Dissection von 6,5 dpc muriner Embryonen

Summary

Isolation der Einnistung-Embryonen erlaubt es, Gen-Mustern zu studieren und zu analysieren Zell-Linie Entscheidungsprozesse während der embryonalen Entwicklung, aber richtigen Zergliederung des frühen Embryos kann schwierig sein. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Isolierung von Anfang primitive-Streifen-Embryonen (~ 6,5 Tage post coitum [DPC]).

Abstract

Die Analyse der Genexpression während der frühen Stadien der embryonalen Entwicklung von Säugetieren kann wichtige Hinweise auf die Funktion von Genen, Zell-Zell-Interaktion und Signalisierung Mechanismen, die Führung embryonalen Musterbildung. Allerdings kann Dissektion der Maus-Embryo aus der Dezidua kurz nach der Implantation eine herausfordernde Prozedur sein, und detaillierte Schritt-für-Schritt-Dokumentation dieses Prozesses fehlt.

Hier zeigen wir, wie nach der Implantation (6,5 DPC) Embryonen, indem Sie zuerst Sezieren der Gebärmutter einer schwangeren Maus (Erkennung des vaginalen Stecker wurde als Tag 0,5 Poist coitum) und anschließend seziert der Embryo vom mütterlichen Dezidua isoliert sind. Die Zerlegung der Reichert-Membran ist ebenso wie die Entfernung der ectoplacental Kegel beschrieben.

Protocol

Dissection der Geschlechtsorgane aus einer weiblichen Maus Trächtige Tiere werden durch CO 2 Ersticken mit Druckgas eingeschläfert. Legen Sie das Tier in Rückenlage auf saugfähige Unterlage und legen Sie ihn in 70% Ethanol, um das Risiko einer Kontamination der Präparation mit Maus Haare zu reduzieren. Pinch die Haut und machen Sie einen kleinen seitlichen Einschnitt an der Mittellinie mit regelmäßigen chirurgische Scheren. Halten Sie die Haut fest oberhalb und unterhalb d…

Discussion

Einnistung in der Maus tritt zwischen 4,5 DPC und Geburt. Diese Zerlegung Verfahren kann angewendet werden, im wesentlichen wie beschrieben, werden früher oder später zu isolieren Embryonen bei 5,5-8,5 dpc.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Micro Dissecting Forceps serrated, straight	Tool	Roboz	RS-5130	2 pairs
Micro Dissecting Tweezers Pattern #55 INOX	Tool	Roboz	RS-5010	2 pairs
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1X)	Reagent	Invitrogen	14190
Fisherbrand Sterile Polysytrene Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-757-12
4% Paraformaldehyde in PBS	Reagent
Straight Sharp-Pointed Dissecting Scissors	Tool	Fisher Scientific	08-940
Pregnant female mice	Animal
Dissecting Microscope	Microscope