March 2nd, 2022
Qui, presentiamo un protocollo che descrive la coltura di organoidi intestinali canini in un sistema di supporto permeabile a doppia camera. Vengono descritti la semina organoide nei supporti permeabili, il mantenimento del monostrato e i successivi esperimenti di permeabilità ai farmaci.
La combinazione della tecnologia degli organoidi canini e di un sistema di supporto permeabile a doppia camera supera i limiti delle linee cellulari sperimentali 2D tradizionalmente utilizzate nei modelli di ricerca biomedica. La tecnologia può aumentare l'affidabilità delle previsioni dell'apparente permeabilità orale dei farmaci terapeutici candidati sia nei pazienti canini che in quelli umani. Il sistema può essere applicato ad altri campi della ricerca biomedica, tra cui la ricerca microbiologica, gli studi sulla captazione virale, le interazioni farmacologiche e i meccanismi di trasporto dei farmaci. La standardizzazione, la documentazione dettagliata delle procedure sperimentali e il monitoraggio costante dei monostrati cellulari sono pratiche cruciali necessarie per i saggi di supporto permeabile. Posizionare la matrice della membrana extracellulare sul ghiaccio per iniziare lo scongelamento. Immergerlo nel ghiaccio per proteggerlo dal rapido scongelamento ed evitare la solidificazione. Pre-raffreddare una centrifuga refrigerata a 4
Questo articolo presenta un protocollo per coltivare organoidi intestinali canini utilizzando un sistema di supporto permeabile a doppia camera. L'approccio migliora l'affidabilità delle previsioni di permeabilità dei farmaci sia nei modelli canini che umani.