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From Cells to Cell-Free Protein Synthesis within 24 Hours Using Cell-Free Autoinduction Workflow

De células à síntese de proteínas livres de células dentro de 24 horas usando fluxo de trabalho de autoindução sem células

DOI:
10.3791/62866-v

•

06:08 min

•

July 22, 2021

•

, , ,
1Department of Chemistry and Biochemistry,California Polytechnic State University San Luis Obispo, 2Center for Application in Biotechnology,California Polytechnic State University San Luis Obispo

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:36Media Growth
  • 01:35Cell Harvest
  • 02:34Extract Preparation
  • 03:43Cell-Free Protein Synthesis and Quantification of the Reporter Protein, Super Folder Green Fluorescent Protein (sfGFP)
  • 04:46Results: Comparison Between Cell Extracts Obtained from Cell-Free Autoinduction Media Grown to Optical Densities of 2.5 and 10
  • 05:27Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Este trabalho descreve a preparação do extrato celular de Escherichia coli (E. coli) seguido de reações de síntese proteica livre de células (CFPS) em menos de 24 horas. Explicação do protocolo de autoindução automática livre de células (CFAI) detalha melhorias feitas para reduzir a supervisão dos pesquisadores e aumentar as quantidades de extrato celular obtidos.

Tags

Cell-free Protein SynthesisCell-free AutoinductionIn Vitro Protein SynthesisCell-free ExpressionEnergy MetabolismE. Coli BL21 StarS30 BufferCell Extract Preparation

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