Bu protokolde sıçanlarda kronik elektrofizyolojik kayıtlar için tasarlanmış bir mikro-sürücü dizi ile kullanılmak için imal ve durumu tetrodes nasıl göstermektedir. Buna ek olarak, mikro-sürücü yüklemeden yer teller ve koruyucu bir koni içeren dizi inşaat, son aşamaya göstermektedir.
Abstract
Tetrode dört elektrot, bir paket, in vivo çoklu nöronların eş zamanlı kayıt için değerli bir araç olduğunu kanıtlamıştır. Bir tetrode kanallar üzerinden aksiyon potansiyeli imzaları diferansiyel genlik çoklu ünite sinyalleri tek birim faaliyet izolasyonu sağlar. Tetrode stereotaksik yeri ve derinliği tam olarak kontrol edebilme beyin bölgeleri arasında koordineli sinirsel aktivite eğitimi için kritik öneme sahiptir. Bir mikro-drive bir dizi ile birlikte, bu hafta gün boyunca hassas yerleştirme ve birçok tetrodes istikrarlı bir kontrol elde etmek mümkündür. Bu protokol, biz imal ve temel araçları ve malzemeleri kullanarak durumu tetrodes, kronik bir çok sürücü tetrode diziye tetrodes yüklemek nasıl göstermek in vivo sıçan kayıt, mikro sürücü dizi topraklama kablosu bağlantıları yapmak, ve çevre ile fiziksel temas tetrodes korumak için koruyucu bir koni mikro sürücü dizi üzerine takın.
Protocol
1. Tetrodes imalatı Ni-krom tel, yalıtımlı poliimid, 12.5 mikron çaplı çekirdekli, 50 cm uzunluğunda bir elde bir tetrode inşaat başlayın. Yarısında tel katlayın. Onları birbirine yapışmasına çifti boyunca parmaklarınızı çalıştırın. Tel çifti tüm uzunluğu boyunca iyi bir temas var emin olun. Çifti, iki ucu bir arada tutarak tekrar katlayın. Bir ucunda oluşan döngü bükülmüş olmadığından emin olun. Dört ipuçları hizalanır ve böylece olmayan ilmekledi ucun…
Discussion
Bu protokol, iki parçalı bir protokolün ikinci taksiti: "Mikro-drive bir dizi kronik in vivo kayıt." Mikro sürücü dizi ve tetrode kombinasyonu bir uyanık aynı anda birçok nöron kayıtları elde etmek için güçlü bir araçtır, hayvan hazırlık davranıyor. Umarım, biz kendi laboratuvar elektrofizyolojik kayıtlar başlamak ya da geliştirmek için ihtiyaç için tüm gerekli bilgileri vermiş.
Motorlu tetrode twister cihaz özel tasarlandı ve üretildi. Biz, benzer…
Acknowledgements
Biz video tasvir otomatik, motorlu tetrode twister cihaz tasarımı ve inşası için Haz Yamamoto kabul etmek istiyorum. Buna ek olarak, mikro-sürücü ve laboratuarda tetrode teknoloji geliştirme katkılarından dolayı tüm geçmiş ve mevcut Wilson Lab üyeleri kabul etmek istiyorum.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Panavise
Tool
Panavise
Model 301
Holds either micro-drive array or serrated scissors
Modified Xcelite 378M Pliers
Tool
Newark
96F8903
For inserting connector board pins. To make, remove 2mm from one tip of the pliers.
Slow Cure Glue
Material
Great Planes (Champaign, IL)
GPMR6015
To glue the tetrode to the micro-drive
Gold Plating Solution
Material
Neuralynx
Sifco Selectron Gold NC
Contains gold particles for electroplating
Current Generator
Tool
World Precision Instruments
A365D-B
A.K.A. Stimulus Isolator. Used to electroplate gold solution onto electrode tips.
Impedance Meter
Tool
BAK Electronics
IMP-1 / 6662 / 2788
To check impedance of electrodes
Hot Air Gun
Tool
Steinel (Germany)
HG 3002 LCD
To fuse electrodes together to make tetrode
Accu-Tek Carbofib Tip Tweezers
Tool
Aven (Ann Arbor, MI)
18768 (Pattern 304)
For handling tetrodes
Alligator Clip
Tool
Fine Science Tools
18050-35
A.K.A. Bulldog serrefine. To clip the tetrodes together during twisting
Micro Dissecting Scissors
Tool
Biomedical Research Instruments
25-1000
For general cutting of tetrode/electrode wire
Iris Toughcut Serrated Scissors
Tool
Fine Science Tools
14058-09
For final cut of tetrodes
Teflon Coated Stainless Steel Wire
Material
A-M Systems (Carlsborg, WA)
790500
Ground wire
12.5 micron nichrome wire
Material
Kanthal Palm Coast
Rediohm-800 1/4 HARD PAC COATING
Polyimide coated micro-wire for making tetrodes.
Tetrode Twister
Tool
Neuralynx
Tetrode Assembly Station
Increases the speed and consistency of tetrode fabrication.
Silver Paint
Material
GC Electronics
22-023
For connecting the micro-electrode wires of the tetrode to the connector pins (see Discussion)
Nguyen, D. P., Layton, S. P., Hale, G., Gomperts, S. N., Davidson, T. J., Kloosterman, F., Wilson, M. A. Micro-drive Array for Chronic in vivo Recording: Tetrode Assembly. J. Vis. Exp. (26), e1098, doi:10.3791/1098 (2009).