En teknik presenteras för in-vivo samling av interstitiell vätska prover från relevanta vävnad platser (här, experimentellt inflammerad hud) för mätning av biokemiska förmedla smärta och inflammation.
Abstract
Detta in vivo mänskliga bioassay kan användas för att studera frivilliga försökspersoner och patienter. Prover samlas in från relevanta vävnad platser som huden via aseptiskt in mikrodialys katetrar (Dermal dialys, Erlangen, Tyskland). Illustrerad i detta exempel är insamling av interstitiell vätska från experimentellt inflammerad hud på frivilliga försökspersoner. Provtagning kan kombineras med andra experimentella tester. Till exempel ger en samtidig bedömning av lokalt släppt biokemikalier och subjektiv känslighet för smärtsamma stimuli i experimentellt inflammerad hud den kritiska biokemiska beteendeterapi länk för att identifiera biomarkörer för smärta och inflammation. Presenteras analysen i den levande mänskliga organismen tillåter mekanistiska inblick i vävnadsspecifika processer som ligger bakom smärta och / eller inflammation. Metoden är också väl lämpad för att undersöka effektiviteten av befintliga eller nya åtgärder – till exempel nya läkemedelskandidater – med inriktning på behandling av smärtsamma och / eller inflammatoriska tillstånd. Denna artikel kommer att ge en detaljerad beskrivning om användningen av mikrodialys tekniker för att samla in interstitiell vätska från experimentellt inflammerad hud lesion av mänskliga försökspersoner. Interstitiell vätska prover är oftast behandlas med hjälp av multiplex pärla rad immunologiska låta testmetoder för upp till 100 analyter i prover så små i volym som 50 mikroliter.
Protocol
Induktion av experimentell inflammation: En första gradens solbränna induceras i icke-solbränd hud av ett lår med hjälp av en kalibrerad, ultraviolett B-källa (Saalmann Multitester SBB LT 499, Saalmann GmbH, Hereford, Tyskland). Den solbränna induceras 24 timmar innan en mikrodialys experiment genom att tre gånger så mycket UVB-ljus krävs för att orsaka fullständig rodnad av exponerad hud, eller tre gånger den minimala erytemdos (MED). MED bestäms i varje ämne innan studiens start. Exakt levera…
Discussion
Den kombinerade användningen av mikrodialys teknik och multiplex RIA-teknik är en värdefull realtid in vivo mänskliga bioassay som ger inblick i biokemiska händelser i vävnad av intresse. Kombinerat med beteendevetenskaplig tester såsom smärta tester tillåter metoden att studera de komplexa sambanden i biokemikalier förmedla smärta och inflammation. Metoden är lovande för 1) att identifiera vävnaden specifika biomarkörer förmedla smärta och inflammation, 2) ge mekanistisk insikt i patologi inflammatoriska och kroniska smär…
Angst, M. S., Tingle, M., Schmelz, M., Carvalho, B., Yeomans, D. C. Human In-Vivo Bioassay for the Tissue-Specific Measurement of Nociceptive and Inflammatory Mediators. J. Vis. Exp. (22), e1074, doi:10.3791/1074 (2008).