/
/
Ett förbättrat protokoll för att rena och direkt monobiotinylat Rekombinant BDNF i ett rör för cellulära människohandel studier i nervceller
É necessária uma assinatura da JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou comece sua avaliação gratuita.
1Department of Physiology, Faculty of Biological Sciences,Pontificia Universidad Católica de Chile, 2Department of Molecular and Cellular Biology, Faculty of Biological Sciences, Center for Aging and Regeneration (CARE UC),Pontificia Universidad Católica de Chile, 3Institute of Biomedical Sciences. Faculty of Medicine and Faculty of Life Sciences,Universidad Andrés Bello, 4Department of Neuromuscular Diseases, UCL Queen Square Institute of Neurology and UK Dementia Research Institute at UCL,University College London Campus
Capítulos
- 00:00Introdcution
- 00:48Transfection of HEK293 cells
- 01:49Media Collection and Storage
- 03:02Media Concentration and Purification
- 04:58In vitro Mono-biotinylation Reaction
- 06:01Biotinylation Analysis
- 06:56Visualization of Retrograde Axonal Transport of BDNF-QD in Live Neurons
- 07:58Represetative Results
- 13:17Conclusion
Rekombinant BDNF som innehåller en Avi-sekvens (BDNFAvi) produceras i HEK293-celler på ett kostnadseffektivt sätt och renas genom affinitetkromatografi. BDNFavi är därefter direkt mono-biotinylated med enzymet BirA i ett rör. BDNFavi och monobiotinylerade BDNFavi behåller sin biologiska aktivitet jämfört med kommersiellt tillgängliga BDNF.
