Un Reporter Novel RFP per aiutare nella visualizzazione del Disco Eye immaginale in Drosophila</em

Summary

Descriviamo un romanzo rosso proteina fluorescente (RFP), giornalista che si esprime in particolare nella<em> Drosophila</em> Occhio. Noi dettaglio una metodologia per la dissezione del disco occhio immaginale e come questo giornalista può essere utilizzato per facilitare la dissezione e l'identificazione di specifici tipi cellulari negli occhi di sviluppo.

Abstract

Il<em> Drosophila</emOcchio> è un sistema potente modello per lo studio di settori come la trasduzione del segnale neurogenesi, e neurodegenerazione. Molte delle scoperte fatte con questo sistema hanno approfittato della natura spazio-temporale di differenziazione dei fotorecettori nel disco occhio sviluppo immaginale. Per utilizzare questo sistema è necessario in primo luogo per il ricercatore di imparare a identificare e analizzare il disco occhio. Descriviamo un reporter romanzo RFP per aiutare nella identificazione del disco occhio e la visualizzazione di specifici tipi cellulari negli occhi di sviluppo. Noi dettaglio una metodologia per la dissezione del disco occhio immaginale dalla terza larve instar e descrivere come l'occhio-RFP giornalista può aiutare in questo dissezione. Questo occhio-RFP giornalista è espresso solo negli occhi e può essere visualizzato usando la microscopia a fluorescenza sia nel tessuto vivo o dopo la fissazione senza la necessità di amplificazione del segnale. Abbiamo anche mostrare come questo giornalista può essere utilizzato per identificare i tipi specifici di cellule all'interno del disco occhio. Questo protocollo e l'uso degli occhi-RFP giornalista sarà di aiuto ricercatori che utilizzano il<em> Drosophila</em> Occhio di affrontare le questioni biologiche di fondamentale importanza.

Protocol

<ol><li> Primo posto una goccia di PBS su un piatto Sylgard sotto un microscopio da dissezione.</li><li> Avanti rimuovere diversi larve erranti instar terzo da un flacone o bottiglia con una spatola e metterli in PBS.</li><li> Per iniziare la dissezione usare la pinzetta mano sinistra (se siete di mano destra) di cogliere una larva due terzi del cammino verso la parte posteriore e quindi utilizzare l'altra coppia per tenere la bocca ganci scuro di colore alla fine anteriore.</li><li> Ora estrarre delicatamente la lar…

Discussion

Dissezione del disco occhio Drosophila immaginale è semplice, ma può richiedere tempo per padroneggiare. I passi fondamentali sono l'identificazione del disco occhio e la sua dissezione lontano dal cervello larvale. L'identificazione del disco occhio è reso più facile con l'occhio-RFP linea descritta qui. Eventuali modifiche devono rimuovere il disco antennali o la membrana peripodial, o di lasciare il lobo ottico collegato a visualizzare gli assoni PR entrare nel cervello.

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