प्रारंभिक दबाव द्वारा Gynogenetic द्विगुणित Zebrafish बनाना
Summary
यह पराबैंगनी प्रकाश निष्क्रिय शुक्राणु के साथ निषेचन के तुरंत बाद दूसरे meiotic विभाजन अवरुद्ध करके gynogenetic द्विगुणित zebrafish भ्रूण (भ्रूण जिसका केवल आनुवंशिक योगदान माँ से आता है) पैदा करने के लिए एक विधि है. EP भ्रूण पूरी तरह से homozygous पुनर्संयोजन के कारण पहली meiotic विभाजन के दौरान नहीं कर रहे हैं, लेकिन वे सभी loci कि उनके centromere से पुनर्संयोजन द्वारा अलग नहीं किया गया है homozygous हैं.
Abstract
द्विगुणित eukaryotes में Heterozygosity अक्सर आनुवंशिक अध्ययन बोझिल बना देता है. तरीकों कि विषमयुग्मजी महिलाओं से व्यवहार्य homozygous द्विगुणित वंश सीधे उत्पादन F1 mutagenized महिलाओं के लिए हानिकारक परिवर्तन के लिए सीधे आगे एक त्वरित आनुवंशिक स्क्रीन में जांच की अनुमति देते हैं. Streisinger एट अल.<sup1,2></sup> पराबैंगनी प्रकाश निष्क्रिय शुक्राणु के साथ zebrafish अंडे सक्रिय और शारीरिक (गर्मी या दबाव) उपचार है कि deploymerize सूक्ष्मनलिकाएं का उपयोग कर या तो दूसरा meiotic या पहली zygotic कोशिका विभाजन को रोकने के द्वारा gynogenetic (homozygous) द्विगुणित zebrafish बनाने के लिए तरीकों में वर्णित है. दबाव जल्दी "(EP) विधि ब्लॉक अर्धसूत्रीविभाजन II, जो निषेचन के बाद शीघ्र ही होता है. EP विधि व्यवहार्य भ्रूण के एक उच्च प्रतिशत है कि या तो सेक्स की उपजाऊ वयस्कों के लिए विकसित कर सकते हैं पैदा करता है. विधि भ्रूण कि उन है कि उनके centromere से पुनर्संयोजन द्वारा अर्धसूत्रीविभाजन मैं homozygous म्यूटेशनों EP चंगुल में centromeric loci के लिए 50% और telomeric loci के लिए कम से कम 1% के बीच पाया जाता है के दौरान अलग हो गए थे सिवाय सभी loci में homozygous कर रहे हैं उत्पन्न करता है. इस विधि शब्दशः Zebrafish बुक से reproduced है<sup> 3</sup>.
Protocol
Discussion
यह महत्वपूर्ण है को यकीन है कि इस विधि द्वारा निर्मित भ्रूण सच gynogenetic diploids हैं. नियंत्रण के रूप में, सामान्य द्विगुणित (शुक्राणु की तरफ यूवी निष्क्रियता के बिना कुछ रखने के द्वारा) अंडे और अगुणित भ्रूण (EP प्?…
Acknowledgements
Charline जॉर्ज Streisinger प्रयोगशाला में वाकर द्वारा 1970 और 1980 के दशक में ओरेगन विश्वविद्यालय में zebrafish के लिए इन विट्रो निषेचन और gynogenetic diploids में लिए तरीके विकसित किए गए. विधि यहाँ वर्णित Charline प्रोटोकॉल जो Zebrafish 3 बुक में पूर्ण में उपलब्ध हैं से अपरिवर्तित है.
Charline जॉर्ज Streisinger प्रयोगशाला में वाकर द्वारा 1970 और 1980 के दशक में ओरेगन विश्वविद्यालय में zebrafish के लिए इन विट्रो निषेचन और gynogenetic diploids में लिए तरीके विकसित किए गए. विधि यहाँ वर्णित Charline प्रोटोकॉल जो Zebrafish 3 बुक में पूर्ण में उपलब्ध हैं से अपरिवर्तित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
References
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. Genetics. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. Genetics. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
