Lisado de plaquetas humanas es una rica fuente de factores de crecimiento y un suplemento potente en cultivo celular. Este protocolo se presenta el proceso de preparación de una gran cantidad de lisado de plaquetas humanas, partiendo de plasma rico en plaquetas, la realización de varios ciclos de congelación-descongelación y el agotamiento de los fragmentos de plaquetas.
Factores de crecimiento derivados de plaquetas se ha demostrado que estimulan la proliferación celular de manera eficiente<em> In vivo</em<sup> 1,2</sup> Y<em> In vitro</em>. Este efecto se ha informado de células mesenquimales del estroma (MSC), fibroblastos y células endoteliales que forman colonias con las plaquetas activadas por la trombina<sup> 5.3</sup> O lisadas por los ciclos de congelación / descongelación<sup> 14/06</sup> Antes de la releasate plaquetas se añade al medio de cultivo celular. El efecto trófico de los factores de crecimiento derivados de plaquetas ya ha sido probado en varios estudios de ingeniería de tejidos y terapia regenerativa.<sup> 1,15-17</supEficiencia> Variación se considera al menos en parte debido a las concentraciones de forma individual divergentes de los factores de crecimiento<sup> 18,19</sup> Y la actual falta de protocolos estandarizados para la preparación de plaquetas.<sup> 15,16</sup> Este protocolo presenta un procedimiento viable para generar un conjunto de lisado de plaquetas humanas (pHPL) derivados de la producción rutinaria de plasma rico en plaquetas (PRP) de cuarenta a cincuenta donaciones de sangre única. Por varios de congelación / descongelación ciclos de las membranas de las plaquetas están dañadas y los factores de crecimiento son liberados de manera eficiente en el plasma. Finalmente, los fragmentos de plaquetas se separa por centrifugación para evitar la formación de agregados amplios y agotan los antígenos potenciales. La implementación de protocolos de cultivo en pHPL estándar representa una herramienta prometedora para el futuro desarrollo de la terapéutica de células propagadas en un animal libre de proteínas del sistema.
En algunas regiones de plaquetas en plasma rico (PRP) se puede obtener a partir de buffy-coats de lo contrario ser un producto de desecho de concentrados de la producción de glóbulos rojos a partir de donaciones de sangre analizadas (Figura 1). En condiciones óptimas, PRP se utiliza inmediatamente para su posterior elaboración de pHPL, como en las plaquetas obsoletas se concentra la disponibilidad de factores de crecimiento puede ser reducida debido a las lesiones de almacenamiento de plaquetas y la degradación <su…
Este trabajo ha sido financiado por el Austrian Research Foundation (FMF, la concesión N211-NAN para DS) y la Agencia de Promoción de la Investigación de Austria (FFG, otorgar N200 para DS). Los autores agradecen Url Claudia por su excelente asistencia técnica y Mónica Farrell para la edición lingüística.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Double bag (2 x 3.5L) | MacoPharma | VDL 8000XQ | originally for ascites puncture | |
50 mL Falcon tube | Falcon BD | 2098 | ||
50 mL Stripettes | Costar | 4501 | ||
Plasma bags (600mL) | Baxter | R4R2021 | ||
Sterile tubing welder | Terumo | TSCD-II | ||
Welding equipment | Fresenius Kabi | Compo Seal | ||
Water bath | ||||
Sterile scissors | ||||
Clamps | ||||
Centrifuge |