Summary

Människa in vivo Biotest för vävnadsspecifika Mätning av nociceptiv och inflammatoriska mediatorer

Published: December 01, 2008
doi:

Summary

En teknik presenteras för in-vivo samling av interstitiell vätska prover från relevanta vävnad platser (här, experimentellt inflammerad hud) för mätning av biokemiska förmedla smärta och inflammation.

Abstract

Detta in vivo mänskliga bioassay kan användas för att studera frivilliga försökspersoner och patienter. Prover samlas in från relevanta vävnad platser som huden via aseptiskt in mikrodialys katetrar (Dermal dialys, Erlangen, Tyskland). Illustrerad i detta exempel är insamling av interstitiell vätska från experimentellt inflammerad hud på frivilliga försökspersoner. Provtagning kan kombineras med andra experimentella tester. Till exempel ger en samtidig bedömning av lokalt släppt biokemikalier och subjektiv känslighet för smärtsamma stimuli i experimentellt inflammerad hud den kritiska biokemiska beteendeterapi länk för att identifiera biomarkörer för smärta och inflammation. Presenteras analysen i den levande mänskliga organismen tillåter mekanistiska inblick i vävnadsspecifika processer som ligger bakom smärta och / eller inflammation. Metoden är också väl lämpad för att undersöka effektiviteten av befintliga eller nya åtgärder – till exempel nya läkemedelskandidater – med inriktning på behandling av smärtsamma och / eller inflammatoriska tillstånd. Denna artikel kommer att ge en detaljerad beskrivning om användningen av mikrodialys tekniker för att samla in interstitiell vätska från experimentellt inflammerad hud lesion av mänskliga försökspersoner. Interstitiell vätska prover är oftast behandlas med hjälp av multiplex pärla rad immunologiska låta testmetoder för upp till 100 analyter i prover så små i volym som 50 mikroliter.

Protocol

Induktion av experimentell inflammation: En första gradens solbränna induceras i icke-solbränd hud av ett lår med hjälp av en kalibrerad, ultraviolett B-källa (Saalmann Multitester SBB LT 499, Saalmann GmbH, Hereford, Tyskland). Den solbränna induceras 24 timmar innan en mikrodialys experiment genom att tre gånger så mycket UVB-ljus krävs för att orsaka fullständig rodnad av exponerad hud, eller tre gånger den minimala erytemdos (MED). MED bestäms i varje ämne innan studiens start. Exakt levera…

Discussion

Den kombinerade användningen av mikrodialys teknik och multiplex RIA-teknik är en värdefull realtid in vivo mänskliga bioassay som ger inblick i biokemiska händelser i vävnad av intresse. Kombinerat med beteendevetenskaplig tester såsom smärta tester tillåter metoden att studera de komplexa sambanden i biokemikalier förmedla smärta och inflammation. Metoden är lovande för 1) att identifiera vävnaden specifika biomarkörer förmedla smärta och inflammation, 2) ge mekanistisk insikt i patologi inflammatoriska och kroniska smär…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Microdialysis catheter Tool Dermal Dialysis NA  
Pump 22 Tool Harvard Apparatus 552219  
Saalmann Multitester SBB LT 400 Tool Saalmann GmbH NA  
RM-12 IP-65 Radiometer Tool Dr. Grobel UV Elektronik GmbH 82120000/81112100  
Complete Proteinase Inhibitor Reagent Roche Bioscience 11836145001  
Microcent tube Tool E&K Scientific 380150-X  
Albumin 5% Reagent ZLB Behring NA  
Lactated Ringer Reagent Hospira Inc NA  
Xylocaine-MPF Other Astra Zeneca NA  
Syringe 1mL Tool Becton Dickinson Co 309602  

References

  1. Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study. Pain. 139, 15-27 (2008).
check_url/1074?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Angst, M. S., Tingle, M., Schmelz, M., Carvalho, B., Yeomans, D. C. Human In-Vivo Bioassay for the Tissue-Specific Measurement of Nociceptive and Inflammatory Mediators. J. Vis. Exp. (22), e1074, doi:10.3791/1074 (2008).

View Video