Lens trapianto in Zebrafish e la sua applicazione nell'analisi dei Mutanti Eye
Summary
Lente sviluppo comporta interazioni con altri tessuti. Diversi mutanti occhio zebrafish sono caratterizzati da una dimensione lente anormalmente piccole. Qui mostriamo un esperimento di trapianto di lente per determinare se questo fenotipo è dovuto a cause intrinseche o le interazioni difettoso con tessuti che circondano l'obiettivo.
Abstract
La lente ha un ruolo importante nello sviluppo della coppa ottica [1,2]. Utilizzando il pesce zebra come organismo modello, le domande riguardanti lo sviluppo dell'obiettivo può essere affrontato. Il pesce zebra è utile per studi di genetica a causa di diverse caratteristiche vantaggiose, tra cui piccole dimensioni, ad alta fecondità, del ciclo di vita breve, e la facilità di cura. Sviluppo lente avviene rapidamente in zebrafish. Da 72 HPF, l'obiettivo zebrafish è funzionalmente maturo [3]. Abbondanti risorse genetiche e molecolari sono a disposizione per sostenere la ricerca in zebrafish. Inoltre, la somiglianza degli occhi zebrafish a quelle di altri vertebrati fornisce basi per il suo uso come un modello animale eccellente di difetti umani [4-7]. Zebrafish mutanti diversi mostrano anomalie lente, tra cui alti livelli di morte cellulare, che in alcuni casi conduce ad una completa degenerazione dei tessuti lente [8].
Per determinare se le anomalie lente sono dovuti a cause intrinseche o difettoso interazioni con i tessuti circostanti, il trapianto di un obiettivo mutante in una wild-type occhio viene eseguita. Utilizzando fuoco lucido aghi di metallo, lenti mutante o wild-type sono accuratamente sezionati dall'animale donatore, e trasferiti nell'ospite. Per distinguere i tessuti wild-type e mutanti, una linea transgenica viene utilizzato come donatore. Questa linea esprime legata alla membrana GFP in tutti i tessuti, compresa la lente. Questa tecnica di trapianto è uno strumento essenziale negli studi di mutanti lente zebrafish.
Protocol
Discussion
Diversi passaggi richiede un'attenzione particolare durante trapianti lente.
- Aghi affilati: E 'meglio preparare gli aghi diversi prima di effettuare il trapianto di lenti, e la punta degli aghi deve essere il più sottile possibile. Un ago più spesso si lacerano il tessuto più a causa del suo diametro più ampio, causando un guasto negli occhi per guarire.
- Organizzare gli embrioni: Giusto prima del trapianto è necessario posizionare gli embrioni in modo che siano coricati su un fianco. …
Acknowledgements
Questa procedura segue in larga misura la tecnica di trapianto predisposti per i pesci grotta dal laboratorio di Bill Jeffrey.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
References
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