脑血氧测量基于磷光氧依赖淬火
Summary
我们提出了一个基于磷光氧依赖淬火脑血管的氧分压（PO2）测量的实验过程。动物准备和成像过程概述了两个大的领域的观点基于CCD成像PO2在大鼠和双光子激发的小鼠PO2成像。
Abstract
监测脑血流和组织氧合的时空特征是为更好地理解代谢的神经血管的关系是至关重要的。新氧分压PO2同步监测的角度较大的领域，具有较高的空间和/或时间分辨率的测量方式的发展将使到正常的大脑的运作有更深的了解，也将产生重大影响，如神经血管疾病的诊断和治疗中风，阿尔茨海默氏症，和头部受伤。
光学成像方式，都表现出很大的潜力，提供高时空分辨率和PO2定量成像，在可见光和近红外光谱范围内的血红蛋白吸收的基础上。然而，多光谱测量脑血氧依赖通过高散射脑组织中光子迁移。组织光学参数，在实验过程中可能发生的动态变化的估计和建模，通常需要为准确估计血氧。另一方面，估计的氧分压（PO2）基于磷光氧依赖淬火应不显着影响，在组织光学参数的变化，并提供了一个绝对的PO2措施。利用氧敏感染料的实验系统已被证明在体内灌注组织的研究以及监测在组织培养中的氧气含量，表明磷光淬火是一个强有力的技术，能够准确的氧气成像PO2在生理范围。
在这里，我们展示了两种不同的成像方式如何执行上的磷光寿命成像的皮层血管PO2测量。在第一个示范，我们目前在老鼠的皮质表面的角度宽视场成像PO2。这种成像方式比较简单的实验装置，基于CCD相机和一个脉冲的绿色激光。监测的皮层扩散性抑制，基于Oxyphor R3的染料的磷光寿命的一个例子。在第二个演示中，我们提出了一个高分辨率的双光子PO2在皮质鼠标的微型血管成像。实验装置包括一个定制的双光子显微镜，飞秒激光，电光调制器，光子计数光电倍增管。我们目前的成像例如皮质微血管包括毛细血管氧分压异质性，使用新型具有增强PTP – C343染料的双光子激发截面。
点击这里查看相关文章的合成与氧在生物系统成像的磷光纳米探针的校准。
Protocol
Discussion
我们证明了两个PO2皮质微血管的基础上磷光氧依赖淬火的测量应用。虽然基于CCD成像的第一种方法提供广泛的领域观点氧分压监测，测量皮质微血管的氧气分压双光子显微镜的基础上提供了毛细血管的决议，并允许在深度成像。这两种方法提供高速度和高信号噪声的测量。此外，PO2磷光寿命测量主要是在实验过程中，这通常是其他光学成像技术，有一个对比机制的基础上强度的关注，在组织光学?…
Acknowledgements
我们要感谢美国国家卫生赠款R01NS057476，P50NS010828，P01NS055104，R01EB000790，K99NS067050，R01HL081273和R01EB007279和美国心脏协会授予0855772D研究院的支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glycopyrrolate | Reagent | American Regent Inc. | NDC 0517-4605-25 | Used to control pharyngeal, tracheal, and bronchial secretions. |
| Lidocaine HCL | Reagent | Hospira Inc. | NDC 0409-4277-01 | Used as the local anesthesia during surgeries. |
| Isoflurane | Reagent | Baxter Healthcare Corp. | NDC 10019-360-40 | Used as a general inhalation anesthetic drug during surgeries and as a general anesthesia during experiments with mice. |
| Alpha Chloralose | Reagent | Sigma | C0128 | Used as a general anesthesia during experiments with rats. |
| Fluorescein isothio-cyanate–dextran | Reagent | Sigma | FD2000S | Administrated to create ~ 500 nM concentration in blood. |
References
- Kleinfeld, D., Friedman, B., Lyden, P. D., Shih, A. Y., Chen, J., Xu, Z., Xu, X., Zhang, J. Targeted occlusion to surface and deep vessels in neocortex via linear and nonlinear optical absorption, Animal Models of Acute Neurological Injuries. Contemporary Neuroscience Series. , (2007).
- Mostany, R., Portera-Cailliau, C. A Craniotomy Surgery Procedure for Chronic Brain Imaging. J Vis Exp. , (2008).
- Lebedev, A. Y., Cheprakov, A. V., Sakadzic, S., Boas, D. A., Wilson, D. F., Vinogradov, S. A., A, S. Dendritic Phosphorescent Probes for Oxygen Imaging in Biological Systems. Applied Materials & Interfaces. , (2009).
- Finikova, O. S., Lebedev, A. Y., Aprelev, A., Troxler, T., Gao, F., Garnacho, C., Muro, S., Hochstrasser, R. M., Vinogradov, S. A. Oxygen microscopy by two-photon-excited phosphorescence. Chemphyschem. 9, 1673-1679 (2008).
- Sakadžić, S., Yuan, S., Dilekoz, E., Ruvinskaya, S., Vinogradov, S. A., Ayata, C., Boas, D. A. Simultaneous imaging of cerebral partial pressure of oxygen and blood flow during functional activation and cortical spreading depression. Appl Opt. 48, D169-D177 (2009).
- Yaseen, M. A., Srinivasan, V. J., Sakadzic, S., Wu, W., Ruvinskaya, S., Vinogradov, S. A., Boas, D. A. Optical monitoring of oxygen tension in cortical microvessels with confocal microscopy. Opt Express. 17, 22341-22350 (2009).
- Sakadzic, S., Roussakis, E., Yaseen, M. A., Mandeville, E. T., Srinivasan, V. J., Arai, K., Ruvinskaya, S., Devor, A., Lo, E. H., Vinogradov, S. A., Boas, D. A. Two-photon high-resolution measurement of partial pressure of oxygen in cerebral vasculature and tissue. Nat Methods. 7, 755-759 (2010).
