ويستخدم على نطاق واسع لطباعة Microcontact نمط البروتينات والجزيئات الأخرى على السطوح المادية. نحن لشرح الخطوات الأساسية لهذه العملية ، وختم أنماط فبرونيكتين على الزجاج.
Abstract
القدرة على نمط البروتينات والجزيئات الحيوية الأخرى على ركائز مهمة لالتقاط التعقيد المكاني للبيئة خارج الخلية. تطور الطباعة microcontact من قبل مجموعة ايتسايدز (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> http://gmwgroup.harvard.edu/</a>) في منتصف 1990s تشهد ثورة هذا المجال من خلال جعل الالكترونيات الدقيقة / تقنيات التصنيع الدقيق للوصول إلى المختبرات التي تركز على علوم الحياة. تطبيقات الأولية لهذه الطريقة تستخدم polydimethylsiloxane (PDMS) طوابع لخلق أنماط للمواد الكيميائية على الأسطح المواد functionalized<sup> 1</sup>. منذ ذلك الحين ، تم تطوير مجموعة من الأساليب المبتكرة لنمط الجزيئات الأخرى ، بما في ذلك البروتينات<sup> 2</sup>. هذا الفيديو يوضح العملية الأساسية لخلق الطوابع PDMS ويستخدمها لنمط البروتينات ، حيث أن هذه الخطوات هي من الصعب التعبير عنها بدقة في الكلمات. ونحن نركز على الزخرفة البروتين المصفوفة خارج الخلية فبرونيكتين coverslips على الزجاج كمثال محدد من الزخرفة. عنصرا هاما من عملية الطباعة microcontact هو سيد طوبولوجي ، التي هي من الزهر على الطوابع ، وتنعكس في المناطق التي أثيرت وخفضت من الماجستير في الطوابع وتحديد نمط النهائي. عادة ، على درجة الماجستير تتكون من رقاقة السليكون مغلفة مقاومة للضوء ومن ثم من قبل ضوئيه منقوشة ، كما هو الحال هنا. إنشاء سادة تحتوي على نمط معين يتطلب معدات متخصصة ، وأفضل السبل بالتشاور مع مركز تصنيع أو مرفق. ومع ذلك ، يمكن استخدام أي ما يقرب من الركيزة مع طوبولوجيا كمعلم ، مثل حيود حواجز شبكية من البلاستيك (انظر الكواشف لمثال واحد) ، وتوفر هذه الصدفة سادة متاحة بسهولة ، وأنماط بسيطة. هذا البروتوكول تبدأ عند نقطة وجود رئيسي في متناول اليد.
Protocol
1. تحضير محاليل ومواد وينبغي تنفيذ هذه الخطوات من قبل عدة أيام. coverslips الزجاج. وتم تنظيف Coverslips عن طريق الغمر لمدة 10 دقيقة في حل من المنظفات 7X Linbro : المياه ، ومختلطة في 1 : 3 نسبة وساخنة ، مع التحريك …
Discussion
عملية الطباعة microcontact المفهوم بسيط وقوي جدا ، بعد أن تم تطبيقه على الزخرفة مجموعة واسعة من الجزيئات على مجموعة متنوعة من ركائز. ومع ذلك ، فإن هذه العملية لا تزال شيئا من الفن. هندسة محددة لنمط المزمع إنشاؤها ، لتكون منقوشة البروتين والوزن التطبيقية ، وطلاء / الشروط ختم كل ذلك يؤثر …