Quantification des modifications post-traductionnelles des histones globales à l’aide de la cytométrie en flux intranucléaire dans la microglie cérébrale isolée de souris
September 15th, 2023
Ce travail décrit un protocole pour la quantification des modifications globales des histones par cytométrie en flux intranucléaire dans des microglies cérébrales isolées. L’ouvrage contient également le protocole d’isolement de la microglie qui a été utilisé pour la collecte de données.
Notre recherche vise à comprendre les mécanismes de régulation fondamentaux qui contrôlent l’expression des gènes dans le cerveau, et nous nous intéressons particulièrement à la façon dont la perturbation de ces mécanismes contribue aux troubles neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques. Nous nous concentrons sur la compréhension de la façon dont les facteurs de risque génétiques et environnementaux se combinent pour altérer la fonction cellulaire et produire des troubles du comportement. Ce protocole comprend des méthodes de criblage à haut débit des modifications des histones dans la microglie isolée, ce qui nous permet de passer au crible des dizaines de modifications épigénétiques différentes avant de nous engager dans le séquençage à haut débit et les études de suivi fonctionnel.
Notre protocole fournit des mesures des modifications de l’histo globale similaires à celles de la parcelle occidentale. Cependant, notre technique est à la fois plus rapide, nécessite moins de cellules d’entrée, est plus quantitative et peut être multiplexée.
Aperçu
Cette étude décrit un protocole pour quantifier les modifications globales des histones en utilisant la cytométrie en flux intranucléaire spécifiquement dans la microglie cérébrale isolée. L'enquête vise à comprendre les mécanismes régulateurs fondamentaux de l'expression des gènes dans le cerveau, en particulier comment les perturbations contribuent aux troubles neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques.
Composantes clés de l'étude
Domaine scientifique
- Neuroscience
- Épigénétique
- Cytométrie en flux
Contexte
- Concentration sur la régulation de l'expression des gènes dans le cerveau.
- Exploration des facteurs de risque génétiques et environnementaux liés aux troubles cérébraux.
- Rôle de la microglie dans les conditions neurodéveloppementales et neuropsychiatriques.
- Développement d'un nouveau protocole de criblage à haut débit.
Objectif de l'étude
- Fournir une méthode pour quantifier les modifications des histones dans la microglie.
- Faciliter le criblage des modifications épigénétiques avant une analyse plus approfondie.
- Faire progresser la compréhension des fonctions cellulaires et des déficiences comportementales liées aux troubles.
Méthodes utilisées
- Utilisation de la cytométrie en flux intranucléaire pour quantifier les modifications des histones.
- Le modèle biologique impliquait une microglie isolée du tissu cérébral de souris.
- Les protocoles incluaient des étapes d'enrichissement immunitaire et de centrifugation pour l'isolement cellulaire.
- Des étapes détaillées pour la préparation des échantillons de tissus et l'analyse avec des anticorps spécifiques ont été fournies.
- Analyse statistique présentée pour quantifier les niveaux de modification des histones via les valeurs MFI.
Résultats principaux
- Mise en évidence d'une augmentation de l'acétylation de la lysine 27 de l'histone H3 due au traitement par lipopolysaccharide.
- Les résultats ont indiqué des populations normalement distribuées avec des changements notables de fluorescence.
- Fourni des aperçus quantitatifs sur le paysage épigénétique de la microglie et ses réponses fonctionnelles.
- Démontré une méthode rapide et efficace par rapport aux techniques traditionnelles.
Conclusions
- Cette étude soutient une approche plus rapide et plus quantitative pour étudier les modifications des histones dans la microglie.
- Implications significatives pour comprendre l'impact des changements épigénétiques sur les troubles neurodéveloppementaux et psychiatriques.
- La méthode permet une analyse à haut débit qui pourrait accélérer la recherche sur les réponses cellulaires et la neurobiologie.
Questions fréquemment posées
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