배아 쥐의 두뇌 집합의 문화 시스템을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 집계에 Multipotent progenitors 개발하고 뉴런, astrocytes 및 oligodendrocytes로 구별하실 수 있습니다.
Abstract
중추 신경계의 성숙 뉴런과 glia (CNS)에 progenitors의 recapitulates 개발과 차별화는 axo – glial 상호 작용, 속성과 multipotent progenitors의 분화, 그리고 oligodendroglial의 진행을 조사 neuroscientists위한 강력한 플랫폼을 제공하는 것이 체외 시스템 세포 및 분자 수준에서 세포 혈통. 우리는 여기 3~4주에 혈청이없는 배지에서 유지 수 있으며, 신경 세포 – glia 상호 작용과 CNS의 myelination을 연구하는 모델로 저희 연구실에서 사용되는 배아의 쥐 forebrains에서 CNS의 집계 문화 시스템을 설명합니다. 이 비디오 클립은 E16 쥐의 두뇌에서 이러한 CNS의 집계 문화를 분리하고 성장하는 방법을 보여줍니다. 또한, 동일한 뇌 해부에서 매우 풍부한 정기 dissociated의 연결을 문화가 쉽게 얻을 수 있으며, 다양한 연구에 사용 CNS의 뉴런 또는 다른 세포 공동 배양에 사용.
Protocol
절개 전에 준비 수술 도구 : 압력솥의 모든 해부 가위와 집게를 소독 Coverslip 청소 : 최소 24 H에 대한 33% HCL에 1L 잔디 비커의 모든 coverslips을 (24 잘 접시 직경 15mm) 소크 모든 잔류 HCL을 제거 가끔 흔들어 10 분 물을 실행하는 와시 Millipore 물로 헹굼 물을 배수하다 95~98% 에탄올에 coverslips 소크 플랫 ?…
Discussion
초기 연구는 시냅스 및 회전 – 중재 부유 집계 문화 1 성숙 myelin 형성을보고했다. 여기에 설명된 CNS의 집계 문화 시스템은 세포 개발, 마이 그 레이션 및 체외에서 분화의 분석을 촉진하기 위하여 전통적인 2D 문화의 편의와 입체 집계에 multipotent 전구 세포의 혈청이없는 성장을 결합한 제품입니다. 체제가 신경 전구체에 대한 수정하여 사용할 수 있습니다 세포 연구 및 신경 ?…
Koito, H., Li, J. Preparation of Rat Brain Aggregate Cultures for Neuron and Glia Development Studies. J. Vis. Exp. (31), e1304, doi:10.3791/1304 (2009).