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Monitoramento em tempo real da aurora quinase Uma ativação usando biosensores de FRET conformacional em células vivas
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Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells

Monitoramento em tempo real da aurora quinase Uma ativação usando biosensores de FRET conformacional em células vivas

DOI:
10.3791/61611-v

•

06:29 min

•

July 30, 2020

•

, ,
1Univ Rennes, CNRS, IGDR (Genetics and Development Institute of Rennes), UMR 6290, F-35000 Rennes, France

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 00:36Donor/Acceptor Förster Resonance Energy Transfer (FRET) Pair Selection
  • 01:13Cell Synchronization
  • 01:42FRET/Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM) Acquisitions
  • 02:50Donor/Acceptor Pair Delta Lifetime Calculation and FLIM Value Comparison
  • 03:53Results: Representative Aurora Kinase A (AURKA) FRET Biosensor and Negative Control Images
  • 05:52Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

A ativação do Ser/Thr kinase multifuncional AURKA é marcada por sua autofosforilação em Thr288. Sondas fluorescentes que dependem de FRET podem discriminar entre seus estados inativos e ativados. Aqui, ilustramos algumas estratégias para a engenharia de sondas, juntamente com um protocolo RÁPIDO DE FRET para acompanhar a ativação da quinase ao longo da mitose.

Tags

Real-time MonitoringAurora Kinase AConformational FRET BiosensorsLive CellsFRET-FLIMFluorescent ProteinDonor-acceptor PairCell SynchronizationMicroscopyLifetime MappingMitotic Spindle

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