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使用活细胞中的构象FRET生物传感器实时监测极光激酶A活化
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Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells
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使用活细胞中的构象FRET生物传感器实时监测极光激酶A活化

DOI:
10.3791/61611-v

•

06:29 min

•

July 30, 2020

•

, ,
1Univ Rennes, CNRS, IGDR (Genetics and Development Institute of Rennes), UMR 6290, F-35000 Rennes, France

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 00:36Donor/Acceptor Förster Resonance Energy Transfer (FRET) Pair Selection
  • 01:13Cell Synchronization
  • 01:42FRET/Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM) Acquisitions
  • 02:50Donor/Acceptor Pair Delta Lifetime Calculation and FLIM Value Comparison
  • 03:53Results: Representative Aurora Kinase A (AURKA) FRET Biosensor and Negative Control Images
  • 05:52Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

多功能Ser/Thr激酶AURKA的激活以其在Thr288上的自磷酸化为特征。依赖于FRET的荧光探针可以区分其非活性和激活状态。在这里，我们说明了探针工程的一些策略，以及快速的FRET方案，以跟踪整个有丝分裂中的激酶激活。

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Keywords: Real-time MonitoringAurora Kinase AConformational FRET BiosensorsLive CellsFRET-FLIMFluorescent ProteinDonor-acceptor PairCell SynchronizationMicroscopyLifetime MappingMitotic Spindle

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