Preparación de corte horizontal de la retina
Summary
Tradicionalmente, el corte vertical y la preparación de todo el montaje de la retina se han utilizado para estudiar la función de los circuitos de la retina. Aquí se describe la novela de corte método para preservar la morfología dendrítica de neuronas intactas retina.
Abstract
Tradicionalmente, el corte vertical y la preparación de todo el montaje de la retina se han utilizado para estudiar la función de los circuitos de la retina. Sin embargo, muchas de las neuronas de la retina, como las células amacrinas, ampliar sus dendritas horizontalmente, por lo que la morfología de las células se supone que es severamente dañada en los cortes verticales. En la preparación de todo el montaje, sobre todo para las grabaciones de patch-clamp, las neuronas de la retina en la capa del medio no son de fácil acceso debido a la extensa cobertura de las células gliales (células Mueller) endfeets s. Aquí se describe la novela de corte método para preservar la morfología dendrítica de neuronas intactas retina. El corte se hace horizontalmente en la capa interna de la retina, utilizando una máquina de cortar vibratome después de la retina se ha incrustado en la baja temperatura de fusión en gel de agarosa. En esta preparación corte horizontal de la retina, se estudió la función de neuronas de la retina en comparación con su morfología, mediante el uso de patch-clamp grabación, la técnica de imágenes de calcio, inmunocitoquímica, y una sola célula de RT-PCR.
Protocol
Discussion
Hay varias ventajas importantes de la preparación de corte horizontal de la retina.
En primer lugar, la morfología de las células que se expanden horizontalmente dendritas, como las células amacrinas y células horizontales, se conserva. Se ha demostrado que hay más de 20 tipos de células amacrinas de la retina (MacNeil y Masland, 1998), por lo que es muy importante comparar la morfología de las células con las propiedades fisiológicas.
En segundo lugar, en la retina de todo el montaje, la extensa cobertura de las c…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos a los Dres. Richard H. Masland y Kaneko Akimichi por darnos consejos y sugerencias para establecer el procedimiento de la preparación de corte horizontal de la retina.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Sigma | A-1296 | ||
| Agarose L | Wako | 317-01182 | Low-temperature melting agarose | |
| Hyaluronidase | Sigma | Type I-S, 300 units/mg | ||
| Medium | in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma) | |||
| Microwave | ||||
| Hot water bath | 35 C | |||
| Vibratome slicer | Leica | VT1000S | ||
| MF-Membrane filters | Millipore | HAWP01300 | Filter paper , pore size 0.45 um | |
| Dissection tools | forceps, blade, pinch, twizzer, etc. | |||
| Instant glue | eg., Alonalpha, Krazy Glu | |||
| 50 ml syringe | ||||
| syringe filter | Millipore | SX0001300 |
References
- Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells. Brain Res. , 64-73 (2004).
