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Paramagnetic Relaxation Enhancement for Detecting and Characterizing Self-Associations of Intrinsically Disordered Proteins(본질적으로 무질서한 단백질의 자기 연관성을 검출하고 특성화하기 위한 상자성 이완 향상)
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Bioquímica
Paramagnetic Relaxation Enhancement for Detecting and Characterizing Self-Associations of Intrinsically Disordered Proteins
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Paramagnetic Relaxation Enhancement for Detecting and Characterizing Self-Associations of Intrinsically Disordered Proteins(본질적으로 무질서한 단백질의 자기 연관성을 검출하고 특성화하기 위한 상자성 이완 향상)
DOI:
10.3791/63057-v
•
07:24 min
•
September 23, 2021
•
Courtney N. Johnson
,
David S. Libich
1
Department of Biochemistry and Structural Biology and Greehey Children’s Cancer Research Institute
,
The University of Texas Health Science Center at San Antonio
Capítulos
00:05
Introduction
00:49
Conjugating the 3-Maleimido-PROXYL Nitroxide Spin Label
01:38
Preparing the NMR Sample for Measuring Intramolecular PRE
02:11
Setting Up the NMR Spectrometer and Experiment Specific Parameters
03:51
Setting Up the
1
H
N
–
T
2
Experiment
04:58
Making a Diamagnetic Sample by Reducing Spin-Label with Ascorbic Acid
05:52
Results:
1
H
N
–
T
2
Rates for Residues 171 – 264 of the Intrinsically Disordered Domain of EWSR1
06:30
Conclusion
Summary
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본질적으로 무질서한 단백질에서 약하고 일시적인 분자 간 및 분자 내 상호 작용을 감지하기 위한 상자성 이완 강화 NMR 분광법의 적용을 위한 프로토콜이 제시됩니다.
Tags
Paramagnetic Relaxation Enhancement
Intrinsically Disordered Proteins
Biomolecular Interactions
NMR Techniques
Spin Label
15N Isotopically Labeled Protein
Gel Filtration
Ellman’s Reagent
NMR Sample Preparation
Pulse Calibration
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