交配との四分子の分離クラミドモナス遺伝子解析用
Summary
嵌合と四分子の分離は、遺伝子分析のために必要です。<em>クラミドモナス</em>。ここでは、配偶子形成、交尾、接合子発芽と四分子の解離の標準的な方法を示しています。このプロトコルでは、とあまり精通している科学者への遺伝的アプローチは、従順させる予定のステップのわかりやすいシリーズで構成されています<em>クラミドモナス</em>。
Abstract
単細胞緑藻<em>クラミドモナス</em>（<em>クラミドモナス</em>）は、そのシンプルなライフサイクル、遺伝学的解析のための成長と操作の容易さ、ゲノムリソース、および核の変形との両方の細胞小器官の細胞生物学と遺伝学のさまざまな分野で研究のための普及した生物となっている。遺伝学的アプローチがで使用されている場合交配株は、一般的な方法です。<em> Chlamydomonass</em>、支配の分析のための栄養二倍体を作成、または把握の核対オルガネラ継承する四分子解剖を以下、対立性をテストするために、epistasyを分析するために、またはマップベースクローニングの目的のための集団を生成するために。さらに、遺伝的交雑は日常的に特定の核の遺伝子型とオルガネラ遺伝子を組み合わせるために使用されます。ここでは、配偶子形成、交尾、接合子発芽と四分子分離のための標準的な方法を示しています。このプロトコルでは、とあまり精通している科学者への遺伝的アプローチは、従順させる予定のステップのわかりやすいシリーズで構成されています<em>クラミドモナス</em>。主要なパラメータと問題点が説明されています。最後に、さらなる情報と代替法のためのリソースが用意されています。
Protocol
Discussion
遺伝学的解析は、 クラミドモナスにシンプルですが、それは特定のテクニックは配偶子と別々の四分子の子孫を生成する必要があります。健康な株で、技術は容易に取得されます。いくつかの変異株と、それは芸術のより多くなり、読者は歴史的なメモや実用的なヒントのための最近発行されたクラミドモナスのソースブック第1巻を参照する必要があります。さらに、それは?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
このプロトコルは、研究所デBiologie物理Chimique、パリ、フランスでのフランシス=アンドレウォルマンの研究室で学んだ手法に基づいています。著者は、もともとクラミドモナス遺伝学的手法にDBSを導入したジャクリーンジラールBascou、に感謝の負債を負う。著者らの研究室でのクラミドモナスの研究は全米科学財団賞MCB – 0646350でサポートされている。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | Mating type plus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | Mating type minus strain | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | Growth medium | |||
| N10 | Growth medium | |||
| Difco agar | Reagent | |||
| Fisherbrand Stainless-Steel Blades | Tools | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD Surgical Blade Handles | Tools | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand Metal Scalpels | Tools | Fisher Scientific | 08-920A |
References
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 119-273 (2005).
