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Electroporation-Mediated Delivery of Cas9 Ribonucleoproteins and mRNA into Freshly Isolated Primary Mouse Hepatocytes

Entrega mediada por eletroporação de cas9 ribonucleoproteínas e mRNA em hepatócitos de rato primário recém-isolados

DOI:
10.3791/63828-v

•

09:45 min

•

June 02, 2022

•

, , , ,
1Department of Bioengineering,Clemson University, 2Godley Snell Research Center,Clemson University

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 01:18Animal Surgery
  • 03:26Hepatocyte Isolation
  • 04:54Electroporation and Cell Culture
  • 07:46Results: Generating Electroporation-Assisted CRISPR-Cas9 Edits in Freshly Isolated Mouse Hepatocytes
  • 09:06Conclusion

Summary

Tadução automática

Tadução automática

Este protocolo descreve técnicas para isolar hepatócitos primários do fígado e eletroporar CRISPR-Cas9 como ribonucleoproteínas e mRNA para interromper um gene alvo terapêutico associado a uma doença metabólica herdada do fígado. Os métodos descritos resultam em alta viabilidade e altos níveis de modificação genética após a eletroporação.

Tags

ElectroporationCas9 RibonucleoproteinsMRNAPrimary Mouse HepatocytesGene EditingLiver PerfusionHepatocyte IsolationIn Vitro And In Vivo Disease ModelsAnesthesiaPortal VeinInferior Vena CavaPerfusion SolutionFlow RateLiver SofteningCotton SwabForceps

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