Het meten van Caenorhabditis elegans Levensduur over Solid Media
Summary
In dit artikel geven we een algemeen protocol voor het meten van de levensduur van nematoden gehouden op vaste media met UV-gedode bacteriën voedsel.
Abstract
Veroudering is een degeneratieve proces wordt gekenmerkt door een progressieve verslechtering van de cellulaire componenten en organellen resulterend in sterfte. De nematode<em> Caenorhabditis elegans</em> Heeft zich ontpopt als een van de belangrijkste model dat wordt gebruikt om de biologie van veroudering te bestuderen. Omdat vrijwel alle biologische subsysteem ondergaat functionele achteruitgang met de leeftijd, de levensduur is het primaire eindpunt van belang bij het overwegen van totale tarief van de vergrijzing. In nematoden, is de levensduur meestal gedefinieerd als het aantal dagen dat een dierlijke resten reageren op prikkels van buitenaf. Aaltjes kan worden gepropageerd in vloeibare media of op vaste media in platen, en technieken zijn ontwikkeld voor het meten van de levensduur onder beide omstandigheden. Hier presenteren wij een algemeen protocol voor het meten van de levensduur van nematoden gehouden op vaste nematode groei media en gevoed met een dieet van UV-gedode bacteriën. Deze procedures kunnen eenvoudig worden aangepast aan de test levensduur onder verschillende voorkomende aandoeningen, waaronder een dieet bestaande uit levende bacteriën, calorische restrictie, en RNA-interferentie.
Protocol
Discussion
De genetische controle van de levensduur is uitgebreid onderzocht in C. elegans, grotendeels te danken aan het gemak en de snelheid waarmee levensduur kan worden vastgesteld. Het protocol besproken in dit artikel beschrijft een raamwerk voor het verkrijgen van reproduceerbare levensduur gegevens in C. elegans en kan ook worden toegepast op relatednematode soorten. 2 Door het maken van een aantal eenvoudige aanpassingen van deze procedures kunnen worden aangepast aan de levensduur te meten on…
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door een Glenn / verre Doorbraken in Gerontologie Award en NIH Grant 1R01AG031108-01 naar MKGS wordt ondersteund door NIH training te verlenen P30AG013280. MK is een Ellison Medical Foundation New Scholar in Aging.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0145-17-0 (214530) | |
| Ampicillin | Reagent | MidSci | 0339 | |
| BactoTryptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0123-17-3 (211705) | |
| BactoPeptone | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0118-17-0 (211677) | |
| CaCl2 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9699248 (1332-01) | |
| Carbenicillin | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | C0109 | |
| Cholesterol | Reagent | Sigma-Aldrich | C75209 | |
| Fluorodeoxyuridine (FUDR) | Reagent | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| Isopropyl β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG) | Reagent | Gold BioTechnology (GBT) | I2481C5 | |
| KPi Dibasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087862 (3252-01) | |
| KPi Monobasic | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | 5087861 (3246-01) | |
| MgSO4 | Reagent | Fisher Scientific (JT Baker) | NC9561800 (2500-01) | |
| NaCl | Reagent | Fisher Scientific | S251 | |
| Tris | Reagent | Sigma-Aldrich | T1503 | |
| Yeast Extract | Reagent | Fisher Scientific (BD Diagnostic Systems) | DF0886-17-0 (288620) |
References
- Wood, W. B., Wood, W. B. . The Nematode Caenorhabditis elegans. , 1-16 (1988).
- Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes. Exp Gerontol. 43, 130-135 (2008).
- Garigan, D. Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation. Genetics. 161, 1101-1112 (2002).
- Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 6, 525-523 (2007).
- Curran, S. P., Ruvkun, G. Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability. PLoS Genet. 3, e56-e56 (2007).
- Dillin, A. Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development. Science. 298, 2398-2401 (2002).
- Hamilton, B. A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans. Genes Dev. 19, 1544-1555 (2005).
- Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen. PLoS Genet. 1, 119-128 (2005).
- Lee, S. S. A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity. Nat Genet. 33, 40-48 (2003).
- Smith, E. D. Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans. BMC Dev Biol. 8, 49-49 (2008).
- Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS. Genetics. 91, 67-94 (1979).
- Emmons, S. W., Sternberg, P. W., Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. . C. ELEGANS II. , (1997).
- Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate. J Neurosci. 24, 7427-7434 (2004).
- Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans. Biochemistry. 21, 4089-4095 (1982).
- Klass, M. R. Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span. Mech Ageing Dev. 6, 413-429 (1977).
- Steinkraus, K. A. Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans. Aging Cell. 7, 394-404 (2008).
