida, identifique o ventre muscular do músculo digástrico anterior que fica em cima e mimado no nervo facial. Disseque sob essa estrutura para expor o nervo facial.

É uma estrutura branca sólida, aderida a uma camada de fáscia subjacente. Identifique os principais ramos do nervo facial. Rastreie-os dorsalmente até sua origem a partir do forame mastóideo estilete.

Use uma pinça fina para manter o local aberto enquanto usa a ponta da tesoura de mola para dissecar ao longo do trajeto dos nervos faciais. A mastóide óssea de Raymond pode ser sentida pela pinça. Agora, identifique o tronco do nervo facial para esmagar o nervo.

Comprima-o com a pinça fina por 30 segundos com pressão constante. Isso cortará todos os axônios. Em seguida, repita a compressão em um ângulo perpendicular por mais 30 segundos.

Mantenha a pressão consistente entre os experimentos. Agora que os marcos anatômicos relevantes foram identificados, demonstrarei a técnica cirúrgica mais refinada. Usando uma incisão menor, trace a veia auricular posterior da orelha até a área posterior da protuberância da orelha e faça uma incisão de quatro milímetros, dois a três milímetros posterior à protuberância.

Agora, sem rodeios, disseque através da gordura subcutânea e da fáscia utilizando os três pontos de referência, o nervo acessório espinhal, o canal auditivo e a barriga anterior do músculo digástrico. Descubra o nervo facial. Trace o nervo facial de volta para o forame estilomastóideo para alcançar o tronco do nervo facial para atravessar o nervo, estabilize-o suavemente com uma pinça fina e corte com uma tesoura.

Evite aplicar muita tração no nervo, ou ele pode sair do tronco cerebral. Em seguida, afaste os cotos ou remova um segmento do nervo, garantindo que nenhuma reconexão possa ocorrer. Por fim, inspecione cuidadosamente o nervo e confirme se ele está totalmente cortado.

Após a ex-, retorne toda a gordura e músculos às suas posições aproximadas. Em seguida, feche a ferida com uma ferida de 7,5 milímetros, suturas de clipe ou cola de cianoacrilato. Se necessário, aplique analgésicos neste momento, desligue a anestesia e retorne o mouse a uma gaiola vazia sem cama.

Enquanto o animal se recupera, examine-o em busca de sinais de paralisia facial, os bigodes ficam paralisados. Se eles estiverem inclinados para trás em direção à bochecha, o nariz parecerá desviado e o olho não piscará em resposta a um sopro de ar. Agora, se o animal for fêmea, abrigue-o com outra fêmea.

Mas se o homem o abrigar sozinho até que a função de piscar dos olhos retorne, aplique a pomada talâmica diariamente para evitar complicações da córnea. Enquanto isso, monitore o camundongo em busca de sinais de infecção ou outras complicações até que o local da cirurgia esteja cicatrizado. Há uma variação significativa na perda de neurônios motores após a ex-com base na idade e no histórico genético dos camundongos em animais selvagens que recebem uma transecção do nervo facial às oito semanas de idade.

Cerca de 86% dos neurônios motores sobrevivem em 28 dias. Otomia pós-ex. Houve significativamente mais perda de células observada no modelo de camundongo SOD um de esclerose lateral miotrófica, bem como na captura de laser de camundongo knockout do gene ativador de recombinação imunodeficiente dois.

A microdissecção foi usada para isolar o material do núcleo motor facial. Todo o núcleo motor facial pôde ser capturado. Alternativamente, os subnúcleos podem ser coletados separadamente.

A técnica tem grande precisão. Os neurônios motores podem ser capturados individualmente e a pílula neurológica restante também pode ser coletada para análise posterior. A PCR quantitativa foi usada para examinar a expressão gênica nas amostras de subnúcleos do subnúcleo medial ventral, mostrada como a linha tracejada e o subnúcleo lateral ventral mostrado como a expressão da linha sólida de quatro genes associados à resposta de regeneração nervosa foi medida.

Algumas diferenças foram encontradas entre os subnúcleos destes. A expressão do Gap 43 apresentou a maior diferença entre os subnúcleos. Uma vez que essa técnica seja dominada, a cirurgia pode ser concluída em apenas alguns minutos.

É importante lembrar de posicionar o animal corretamente, fazer a incisão no local correto e usar os pontos anatômicos para localizar o nervo facial. É fácil se perder na região da cabeça e pescoço, portanto, se você se sentir perdido, basta localizar o canal auditivo cartilaginoso e traçá-lo posteriormente para encontrar o nervo facial.